BAB III

METODE PRAKTIKUM
A. ALAT DAN BAHAN
1) Alat
 Beker Glass
 Erlenmeyer
 Autoclave
 Incubator
 Tabung reaksi
 Rak tabung
 Ose bulat dan lurus
 Neraca Analitik
 Hot plate
 Batang Pengaduk
 Gelas ukur
2) Bahan
 Media bubuk (LB, EC Broth, APW, TCBSA,SSA, Endo Agar,
AC, MC, KIA, MIO, MR, VP, SCA, UREA, LIA, AC, BA)
 Aquadesh
 Sampel (Feses)
 KOH
 Alfanaftol
 Reagen erlich

B. PROSEDUR KERJA
I. Pembuatan media NA, MC, BA, KIA, MIO, MR, VP, SCA, UREA, LIA
1) Disiapkan alat yang akan disterilisassikan diaautoclave selama 15 clave
utmenit dengan suhu 1210c
2) Rumus penimbangan media
X gram= gram x V2 ÷ 1000
3) Ditimbang media NA: 120 ml, MC:130 ml, BA: 130 ml, dan KIA: 70 ml,
MIO: 183 ml, MR: 183 ml, VP:157 ml, SCA:616 ml , UREA: , LIA 216
ml
4) Ditimbang:
 NA 0,72, dan ukur pH aquadest 7,00 kemudian dicampurkan pada
erlenmeyer dan letakan diiatas hotplet sampai terlihat uap pada
media tersebut
 MC:0,78 dan ukur pH aquadest 7,00 kemudian dicampurkan pada
erlenmeyer dan letakan diiatas hotplet sampai terlihat uap pada
media tersebut
 BA: 0,78 dan ukur pH aquadest 7,00 kemudian dicampurkan pada
erlenmeyer dan letakan diiatas hotplet sampai terlihat uap pada
media tersebut
 KIA: 0,84 dan ukur pH aquadest 7,00 kemudian dicampurkan pada
erlenmeyer dan letakan diiatas hotplet sampai terlihat uap pada
media tersebut
 MIO: 1,1 dan ukur pH aquadest 7,00 kemudian dicampurkan pada
Erlenmeyer dan letakan diiatas hotplet sampai terlihat uap pada
media tersebut
 MR: 1,1 dan ukur pH aquadest 7,00 kemudian dicampurkan pada
erlenmeyer dan letakan diiatas hotplet sampai terlihat uap pada
media tersebut
 VP: 0.94 dan ukur pH aquadest 7,00 kemudian dicampurkan pada
erlenmeyer dan letakan diiatas hotplet sampai terlihat uap pada
media tersebut
 SCA: 3,7 dan ukur pH aquadest 7,00 kemudian dicampurkan pada
erlenmeyer dan letakan diiatas hotplet sampai terlihat uap pada
media tersebut
  LIA: 1,3 BA: 0,78 dan ukur pH aquadest 7,00 kemudian
dicampurkan erlenmeyer dan letakan diiatas hotplet sampai terlihat
uap pada media tersebut.
 BA: 0,78 BA: 0,78 dan ukur pH aquadest 7,00 kemudian
dicampurkan erlenmeyer dan letakan diiatas hotplet sampai terlihat
uap pada media tersebut
5) Kemudian media ( KIA, MIO, MR, VP, SCA LIA UREA) dituangkan
kedalam tabung reaksi. Pada tabung UREA, KIA, dan LIA dimiringkan
sedangkan pada media (NA, MC, BA) dituangkan kedalam cawan petri
kemudian didiamkan, setelah itu dibungkus dengan kertas dan dimasukan
kedalam autoclave untuk disterilisasikan selama 15 menit dengan suhu
1210c.
II. Isolasi sampel Swab kulit ke media
a. Hari pertama
 Isolasi dan identifikasi bakteri dari dahak
1. Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan
2. Diambil sampel sebanyak 0,5 ml feses.
3. Dan diisolasikan pada media LB, APW dan EC Broth.
4. Media diinkubasi dalam incubator selama 1x24 jam dalam 37oC.
b. Hari ke-dua
 Diinokulasi bakteri yang telah tumbuh :
1. Bakteri yang telah tumbuh pada ketiga media kemudian dipilih salah
satunya lalu diinokulasikan pada media MC, TCBSA, Endo Agar dan
SSA.
2. Diinkubasi dalam incubator selama 1x24 jam dengan suhu 370c
 Pewarnaan Gram :
1. Bakteri hasil inokulasi yang telah tumbuh pada media MC, TCBSA,
Endo Agar dan SSA dilakukan pewarnaan gram.
a) Dimbil 1-2 koloni letakan pada objek glass difiksasi pada api Bunsen
 b) Ditambahkan 1-2 tetes gention violet (diamkan 3 menit) kemudian
dicuci dengan air mengalir
c) Ditammbahkan 1-2 tetes lugol (diamkan 1 menit) kemudiaan dicuci
d) Ditambahkan 1-2 tetes aqudest 96% kemudian dicuci dengan air
mengalir
e) Ditambahkan 1-2 tetes air fuksin (diamkan 1 menit) kemudian dicuci
dengan air mengalir
f) Dikeringkan dan diamati dibawah mikroskop (40X dan 100X)
2. Jika bakteri gram positif coccus maka dilanjutkan dengan uji katalase
dan ditanamkan pada media MSA.
c. Hari ke-empat
1. Hasil inokulasi hari ke tiga dari media SSA dan Endo Agar
diinokulasikan pada media TSIA/KIA.
2. Dengan menggunakan ose lurus masing-masing koloni dari Media
SSA dan Endo Agar di inokulasikan ke media TSIA
3. Koloni digores pada permukaan lereng media dan ditusuk pada
bagian dalam media.
4. Setelah itu media diinkubasikan pada inkubatur selama 24 jam
dengan 37oC.
d. Hari ke-empat
 Diamati hasil dari media SSA, dan Endo Agar pada media TSIA. Dan
inokulasi bakteri ke media IMVIC uji Biokimia.
1. Diinokulasikan bakteri ke media MIO, MR, VP, SCA, LIA, dan
UREA.
2. Diambil pertumbuhan bakteri yang terdapat pada media KIA dan
diinokulasi pada media MIO, MR, VP, SCA, LIA, UREA. Pada media
dengan menggunakan ose bulat
3. Diinkubasi diinkubator selama 1x24 jam dengan suhu 370c
e. Hari ke-Lima
Pengamatan pada uji biokimia, dilihat hasil dari uji kimia bakteri.
 BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. HASIL
a. Hari ke-2
Nama media Ciri-ciri pertumbuhan bakteri
LB Keruh
APW Keruh
EC BROTH Keruh
b. Hari ke-3
Hasil Inokulasi bakteri ke media MC, TCBSA, SSA, Endo Agar setelah
diinkubasi 24 jam 37oC
Nama Media Ciri-ciri pertumbuhan Koloni
MC Bulat Berkooloni
TCBSA Koloni Menyebar
SSA Bulat
Endo Agar Bulat berkoloni (Metalik)

Hasil Pewarnaan Gram :

Media Gram Gram Positif
Negatif
MC Basil (-)
TCBSA Coccus (+)
SSA Basil (-)
Endo Agar Basil (-)

c. Hari ke-4
Pengamatan pada mediaTSIA dari meida MC dan BA

Nama Ciri-ciri pertumbuhan bakteri pada

 Media KIA/TSIA
Slunt Butt Gas H2S
Endo Agar Acid Acid + -
SSA Acid Acid -
d. Hari ke-5
Nama Media Hasil
SSA Endo Agar
MIO
a) Motiliy + +
b) Indol (-/+) +
c) Ornihine + +
MR + +
VP - -
SCA - + (-)
UREA - -
LIA + +
B. GAMBAR
1. Hari pertama
2.