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Departamento de Biotecnología
Rompimiento celular
Esteroides
(Se extraen sin romper) Biomasa
Planta Piloto de Fermentaciones
Departamento de Biotecnología
Procariotes Gram –
(E. coli produce la mayoría de las proteínas recombinantes)
Membrana externa
(Proteínas y lipopolisacáridos)
Fuerza mecánica
8 nm
Polipéptidoglucanos
8 nm Espacio Periplasmático
(Proteínas)
Procariotes Gram +
Polipéptidoglucanos
Espacio Periplasmático
(Proteínas)
Membrana de plasma
(Fosfolípidos, proteínas dispersas, iones metálicos)
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Departamento de Biotecnología
Tomado de “Advances in product release strategies and impact on bioprocess design” (2009)
Bangaru Balasundaram, Sue Harrison and Daniel G. Bracewell
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Tomado de
“Advances in product
release strategies and
impact on bioprocess
design” (2009)
Bangaru
Balasundaram, Sue
Harrison and Daniel
G. Bracewell
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Tomado de
“Advances in product
release strategies and
impact on bioprocess
design” (2009)
Bangaru
Balasundaram, Sue
Harrison and Daniel
G. Bracewell
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Fermentación
Operaciones finales
Equipo de ruptura
Industria Alimentaria
(Homogenización de la leche)
Digestión Rompimiento por digestión de la Suave Caro Micrococcus lysodeikticus tratado con lisozima
enzimática pared celular de huevo
Solubilización Detergentes solubilizan la Suave Moderado- Sales biliares actuando sobre E.coli
membrana celular caro
Disolución de Solventes orgánicos se disuelven en Moderado Barato Ruptura de levadura con tolueno
lípidos la pared celular y la desestabilizan
Mecánico Homogenización Células cortadas en una licuadora Moderado Moderado Tejido animal y células
(tipo navaja)
Molido Ruptura celular por molido con Moderado Barato
abrasivos
Ultrasonicación Células rotas con cavitación Fuerte Caro Suspensión de células a pequeña escala
ultrasónica
Homogenización Se hace pasar células por un Fuerte Moderado Tratamiento a gran escala de suspensión de
(tipo orificio) pequeño orificio y se rompen por células excepto bacterias
estrés
Rompimiento en Se aplastan las células entre el Fuerte Barato Tratamiento a gran escala de suspensión de
molino de perlas vidrio y perlas de acero células y células de plantas
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Dificultad de la ruptura
Esporas
Cocos
gram -
Levaduras
Células vegetales
Bacilos gram +
Micelios
Células animales
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Choque osmótico
Tipos:
1. Iónicos: provoca desnaturalización proteica
Aniónicos: Lauril sulfato sódico, colato sódico, SDS
Catiónicos: Bromuro de cetil-trimetil-amonio
Inconvenientes:
Precipitación de proteínas
Necesidad de eliminación (cromatografía, ultrafiltración)
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Disolventes orgánicos
Inconvenientes:
Precio
Toxicidad
Desnaturalización de proteínas
Inflamabilidad
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Sonicación
•Aplicación de frecuencia superiores a 20 kHz
•Aparición de áreas de compresión/enrarecimiento/cavidades →colapso de
cavidades →ondas de choque →daño celular
•Aplicación continua o discontinua
•Eficacia dependiente de:
Tipo de microorganismo: diversidad
Gram ->Gram +
Bacilos > Cocos
pH
Temperatura
Fuerza iónica del medio
Tiempo de exposición
Densidad de la célula
•Uso a pequeña escal, NO a gran escala:
Elevados requerimientos de energía
Dificultad de transmisión de la energía
Problemas de disipación del calor producido
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Congelación/Descongelación
•Ventajas:
Simplicidad
Bajas temperaturas de trabajo
Cizalla líquida
•Modos de uso:
Paso único, series de reciclaje, reciclaje continuo con eliminación de
sustancia
•Efectividad depende de:
Tipo de microorganismos: GRAM -> GRAM +
Historia de la materia de partida:
Condiciones de crecimiento (fase estacionaria > fase exponencial)
Congelación/descongelación
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Cizalla sólida
•Mecanismo:
Agitación en presencia de abrasivo (cristales de hielo) +
ruptura por cizalla líquida
Fuerzas de cizalla: paso a través de orificio + desgarro por
cristales de hielo
Tomado de “Advances in product release strategies and impact on bioprocess design” (2009)
Bangaru Balasundaram, Sue Harrison and Daniel G. Bracewell
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Tomado de “Advances in product release strategies and impact on bioprocess design” (2009)
Bangaru Balasundaram, Sue Harrison and Daniel G. Bracewell
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Pe − Pi = −R ⋅T ⋅ ∑ ci
dR
VM = k (Rm − R )VM
dt
Rm
ln
Integrando y re-arreglando Rm − R
Ejemplo 5.2
Rm k
ln = kt
Rm − R
t
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Rm Ejemplo 5.4
ln = k" N b P a
Rm − R
Donde b es un exponente que varía con el tipo de célula y toma valores entre 0.28 y 1
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A = Am[1 − exp(−kt)]
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