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I. INFORMACIÓN GENERAL
II. SUMILLA
La especialidad Microbiología y Parasitología, brinda conocimientos básicos de los
microorganismos patógenos y su relación con el huésped humano, esencial para entender los
procesos infecciosos y parasitarios que generan problemas de salud en el ser humano. Se
desarrolla en el quinto semestre académico con los siguientes contenidos:
CONTENIDO
COMPETENCIA TIEMPO
CONCEPTUALES PROCEDIMENTALES ACTITUDINALES
Trabajo en
equipo;
participación
Identifica en los activa;
Etapas. Evolución de la preparados en fresco, responsabilidad;
Conoce y analiza las microbiología. Bacterias: técnicas de coloración confianza en lo
bases de la teoría Taxonomía. Estructuras. y microscopía, la que aprende.
celular microbiana. Metabolismo. Curva de presencia, motilidad y Respeto mutuo
Define y describe las entre
crecimiento. Factores de morfología de la
características de compañeros, con
estructura, virulencia, toxinas. célula microbiana. sus profesores y 2 semanas
disposición de la Genética bacteriana: Aplica técnicas de autoridades de la (03-04-
célula y lo relaciona Transformación, cultivo demostrando universidad. 2017 al
con su morfología y transducción, el metabolismo y su Valoración de los 17-04-
comportamiento. conjugación. crecimiento en conocimientos 2017)
Diferencia los aprendidos y
Transposones. medios de cultivo,
mecanismos reconocimiento
metabólicos y Mecanismos de acción considerando tiempo de la importancia
genéticos de las de los agentes y la temperatura. de los mismos en
bacterias según su antimicrobianos y Antibacterianos: el desempeño de
clasificación. resistencia microbiana.. mecanismo de acción la carrera
difusión y dilución
Describe la infección
clínica en el humano Base anatómica de la
y sus mecanismos Aplica metodologías
respuesta inmune.
patógenos y diagnósticas a través
Barreras mecánicas.
establece la de procedimientos
respuesta inmunitaria Mecanismos humorales
inmunológicos, como: 2 semanas
a través de factores específicos y celulares
Reacciones de (18-04-
celulares específicos inespecíficos.
aglutinación. 2017 al
e inespecíficos. Mecanismos de
Isohemaglutininas. 03-05-
Comprueba y explica inmunidad innata.
Rx. De precipitación 2017)
cómo puede
Autoinmunidad
evidenciarse y (RPR/VDRL) Rx.
medirse en un Hipersensibilidad: I, II, III
Inmunoenzimática.
proceso infeccioso. y IV. Inmunodeficiencias
SEGUNDA UNIDAD: BACTERIOLOGÍA ESPECIAL
CONTENIDO
TIEMPO
CONTENIDO
COMPETENCIA TIEMPO
CONCEPTUALES PROCEDIMENTALES ACTITUDINALES
Propiedades generales
de los virus clasificación,
diagnóstico, patogenia y
control de enfermedades
Identifica los
virales. Agentes:
principales virus que Aplica metodologías
se evidencian en Citomegalovirus. Virus
para el aislamiento de
nuestro medio. Epstein Barr.
virus y el estudio
Explica la patogenia y Enterovirus, Rhinovirus,
control de las lisogénico. Establece
Adenovirus. Hepatitis.
enfermedades virales. procedimientos Trabajo en
Paramixovirus-
Clasifica las vacunas diagnósticos de equipo;
Rubéola/SIDA. Vacunas
bacterianas y virales acuerdo a las participación
empleadas en la empleadas en Perú en la activa;
enfermedades virales
prevención de prevención de responsabilidad;
en el huésped
enfermedades. Enfermedades. confianza en lo
humano. Diferencia
Reconoce y describe Importancia de la que aprende.
las formas y estructuras micóticas- Respeto mutuo 2 semana
micología clínica: (08-06-
estructuras de las patógenas de aquellas entre
Clasificación, 2017 al
células eucarióticas- otras que no lo son, compañeros, con
diagnóstico. Micosis 21-06-
micóticas. Establece con procedimientos sus profesores y
la clasificación e superficiales: autoridades de la 2017)
de diagnóstico en (SEGUNDO
Importancia de la Dermatofitosis. universidad.
laboratorio. Toma de PARCIAL)
micosis en el huésped Candidiasis. Pitiriasis. Valoración de los
humano, así como muestra, (raspado). conocimientos
Micosis subcutáneas:
también las Preparados en fresco aprendidos y
Esporotricosis.
relacionadas con el con KOH al 4%. Vistas reconocimiento
Eumicetoma.
medio ambiente. microscópicas e de la importancia
Actinomicetoma. Micosis
Establece la identificación a partir de los mismos en
clasificación e sistémicas por Hongos el desempeño de
de organismos puros
Importancia de las verdaderos: la carrera
aislados en laboratorio
micosis en el huésped Histoplasmacapsulatum.
humano, así como a partir de muestras
Paracoccidiodesbrasilens
también las de pacientes. (Cepas)
is. Micosis sistémica por
relacionadas con el
hongos oportunistas:
medio ambiente.
Cándida sp.
Criptococcusneoformans.
Aspergillus fumigatus. A.
flavus.
CONTENIDO
COMPETENCIA TIEMPO
CONCEPTUALES PROCEDIMENTALES ACTITUDINALES
Diferencia micro y
Parásitos, características
morfológicas y macroparásitos
clasificación. Protozoarios patógenos de los no
Intestinales: Amebiasis: patógenos, a través
Entamoevahystolítica. de procedimientos de
Reconoce, Clasifica y Amebas no patógenas. diagnóstico en
diferencia agentes Flagelados Intestinales: laboratorio. Establece
parasitarios de origen GiardialambliaFlagelados procedimientos
no patógenos. Ciliados:
intestinal y de otras analíticos para
Balantidiasis:
cavidades. Identifica alcanzar un
Balantidiumcoli.
especies parasitarias Trichomoniasis. diagnóstico definitivo,
de origen hemático- Esporozoarios Intestinales: a través de: Examen
tisular. Observa, Isosxporasarcocystis. de heces,
analiza y establece la Criptosporidium. macroscópico y
importancia que Cyclosporamicrosporidium. microscópico. Trabajo en
evidencian los ciclos Esporozoarios Hemáticos y Métodos de equipo;
evolutivos, según Tisulares: Concentración o participación
Plasmodiumvivax. P. activa;
zona de infección e enriquecimiento: 1.
falciparum, P. malarie. responsabilidad;
infestación. Explica la Sedimentación. 2.
Toxoplasma confianza en lo
importancia que tiene gondiiHemoflagelados: Flotación. Métodos
que aprende.
el estudio Leishmaniasis. Especiales: 1. Respeto mutuo 2 semana
antropológico en Tripanosomiasis. Helmintos: Baerman. 2. entre (22-07-
medicina, Nematodos. Áscaris Sedimentación rápida compañeros, con 2017 al
identificando especies lumbricoides. de Kouri. 3. Kato- sus profesores y 31-08-
de importancia Enterobiusvermicularis. Katz, cuantitativo y autoridades de la 2017)
médica. Explica la Trichuristrichiura. cualitativo. 4. Test de universidad. TERCER
Anquilostoma duodenale. Valoración de los PARCIAL
importancia que Graham. Examen de
Necatoramericanus. conocimientos
presentan las sangre: Gota gruesa. aprendidos y
Tremátodos: Fasciola
estructuras, hepática. Examen de reconocimiento
características y Clonorchissinensis. secreciones y otros de la importancia
metabolismo del CestodosTaeniasaginata. líquidos: Secreción de los mismos en
parásito para Taeniasolium, Cisticercosis. vaginal/uretral. el desempeño de
establecer un Hidatidosis, Secreción gástrica. la carrera
tratamiento con Diphyllobotriasis, Entero-test. Biopsia.
antiparasitarios. Hymenolepiasis. Anticuerpos
Artrópodos: Transmisores
Establece medidas de monoclonales.
de Enfermedades: Pulgas y
acción y seguimiento Reconoce que la
Piojos, Arácnidos.
para establecer un Loxoceles lacta. Especies diferenciación
diagnóstico a través que causan Miasis. Clase macroscópica es de
de la cadena Insecta: Triatoma infestans. interés para
epidemiológica. Chinces. Culexpipiens establecer las
“mosquito” Myasis: características del
Chlacomia. Dermatobia. agente causante de
Xenopsilacheopis “pulga”. proceso de
Pediculoshumanus “piojo”.
infestación en el
Sarcoptesscabie “sarna”.
huésped.
IV. CALENDARIZACIÓN DEL APRENDIZAJE DURANTE EL CICLO ACADÉMICO
Sem
Fecha Hora Tema Docente
ana
Clase inagural:Presentación de silabus
4-5.30 Etapas. Evolución de la microbiología.
Dr. Ciro Rodriguez
Bacterias: Taxonomía. Estructuras.
pm Metabolismo. Curva de crecimiento.
Aliaga.
03-04-2017 Factores de virulencia, toxinas.
1 al 12-04- 4-5.30 Mecanismos de acción de los agentes
2017 Dr. Raúl Montalvo Otivo
pm antimicrobianos.
7-8.30am Practica Dr. Raúl Montalvo Otivo
7-8.30am Practica. Dr. Raúl Montalvo Otivo
4-5.30
13-04-2017 Resistencia microbiana. Dr. Raúl Montalvo Otivo
pm
al 19-04- 4-5.30 Base anatómica de la respuesta inmune. Mg. Raúl Montalvo
2
2017 pm Innato y adquirido. Otivo
7-8.30am Practica. Dr. Raúl Montalvo Otivo
Sem
Fecha Hora Tema Docente
ana
Parásitos, características morfológicas y
clasificación. Protozoarios Intestinales:
4-5.30 Amebiasis: Entamoeva hystolítica.
pm Amebas no patógenas. Flagelados
Intestinales: Giardia lamblia Flagelados no
15-06-2017 patógenos.
14 al 21-07- Ciliados: Balantidiasis: Balantidium coli. Dr. Raul Montalvo Otivo
2017 4-5.30 Trichomoniasis. Coccidios Intestinales:
pm Cystoisospora., microsporidium,
Criptosporidium. Cyclospora.
7-8.30am Práctica y seminario
7-8.30am Práctica y seminario
Esporozoarios Hemáticos y Tisulares:
22-07-2017 Plasmodium vivax. P. falciparum, P.
4-5.30
15 al malarie. Toxoplasma gondii Dr. Raúl Montalvo Otivo
pm Hemoflagelados: Leishmaniasis.
28-07-2017
Tripanosomiasis. Helmintos: Nematodos.
Áscaris lumbricoides. Enterobius
vermicularis. Trichuris trichiura.
Anquilostoma duodenale. Necator
americanus. Tremátodos: Fasciola
hepática. Clonorchis sinensis
4-5.30
Practica y seminario
pm
7-8.30am Practica y seminario
Cestodos Taenia saginata. Taenia solium,
Cisticercosis. Hidatidosis, Diphyllobotriasis,
4-5.30 Hymenolepiasis. Artrópodos: Transmisores
pm de Enfermedades: Pulgas y Piojos,
29-07-2017 Arácnidos. Loxoceles lacta. Especies que
al causan Miasis. Clase Insecta.
Dr. Raúl Montalvo Otivo
16 y 31-07-2017 7-8.30am Practica y seminario
17
7-8.30 am Practica y seminario
TERCER PARCIAL
En la carrera de medicina existen técnicas educativas que se utilizan y son comunes a todos los
módulos como:
Clases Magistrales: De uso racionalizado y de acuerdo con los contenidos del módulo, dictadas
por docentes con óptimas habilidades pedagógicas y que disponen de los elementos necesarios
de apoyo tecnológico (buen discurso pedagógico, equipo audiovisual, simuladores y otros). Las
clases magistrales cumplen el rol de dar a conocer, la experiencia de las investigaciones o el
desempeño del profesor en relación con el tema y la bibliografía revisada, a fin de incentivar el
diálogo entre los agentes educativos (profesores y estudiantes)
El discurso pedagógico del profesor (texto oral) es la base para el aprendizaje de los
contenidos conceptuales y herramienta fundamental para la generación del conocimiento,
desarrolla los contenidos de las unidades de aprendizaje del módulo, con la participación
activa del estudiante en todas las actividades académicas programadas. Los profesores
como promotores del diálogo establecen el grado de preparación del estudiante, la solución
de sus dudas, corrección de sus errores, así como la utilización y obtención de la bibliografía
actualizada del módulo. El discurso del profesor complementará los conocimientos que los
estudiantes han adquirido previamente en la fase no presencial de su aprendizaje, al
consultar la bibliografía recomendada por el profesor antes de desarrollar el contenido de la
clase.
Los problemas tienen como base un caso clínico donde se pueda aplicar lo que se aprendió en
los contenidos de las especialidades del módulo y de los semestres académicos anteriores, se
contará además con el asesoramiento de profesores de los módulos de especialidades clínicas,
diagnóstico por imágenes y laboratorio.
Planteado el caso clínico, los estudiantes con el asesoramiento permanente del profesor
identificarán el problema a través del estudio de los síntomas y signos que se encuentran
en la historia clínica seleccionada.
Identificado el problema los estudiantes asesorados por los profesores, buscaran toda la
bibliografía posible sobre el problema para ser discutida en una segunda sesión, donde se
planteará una hipótesis diagnóstica.
En esta parte del aprendizaje el profesor deja a cada grupo de estudiantes la tarea de
sistematizar todos los conocimientos que han adquirido en las clases teóricas y prácticas
que recibieron durante el desarrollo del módulo, reconocer la relación importante que tienen
esos conocimientos y su aplicación en el estudio de los casos clínicos
Concluido el proceso se realiza una plenaria con todos los grupos de estudio donde se
discute cada caso y en presencia de los expertos que son los profesores invitados quienes
aportaran de su experiencia los conocimientos finales para relacionar los conocimientos
aprendidos en el módulo con la solución de los problemas que fueron planteados como casos
clínicos.
Finalmente cada grupo recibirá una calificación que será considerada como la nota de la
competencia adquirida en el módulo.
Se tiene en cuenta que la profundidad del aprendizaje que el estudiante está obligado a conocer,
es de nivel inicial, pudiendo por cuenta propia abarcar mayor profundidad de acuerdo con su
capacidad de aprendizaje para alcanzar la calificación de excelente. La competencia esperada
al finalizar el módulo es, lograr que el estudiante se sienta capaz de relacionar lo aprendido, con
el caso clínico estudiado y descubra la importancia que tiene conocer las ciencias básicas, en la
solución de los problemas clínicos en medicina.
Medios educativos: Textos: texto oral (discurso académico del profesor), Textos escritos (libros,
esquemas). Textos interactivos virtuales (hipertextos, página web personal.).
Materiales: aula de clases y laboratorio de prácticas, silabo, pizarra, guías de práctica, folletos,
textos de consulta, texto auto instructivo, reactivos y materiales de laboratorio, software para las
especialidades que lo requieran.
Con el fin de estimar y cuantificar el grado alcanzado en el logro de las competencias, se procede
del modo siguiente:
Nota final: la suma de las notas de los parciales y evaluaciones teóricas dividida
entre tres
La solución a las preguntas de las evaluaciones realizadas, será dada a conocer al estudiante,
inmediatamente después de haber culminado el examen y las notas de la pruebas durante
las primeras 24 horas posteriores al examen. Una vez revisada la prueba el estudiante firmará
su conformidad, no habiendo lugar a reclamo alguno
La línea de autoridad seguida para los reclamos de tipo académico, administrativo es:
1. El coordinador de la Asignatura
2. Presidente de Asuntos Académicos
3. El Jefe de Departamento Académico
4. Consejo de Facultad
---------------------------------------------------------------------
Mg. Raúl Montalvo Otivo
PROFESOR RESPONSABLE
………………………………………………………….
Mg. ALFREDO RAMIREZ CONTRERAS
----------------------------------------------------
Dr. MAGUÍN MARQUEZ TEVES
SECRETARIO DOCENTE
-----------------------------------------------------
Dr Víctor Fernández Torres
DECANO
Huancayo – Perú
2017 – I
Contenido
PRÁCTICA # 1 ........................................................................................................................... 21
MICROSCOPÍA ......................................................................................................................... 21
1.1.1.1. OBJETIVO ......................................................................................................... 21
1.1.1.2. INTRODUCCIÓN ............................................................................................... 21
1.1.1.3. EL MICROSCOPIO............................................................................................. 21
1.1.1.4. MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ................................................................ 22
1.1.1.5. MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES .............................................................. 23
1.1.1.6. ACTIVIDADES ................................................................................................... 24
PRÁCTICA # 2 ........................................................................................................................... 24
TÉCNICAS DE TINCIÓN ............................................................................................................. 24
1.1.1.7. OBJETIVO ......................................................................................................... 24
1.1.1.8. GENERALIDADES.............................................................................................. 25
1.1.1.9. TINCIÓN DE BACTERIAS ................................................................................... 25
1.1.1.10. TIPOS DE TINCIÓN ........................................................................................... 25
1.1.1.11. TINCIÓN SIMPLE .............................................................................................. 26
1.1.1.12. TINCIÓN NEGATIVA ......................................................................................... 26
1.1.1.13. TINCIÓN DE GRAM .......................................................................................... 27
1.1.1.14................................................................................................................................ 27
1.1.1.15. TINCIÓN DE ESPORAS ...................................................................................... 27
PRACTICA # 3 ........................................................................................................................... 30
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO ................................................................................. 30
OBJETIVO ............................................................................................................................. 30
1.1.1.16. GENERALIDADES.............................................................................................. 31
1.1.1.17. CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO ................................................. 31
1.1.1.18. MEDIOS DE CULTIVO DESHIDRATADOS .......................................................... 32
PRÁCTICA # 4 ........................................................................................................................... 33
MORFOLOGÍA DE LAS COLONIAS BACTERIANAS..................................................................... 33
OBJETIVO ............................................................................................................................. 33
GENERALIDADES.................................................................................................................. 34
PRÁCTICA # 5 ........................................................................................................................... 38
PRUEBAS BIOQUÍMICAS .......................................................................................................... 38
OBJETIVO ................................................................................................................................. 38
PRÁCTICA # 6 ........................................................................................................................... 42
CONTROL BACTERIANO POR MEDIO DE AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS ............................... 42
OBJETIVO ............................................................................................................................. 42
1.1.1.19. GENERALIDADES.............................................................................................. 42
1.1.1.20. RADIACIÓN ULTRAVIOLETA ............................................................................. 42
1.1.1.21. TEMPERATURA ................................................................................................ 42
1.1.1.22. DESINFECTANTES............................................................................................. 43
PRÁCTICA # 7 ........................................................................................................................... 47
OBSERVACIÓN EN FRESCO Y CULTIVOS .................................................................................. 47
1.1.1.23. OBJETIVO ......................................................................................................... 47
1.1.1.24. GENERALIDADES.............................................................................................. 47
I.- FUNDAMENTACIÓN TEORICA ................................................................................................ 53
PRÁCTICA #8……………………………………………………………………..……………………………………………………58
PRACTICA #9 ………………………………………………………………….….…………………………………………………..64
PARASITOLOGIA SIMPLE…………………………………………….….…….…………………………………………………65
TEST GRAHAM………………..………………………………………………………………………………………………………65
1.1.1.1. OBJETIVO
1.1.1.2. INTRODUCCIÓN
Casi la totalidad de los organismos unicelulares son imperceptibles para el ojo humano,
y para observarlos es esencial el microscopio. El uso de este dispositivo es indispensable
en el Laboratorio de Microbiología para el estudio de la morfología y estructura de los
microorganismos, así como su reacción a diferentes colorantes, lo cual junto con otros
criterios, permitirá su identificación, por lo tanto, es importante conocer su adecuado
manejo.
Además de la ampliación de la imagen, en microscopía, hay que tener en cuenta dos
factores más: el contraste y la resolución. Los objetos deben poseer un cierto grado de
contraste con su medio circundante para poder ser percibidos a través del microscopio.
Por ello es que la mayoría de los organismos necesitan ser previamente teñidos para
poder distinguirlos del medio (tinciones simples). Para contrastar o realzar de forma
específica distintas características morfológicas o estructurales se emplean tinciones
diferenciales. Estas técnicas tienen un gran interés en la identificación y clasificación de
las bacterias. La tinción diferencial más utilizada es la tinción de Gram. Otras tinciones
de gran importancia son las que diferencian bacterias “ácido- alcohol resistentes”, las
que diferencian estructuras significativas como las esporas o la tinción negativa de
cápsulas.
Por otra parte, el grado de resolución (la capacidad para ver separados dos objetos
adyacentes muy próximos entre sí), depende de las características del sistema de lentes
que posea el
microscopio. Éste se
encuentra limitado por
la longitud de onda de
la luz emitida, el índice
de refracción del medio
en el que se realiza la
visualización y la
apertura numérica del
objetivo.
1.1.1.3. EL
MICROSCOPIO
El microscopio compuesto es aquel que dispone de dos o más lentes de aumento. Un
microscopio se divide en dos partes: el soporte y el sistema óptico.
2) Sistema Óptico. Está formado por un cuerpo tubular donde se instalan las lentes: los
oculares en un extremo y los objetivos en el extremo opuesto.
1) Compruebe que las lentes del ocular y de los objetivos están limpias: de no ser así,
límpielas cuidadosamente con papel especial para óptica. No tocar las lentes con los
dedos.
1) No se deben tocar nunca las lentes con las manos, sino con pañuelos especiales para
lente.
1.1.1.6. ACTIVIDADES
PRÁCTICA # 2
TÉCNICAS DE TINCIÓN
1.1.1.7. OBJETIVO
1. Tinción simple. Conocida con ese nombre ya que solo nos sirve para hacer más
fácilmente visibles a las bacterias sin resaltar ninguna característica en especial.
Una tinción simple se lleva a cabo cubriendo con colorante básico un frotis seco
y fijado al calor. El frotis se deja reaccionar con las células por un minuto y se lava
suavemente con agua. El frotis se puede dejar secar o usar papel secante para
que quede listo para observarse.
2. Tinción negativa. Este método de tinción utiliza colorantes neutros o ácidos ya
que tienen poca afinidad por la célula bacteriana por lo tanto como no se
absorben se colorea el fondo en el que están las bacterias pero la célula queda
incolora y transparente, así pues las bacterias aparecen como pequeñas áreas
iluminadas en un fondo oscuro. La tinción acídica con nigrosina, o neutral ( con
tinta china) son las más usadas.
3. Tinción diferencial. Las bacterias se diferencian unas de otras tanto física como
químicamente, por lo cual su reacción ante algunos colorantes también será
diferente dando lugar así a grupos tintoreales característicos. Entre estos grupos
están los que se originan por la tinción descubierta por Hans Christian Gram, esta
tinción divide a las bacterias en Gram positivas o Gram negativas lo cual no solo
sirve para diferenciarlas sino aún para elegir la terapia adecuada en algunos
casos. Existen otras tinciones diferenciales de utilidad en microbiología clínica
como la de Ziehl- Neelsen.
4. Tinción estructural. Existen diferentes tipos de colorantes que de acuerdo a su
afinidad se utilizan para teñir y detectar ciertas estructuras de la célula
bacteriana como son las esporas, los flagelos y las cápsulas.
MATERIAL Y EQUIPO
2 portaobjetos
Asa bacteriológica
Aceite de inmersión
Microscopio
Mechero
Azul de metileno de Löeffler
Cepa de Escherichia coli, Staphylococcus aureus
TÉCNICA
1. Preparar un frotis de E. coli y se S. aureus de acuerdo a las indicaciones de la
figura 1 y fijarlo al calor.
2. Cubrir el frotis con azul de metileno y dejar en reposo por un minuto.
3. Lavar con agua corriente suavemente y dejar secar.
4. Observar con el objetivo de inmersión.
MATERIAL Y EQUIPO
4 portaobjetos
Asa bacteriológica
Aceite de inmersión
Microscopio
Vaso de precipitado de 200 ml con fenol al 5%
Nigrosina o tinta china
Puente de tinción
Cepa de Klebsiella pneumoniae
TÉCNICA
MATERIAL Y EQUIPO
3 portaobjetos
Asa bacteriológica
Aceite de inmersión
Microscopio
Mechero
Puente de tinción
Cepas de Gram negativos (Escherichia coli) y de Gram positivos (Staphylococcus
aureus).
Cristal violeta
Yodo de Gram
Etanol al 95%
Safranina
TÉCNICA
1. De acuerdo a la figura 1 preparar un frotis de E. coli, uno de S. aureus y uno
con una mezcla de ambos microorganismos.
2. Dejar secar y fijar al calor como se indica.
3. Teñir con cristal violeta por un minuto.
4. Enjuagar con agua corriente suavemente y escurrir.
5. Cubrir el frotis con Yodo de Gram y dejar reposar por un minuto.
6. Enjuagar con agua corriente y escurrir
7. Decolorar con etanol al 95%. Para esto, incline el portaobjetos sobre la
charola de tinción y añada goteando el etanol, dejando que corra por todo el
frotis. Para un frotis delgado es suficiente con 10 a 20 segundos.
8. Detener la acción decolorante lavando con agua.
9. Contrastar con safranina por 20 a 30 segundos, enjuagar y dejar secar el
frotis.
10. Examinar con el objetivo de inmersión.
MATERIAL Y EQUIPO
2 portaobjetos
Asa bacteriológica
Aceite de inmersión
Microscopio
Mechero
Papel filtro
Lámpara de alcohol
Cepa de Bacillus subtilis
Ácido acético al 5%
Azul de metileno de Löeffler
TÉCNICA
1. Hacer un frotis, secar y fijar al calor como se describe en la figura 1.
2. Cubrir el frotis con fucsina fenicada y calentar con la lámpara de alcohol hasta
la emisión de vapores. Es importante que su puente de tinción esté bien
nivelado para que la fucsina no se escurra y el frotis no se seque al calentar.
3. Dejar en reposo por 5 minutos
4. Lavar con agua corriente
5. Decolorar con ácido acético al 5% hasta que el frotis tome un ligero color rosa
6. Lavar con agua corriente
7. Teñir durante 3 minutos con azul de metileno de Löeffler
8. Lavar nuevamente con agua corriente, dejar secar y observar con el objetivo
de inmersión
FIGURA 1
PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO
PRESENTACIÓN DE RESULTADOS
Cuadro 2
Observaciones microscópicas de frotis de cultivos bacterianos
Tinción simple
Tinción negativa
PRACTICA # 3
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
OBJETIVO
El alumno aprenderá las técnicas básicas para preparar un medio de cultivo.
1.1.1.15. GENERALIDADES
Las bacterias al igual que otros microorganismos requieren para su crecimiento de una
fuente de energía exógena y nutriente esenciales tales como agua, carbón, nitrógeno,
minerales y factores de crecimiento, además de las condiciones ambientales apropiadas
como son pH, temperatura, presión osmótica y oxígeno atmosférico. Cuando las
bacterias se cultivan en el laboratorio tales requerimientos se llenan con los medios de
cultivo los cuales pueden ser de muy variados tipos de acuerdo al microorganismo que
se desee estudiar. Muchos materiales naturales como jugos, leche, vegetales y carnes
pueden ser usados como bases para medios de cultivo.
El medio de cultivo puede ser líquido como los caldos, semisólido o sólido dependiendo
de la consistencia que adquiere el medio líquido al agregar diferentes concentraciones
de un solidificante como el agar, que es un extracto de algas marinas. El agar no es
utilizado como nutriente por la mayoría de las bacterias, así pues actúa solamente como
solidificante. Se funde alrededor de 100° C y permanece líquido hasta que se enfría de
42° a 43°C. La gelatina se puede usar también pero con el inconveniente de que funde a
25°C y puede ser hidrolizada por muchas bacterias.
+ Sintéticos. Son aquellos medios preparados con alta pureza y en los cuales la
composición se conoce en forma precisa. Su uso es muy definido, por ejemplo medios
para ensayo de vitaminas o para enriquecimiento.
Agar de MacConkey el cual contiene una mezcla de sales biliares que inhiben a los
microorganismos Grampositivos, además de lactosa y como indicador rojo de fenol para
distinguir las bacetrias que fermentan la lactosa de las que no lo hacen.
Agar EMB (Eosina azul de metileno) mediante el azul de metileno y la eosina inhibe los
organismos Grampositivos. Al mismo tiempo, al igual que el Agar de MacConkey,
permite diferenciar bacterias que fermentan la lactosa y/o a la sacarosa de las que no lo
hacen.
El Agar de sal y manitol, por su alto contenido de NaCl (7.5%) inhibe a las bacterias que
no lo toleran, al mismo tiempo con el indicador rojo de fenol sirve para detectar la
fermentación del manitol. Se utiliza para el aislamiento y diferenciación del género
Staphylococcus.
Para disolver los medios de cultivo deshidratados se debe utilizar agua recién destilada
o desmineralizada con un pH lo más cercano posible a 7.0. El recipiente que se utilice
debe ser de preferencia un matraz Erlenmeyer con una capacidad mayor al volumen de
medio que se va a preparar para que se pueda agitar fácilmente. Los medios que no
contienen agar se pueden disolver fácilmente en agua fría o con un ligero calentamiento,
sin embargo si el medio contiene agar o gelatina requerirá de calentamiento.
AJUSTE DEL pH
ESTERILIZACIÓN
Los medios que van en tubo se pueden esterilizar directamente en los tubos; en el caso
de los medios en cajas de Petri se pueden esterilizar en tubos con el volumen para vaciar
una placa (aprox. 20 ml cada uno) o bien matraces para varias placas.
Si en las instrucciones del medio no se indica otra cosa, la esterilización se lleva a cabo
en autoclave a 121C por 15 minutos.
PRÁCTICA # 4
MORFOLOGÍA DE LAS COLONIAS BACTERIANAS
OBJETIVO
MATERIAL Y EQUIPO
Se utilizarán las placas y tubos sembrados en la práctica anterior.
1 mechero Bunsen
1 asa bacteriológica
COLOR
Se usan términos comunes para definirlo y se especifica si el pigmento producido
difusible o no.
CARACTERÍSTICAS ÓPTICAS
LUZ TRANSMITIDA (observar a traves de la colonia)
Opaca: no permite el paso de luz
Traslúcida: Deja pasar la luz sin permitir la completa visibilidad de los objetos observados
a través de la colonia.
Transparente: Deja pasar la luz permitiendo ver claramentelos objetos observados a
través de la colonia.
CULTIVO EN CALDO
Al igual que en los medios sólidos, en los medios líquidos las características de la bacteria
sembrada se reflejan en las caracteristicas que presenta el caldo inoculado como son:
Turbidez: Opacidad más o menos densa, signo de crecimiento.
Película: Crecimiento casi contínuo sobre el líquido
Sedimento: Depósito de células en el fondo del tubo que se resuspende al agitar.
PRESENTACIÓN DE RESULTADOS
Anote las características coloniales de cada cepa en la tabla , basándose en el texto, las
figuras:
AGAR EN SUPERFICIE
Bacteria
Forma
Borde
Elevación
Superficie
Consistencia
Color
Luz transmitida
Luz reflejada
CALDO
Película
Turbidez
Sedimento
MEDIO SEMISÓLIDO
Movilidad
PRÁCTICA # 5
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
OBJETIVO
2. Aerógenas: las que producen gas como hidrógeno y dióxido de carbono como
resultado de su actividad metabólica.
5. Fotógenas: las que causan putrefacción y producen una débil fosforescencia (algunas
bacterias marinas)
El agar TSI es uno de los más usados para ver la fermentación de carbohidratos en la
familia Enterobacteriaceae. Se pueden tener varias posibilidades de fermentación de
acuerdo a las características metabólicas del microorganismo como son: Utilización de
glucosa sola. Los microorganismos que fermentan solo la glucosa provocan en este
medio una reacción alcalina en la superficie ( roja) sobre un fondo ácido (amarillo, k/a)
debido a que realizan una degradación aeróbica de la glucosa en la superficie,
convirtiendo el piruvato en agua y dióxido de carbono. Después de 18 a 24 horas de
incubación como la concentración de glucosa es baja (0.1%), los microorganismos
empiezan a utilizar las peptonas que se encuentran en el medio, causando la liberación
de amoniaco y produciendo un pH alcalino ( rojo) gracias al rojo de fenol que tiene el
medio como indicador de pH. En el fondo, como no hay oxígeno, se realiza una
degradación anaeróbica y el piruvato se convierte en lactato con lo cual el pH disminuye
quedando el pH ácido ( amarillo).
Ciertas bacterias tienen la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono
en una serie de reacciones como sigue:
OXALACETATO PIRUVATO + CO
Los ácidos orgánicos son posteriormente utilizados dando como producto final
carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El pH alcalino así logrado hace que el indicador de
pH en el medio, el azul de bromotimol vire de su color verde original a un azul intenso.
Prueba de la ureasa
Todo esto da lugar a un cambio en el pH, lo que causa que cambie el color original del
medio (amarillo) a un color rojo bugambilia por el indicador rojo de fenol. De acuerdo a
la degradación de la urea el color será más o menos intenso.
Este medio como su nombre lo indica sirve para observar la movilidad, la produccíon de
indol y descarboxilación de la ornitina.
Aguja bacteriológica
Mechero de Bunsen
Gradilla
Medio de MIO
TÉCNICA
1. Marque perfectamente cada uno de sus tubos, usando una serie de TSI, LIA, Urea,
Citrato y MIO
MIO Picadura
PRESENTACÍON DE RESULTADOS
1. Anote las observaciones de cada tubo (antes y después de inocular), utilizando los
colores apropiados.
2. Anote los resultados de cada prueba usando las abreviaturas correctas. En caso de no
corresponder a la bacteria que se le dio con el resultado de sus pruebas bioquímicas,
especifique de que bacteria se trata.
PRÁCTICA # 6
CONTROL BACTERIANO POR MEDIO DE AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS
OBJETIVO
Observar el efecto de algunos agentes físicos y químicos utilizados como germicidas para
el control de los microorganismos.
1.1.1.18. GENERALIDADES
Una variedad de agentes físicos y químicos son útiles para provocar la muerte bacteriana
o para prevenir su multiplicación. Entre estos encontramos las radiaciones ultravioleta,
la temperatura, los agentes desinfectantes y otros.
1.1.1.20. TEMPERATURA
Muchas células son sensibles al calor húmedo, después de la exposición por algunos
minutos a una temperatura más elevada que su máxima de crecimiento. La proporción
de células muertas depende del tiempo de exposición y la temperatura.
La destrucción efectiva por temperaturas bajas rara vez ocurre. La causa del daño
celular durante el congelamiento no es muy conocida, pero se sabe que la concentración
de solutos durante el congelamiento rompe las membranas y causa la lisis durante el
deshielo.
1.1.1.21. DESINFECTANTES
Los desinfectantes son generalmente agentes químicos que matan a las bacterias y otros
microorganismos. Dentro de estos tenemos:
1. Ácidos y álcalis> Tanto los ácidos y álcalis son muy bactericidas dado su grado de
disociación. Entre estos se puede mencionar KOH, NaOH, HNO3 y H2SO4.
3. Compuestos orgánicos. Como los derivados del alquitrán de hulla, el cresol, tricresol,
alcanfor, creosota, ácido fénico y el fenol que es el de uso más común. Actúan
precipitando las proteínas. Esta acción guarda relación con la destrucción de la
estructura de la membrana y sus funciones.
a) compuestos aniónicos como las sales sódicas y potásicas de ácidos grasos de peso
molecular elevado sulfatos de alquilo y los jabones.
MATERIAL Y EQUIPO
Asa bacteriológica
2 mecheros Bunsen
Tela de asbesto
3 pipetas de 5 ml estériles
Cepas de Staphylococcus aureus, Escherichia coli (24 hrs incubación), Bacillis subtilis (48
hrs de incubación).
TÉCNICA
1. Prepare una suspensión ligera de cada bacteria (con la misma turbidez todas).
2. Deposite 1 ml de cada suspensión en 5 tubos para cada bacteria, los cuales irán
marcados con el tiempo de calentamiento (sin calentamiento, 5, 10, 15 y 20 minutos
respectivamente).
3. Caliente los tubos en un baño de agua de ebullición constante por los tiempos
indicados 5, 10, 15 y 20 minutos y deje un tubo de cada bacteria sin calentar.
4. Después del calentamiento siembre con el asa calibrada una asada de cada
suspensión en las cajas marcadas para cada bacteria con el tiempo de exposición (5
cajas para cada bacteria).
5. Incube por 24 horas y cuente cuantas colonias crecen en cada placa para poder
estimar el efecto del tiempo de exposición en cada caso.
PRESENTACIÓN DE RESULTADOS
1. Elabore una curva con el número de bacterias por ml (y) vs el tiempo de exposición
(x).
2. Concluya cual es el tiempo mínimo de exposición para eliminar al 50% de cada una
de las bacterias estudiadas.
1.1.1.21.3. ACCIÓN DE LOS METALES, CLORO, ÁLCALIS Y ÁCIDOS
MATERIAL Y EQUIPO
Asa bacteriológica
Mechero Bunsen
Cajas Petri con discos de papel filtro impregnados con las siguientes soluciones:
- Cloro 6%
- Fenol al 5%
- Benzal
TÉCNICA
1. Inocular con cada cepa un tubo de agar nutritivo fundido y enfriado alrededor de 45
por separado.
2. Verter en una caja Petri estéril y dejar solidificar sobre una superficie nivelada.
3. Colocar un disco impregnado con cada solución en forma equidistante sobre las
placas.
PRESENTACION DE RESULTADOS
1.1.1.22. OBJETIVO
1.1.1.23. GENERALIDADES
MATERIAL Y EQUIPO
3 portaobjetos
1 cubreobjetos
1 tubo de ensaye de 13 X 100 con tapón de rosca con solución salina estéril
1 placa agar nutritivo
1 placa agar EMB
1 placa agar sal y manitol
1 placa agar Mac Conkey
Hisopos estériles
Puente de tinción
Cristal violeta
Yodo de Gram o lugol
Etanol al 95% o alcohol acetona
Safranina
Aceite de inmersión
Mechero
Microscopios
TÉCNICA
1. Tomar una muestra de alrededor de los dientes incluyendo las encías con un hisopo
estéril, sembrar en las placas de agar nutritivo, EMB, MacConkey y sal y manitol. Incubar
a
36° C por 24 horas. Anotar resultados y observaciones.
2. Con el otro hisopo tomar nuevamente muestra y realizar 2 extendidos e introducir el
hisopo en el tubo con sol. salina estéril.
3. Los extendidos secarlos con ayuda del mechero y proceder a teñir como indica la
técnica de Gram.
4. Observar al microscopio con objetivo de 100 X.
5. Tomar una muestra con el hisopo en solución salina, colocarla en el portaobjetos y
cubrir. Observar en 40 X.
PRESENTACIÓN DE RESULTADOS
1. Investigar los microorganismos de la microbiota bucal, así como las características
morfológicas en cada medio y microscópicas tintoreales.
2. Anotar resultados y observaciones de las extensiones y de crecimiento en las placas
de agar, obtenidas en la práctica.
3. Anotar los géneros que crecieron en cada placa.
PRÁCTICA # 8
INTRODUCCIÓN:
La tinción de Ziehl Neelsen fue desarrollada inicialmente por Paul Ehrlich para poner de
manifiesto la presencia de los bacilos causantes de la tuberculosis en muestras clínicas de
pacientes.
Esta técnica es capaz de diferenciar los bacilos Acido Alcohol Resistentes (BAAR).
La técnica de Z-N fuerza la penetración de la fucsina básica en la pared celular mediante la acción
combinada del fenol y el calor, que aumentan la fluidez de la capa de ácidos micólicos: el calor
“derrite” el componente ceroso y el fenol actúa a modo de disolvente, permitiendo el paso del
colorante básico que se une a los ácidos micólicos con carga negativa. Cuando cesa la aplicación
de calor y/o se elimina el exceso de fenol mediante un lavado con agua, la pared recupera su
consistencia cerosa, pero las moléculas de fucsina quedan atrapadas en su espesor.
Con la coloración de Ziehl Neelsen se observan como bastoncitos delgados, ligeramente curvos,
rojo fucsia, destacándose claramente contra el fondo azul.
MATERIALES:
Portaobjetos
Asa de siembra
Pipetas
Pinzas de madera
Microscopio óptico
REACTIVOS:
Azul de metileno
Muestra de esputo
Aceite de inmersión.
Guantes granel
Mascarilla
PROCEDIMIENTO:
Ordenar las muestras y rotular las láminas con iniciales del nombre del paciente.
COLORACIÓN:
Decoloración:
Coloración de fondo:
++ (dos cruces):>100 bacilos en 100 campos observados ó >1bacilo y <10 bacilos por
campo observado.
+++ (tres cruces):>1000 bacilos en 100 campos observados ó >10 bacilos por campo
observado.
SEGUNDA UNIDAD
IDENTIFICACIÓN PARASITOLOGICA
PRÁCTICA # 9
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA
Identificar las características, diferencias, ventajas y desventajas de dos métodos de
importancia en el estudio de parásitos en materia fecal.
Variaciones patológicas:
Blanco crisáceo (acólicas) en obstrucción biliar, ingestión de bario
Verdosas, en presencia de Biliberdina (por oxidación de la bilirrubina)
Amarillo oro, en el espasmo neurogénico del esfínter de Oddi, con salida
violenta de la bilis y en las insuficiencas pancreáticas.
Rojizas (sangre), en las enterorragias bajas.
Negruscas (en melenas) , en hemorragias altas o por ingestión de hierro o
carbón.
6.- Después de un tratamiento con medicamentos contra cestodos (Taenia sp.), las
heces deben escudriñarse para asegurar la recuperación del escólex
c.- Examen Microscópico
1. Colocar un portaobjetos sobre un papel absorbente (puede ser papel higiénico).
2. En el portaobjetos se coloca a más o menos 1 cm de uno de los extremos una
gota de solución fisiológica, y a la misma distancia del otro extremo se coloca
una gota de solución de lugol hija.
3. Con ayuda de un baja lenguas, se mezcla una pequeña porción de la materia
fecal (aproximadamente 2 mg.).
4. Con movimientos rotatorios se emulsiona primero con la gota de solución
fisiológica, y luego con la solución de lugol hija.
5. La cantidad de materia fecal se controla de tal modo que se pueda leer a través
de la preparación; evitar preparaciones muy gruesas o muy delgadas.
6. Luego se colocan sobre cada emulsión un cubre objeto y se observa al
microscopio, con objetivo 10X empezando por el extremo superior del
portaobjeto con el frotis con solución fisiológica.
7. Con el tornillo macrométrico realizar el enfoque de la muestra y luego con el
tornillo micrométrico realizar el contraste de fases en busca de posibles
parásitos. Recorrer toda la superficie del cubreobjetos guiándose siempre por
algún detalle del campo que se observó. Cuando se sospecha que alguna
estructura corresponde a una forma parasitaria se cambia al objetivo 40X para
confirmación.
Papel higiénico
Detergente
PROCEDIMIENTO
Los grupos formados el primer día de prácticas deberán realizar la siguiente actividad:
1. Registrar los datos del paciente
2. Registrar las características macroscópicas de la muestra fecal
3. Realizar el montaje de las materias fecales (tanto de la muestra fresca como
de las conservadas)
4. Realizar la observación microscópica de la preparación al fresco con 10x y
ante la visualización de algo sospechoso con 40x.
5. Anote el nombre científico la forma parasitaria encontrada y realice el dibujo
correspondiente con ayuda del docente.
……………………………………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………………………………
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……………………………………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………………………………
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Evaluación
1. Qué es el coprológico seriado?
3. Cuando la muestra fecal es fresca, porqué debe llevarse lo más pronto posible
al laboratorio para su estudio?
4. Cómo interfiere el uso de Antibióticos en este tipo de métodos?
PRÁCTICA # 10
TÍTULO: TÉCNICAS DE CONCENTRACIÓN EN EL EXAMEN
COPROPARASITOLÓGICO SERIADO
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA
Realizar métodos de concentración y comparar el rendimiento con el método
coproparasitológico directo y seriado
Papel higiénico
Detergente
PROCEDIMIENTO
Los grupos formados el primer día de prácticas deberán realizar la siguiente actividad:
1. Registrar los datos del paciente y las características macroscópicas de
la muestra fecal
2. Realizar una de las técnicas de concentración indicada por el docente
3. Realizar el montaje del material obtenido y observar al microscopio
4. Anotar el nombre científico de la forma parasitaria encontrada y realizar
el dibujo correspondiente.
5. Comparar el rendimiento con el método Coproparasitológico directo y
seriado
Evaluación
1. Qué ventajas tiene el realizar métodos de concentración.
PRÁCTICA # 11
Enterobius vermicularis
Tenias
Las Taenias son parásitos planos transmitidos al hombre por la ingesta de carne cruda
o mal cocida de vaca y cerdo (Taenia saginata y solium respectivamente). Para la
diferenciación de ambas especies el bioquímico emplea técnicas sencillas como tinta
china, observación del escólex, etc.
Baja lenguas
Marcadores indelebles
Papel higiénico
Detergente
PROCEDIMIENTO
Los grupos formados el primer día de prácticas deberán realizar la siguiente actividad:
1. Observar los ejemplares mostrados por el docente
2. Dibujar los parásitos y huevos mostrados por el docente
3. Anotar las diferencias principales
Evaluación
1. Porqué para el diagnóstico de Enterobius vermicularis no es recomentable el
coprológico simple o seriado?
PRÁCTICA # 12
Estos agentes tienen propiedad de coloración ácido resistente y es por ello que para su
identificación en laboratorio se emplean técnicas de coloración especial como la tinción
de Zielh Neelsen modificado, observándose a los protozoos de color fucsia.
Gradillas de tinción
PROCEDIMIENTO
Los grupos formados el primer día de prácticas deberán realizar la siguiente actividad:
Del sedimento obtenido por el método de concentración de Ritchie modificada,
se toma una pequeña cantidad, se lleva a un portaobjetos y se realiza un frotis
que se seca al ambiente por aproximadamente 1 hora
Cubrir el frotis con Carbolfucsina
Dejar reaccionar durante veinte a treinta minutos y se lava con agua corriente.
Decolorar con alcohol ácido durante treinta segundos y lavar posteriormente con
agua del grifo.
Realizar la contracoloración con azul de metilieno durante 3 min. o verde de
malaquita
Lavar con agua corriente
Dejar secar al medio ambiente
Observar al microscopio con objetivo de inmersión (100x)
Los ooquistes se ven de color fucsia con fondo azul.
Resultados
1. A qué tipo de pacientes afectan principalmente los coccideos intestinales