UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS

INGENIERÍA BIOQUÍMICA
INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

Datos informativos:

Integrantes: Apunte Denise, Espinosa Melany, Muñoz Diana, Pincay Amelia, Pinchao
Brayan, Silva Pamela
Carrera: Ingeniería Bioquímica
Ciclo Académico: Septiembre – Marzo 2017
Asignatura: Ingeniería de las Enzimas
Nivel: Octavo “U”
Área Académica: Profesional
Profesor: Ing. Cecilia Carpio
Práctica de Laboratorio N°: 8
Fecha de Realización: 09 / 01 / 2018
Fecha de Presentación: 17 / 01 / 2018

TEMA:

INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS POR ADSORCIÓN Y POR ATRAPAMIENTO

I. OBJETIVO:
OBJETIVO GENERAL
 Evaluar los métodos de absorción en hueso calcinado y atrapamiento en alginato para la
inmovilización de invertasa de levadura.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Analizar la actividad enzimática de la invertasa de levadura tras su inmovilización en
hueso calcinado y alginato de calcio
 Determinar el rendimiento de inmovilización de los métodos de absorción en hueso
calcinado y atrapamiento en alginato
II. CÁLCULOS Y RESULTADOS:
Tabla N° 1: Datos obtenidos por el método de adsorción con el hueso calcinado

Tiempo de reacción (min) Absorbancia a 540 nm

0 1 2 3 4 5
Grupo 1 Sobrenadante 0,0000 0,0420 0,0930 0,1580 0,2120 0,2660
Lavado 1 0,0000 0,0540 0,0710 0,1420 0,1760 0,2200
Lavado 2 0,0000 0,0040 0,0020 0,0910 0,1300 0,1780
Lavado 3 0,0000 0,0020 0,0010 0,0780 0,1240 0,1520
Grupo 2 Sobrenadante 0,0000 0,0840 0,1050 0,1040 0,1930 0,1720
Lavado 1 0,0000 0,0340 0,0930 0,0980 0,1780 0,1450
Lavado 2 0,0000 0,0020 0,0080 0,0820 0,1250 0,1230
Lavado 3 0,0000 0,0010 0,0030 0,0490 0,1020 0,0960
Elaborado por: Apunte, D., Espinoza, M., Muñoz, D., Pincay, A., Pinchao, B., Silva, Pamela.
Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas.

Tabla N° 2: Datos para obtener la Curva Estándar de la Glucosa

Parámetros Valor
Peso Glc (g) 50.0000
Peso Sol. (g) 24,9952
Glc (mg/ml) 2,0003
Elaborado por: Apunte, D., Espinoza, M., Muñoz, D., Pincay, A., Pinchao, B., Silva, Pamela.
Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas.

Tabla N° 3: Cálculos para obtener la Curva Estándar de la Glucosa

Vol. Std Peso Glc (g) Vol. Std Peso total Glc (mg/ml) Absorb (540
(ml) (ml) (g) nm)
0,200 0,1973 0,8000 0,9861 0,4002 0,2130
0,400 0,3912 0,6000 0,9771 0,8008 0,4400
0,600 0,5976 0,4000 0,9872 1,2109 0,6720
0,800 0,8038 0,2000 1,0007 1,6067 0,9010
1,000 0,9794 0,0000 0,9794 2,0003 1,0960
Elaborado por: Apunte, D., Espinoza, M., Muñoz, D., Pincay, A., Pinchao, B., Silva, Pamela.
Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas.

Gráfico N° 1: Curva estándar de la Glucosa

 Curva Estándar de Glucosa
1.5

Absorbancia (540 nm)

1.0

0.5 y = 0.556x - 0.0049

R² = 0.9994
0.0
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
[Glucosa] (mg/ml)

Determinación de Concentración de Glucosa

𝒚 = 𝒂𝒙 + 𝒃 [𝐴𝑏𝑠] 𝑏
[𝐺𝑙𝑐] = −
𝑎 𝑎
[𝐴𝑏𝑠] = 𝑎[𝐺𝑙𝑐] + 𝑏
𝒚 = 𝟎, 𝟓𝟓𝟔𝒙 − 𝟎, 𝟎𝟎𝟒𝟗

Tabla N° 4: Datos de la ecuación de la Curva estándar de la Glucosa

Término Valor
Pendiente (a) 0,5559
Valor independiente (b) -0,0048
1/a 1,7986
-b/a 0,0088
Elaborado por: Apunte, D., Espinoza, M., Muñoz, D., Pincay, A., Pinchao, B., Silva, Pamela.
Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas.

Tabla N° 5 Cálculo de Azúcares reductores a partir de la absorbancia a 540 nm

Tiempo de reacción (min) [Glucosa] (mg/mL)

0 1 2 3 4 5
Grupo 1 Sobrenadante 0,0088 0,0844 0,1761 0,2930 0,3901 0,4872
Lavado 1 0,0088 0,1059 0,1365 0,2642 0,3254 0,4045
Lavado 2 0,0088 0,0160 0,0124 0,1725 0,2426 0,3290
Lavado 3 0,0088 0,0124 0,0106 0,1491 0,2318 0,2822
Grupo 2 Sobrenadante 0,0088 0,1599 0,1977 0,1959 0,3559 0,3182
Lavado 1 0,0088 0,0700 0,1761 0,1851 0,3290 0,2696
Lavado 2 0,0088 0,0124 0,0232 0,1563 0,2336 0,2300
Lavado 3 0,0088 0,0106 0,0142 0,0969 0,1923 0,1815
Elaborado por: Apunte, D., Espinoza, M., Muñoz, D., Pincay, A., Pinchao, B., Silva, Pamela.
Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas.

Gráfico N° 2: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del sobrenadante del
grupo 1.
 Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)
del sobrenadante
0.6

[Glucosa] (mg/ml)
0.5
0.4
0.3 y = 0.0755x + 0.0088
0.2 R² = 1
0.1
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)

Gráfico N° 3: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del primer lavado del
grupo 1.

Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)

del lavado 1
0.5
[Glucosa] (mg/ml)

0.4
0.3
y = 0.0971x + 0.0088
0.2 R² = 1
0.1
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)

Gráfico N° 4: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del segundo lavado del
grupo 1.

Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)

del lavado 2
0.4
[Glucosa] (mg/ml)

0.3
0.3
0.2
0.2 y = 0.0072x + 0.0088
0.1 R² = 1
0.1
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)

Gráfico N° 5: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del tercer lavado del grupo
1.
 Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)
del lavado 3
0.3

[Glucosa] (mg/ml)
0.3
0.2
0.2
0.1 y = 0.0036x + 0.0088
R² = 1
0.1
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)

Gráfico N° 6: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del sobrenadante del
grupo 2.

Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)

del sobrenadante
0.4
[Glucosa] (mg/ml)

0.3

0.2

0.1 y = 0.1511x + 0.0088

R² = 1
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)

Gráfico N° 7: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del primer lavado del
grupo 2.

Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)

del lavado 1
0.4
[Glucosa] (mg/ml)

0.3
0.3
0.2
0.2 y = 0.0612x + 0.0088
0.1 R² = 1
0.1
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)

Gráfico N° 8: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del segundo lavado del
grupo 2.
 Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)
del lavado 2
0.3

[Glucosa] (mg/ml)
0.2
0.2
0.1 y = 0.0036x + 0.0088
0.1 R² = 1

0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)

Gráfico N° 9: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del tercer lavado del grupo
2.

Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)

del lavado 3
0.3
[Glucosa] (mg/ml)

0.2

0.2

0.1
y = 0.0018x + 0.0088
0.1 R² = 1
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)

Tabla N°6. Datos de absorbancia (540nm) de la actividad de la invertasa

Tiempo (min) Absorbancia [Glu] (mg/ml)

0 0,0000 0,0000
1 0,2010 0,3700
2 0,4670 0,8480
3 0,6800 1,2920
4 0,8860 1,6020
5 1,0990 1,9850
Elaborado por: Apunte, D., Espinoza, M., Muñoz, D., Pincay, A., Pinchao, B., Silva, Pamela.
Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas.

Gráfico N° 10: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) de la actividad de la

invertasa.
 Tiempo vs.[Glucosa]
2.5

[Glu] (mg/ml)
1.5
y = 0.4019x + 0.0115
1 R² = 0.9964

0.5

0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)

Cálculo de la actividad aplicada de la invertasa

𝑔
𝑚𝑔 ∗
1 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐺𝑙𝑢 103 𝑢𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐺𝑙𝑢 1 𝑢𝑚𝑜𝑙 𝑆𝑎𝑐 𝑉𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙
𝐴𝑐𝑡. = 𝑃𝑒𝑛𝑑.∗ 𝐿 ∗ ∗ ∗ ∗
𝑚𝐿 ∗ 𝑚𝑖𝑛 𝑃𝑀 𝐺𝑙𝑢 1 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐺𝑙𝑢 2 𝑢𝑚𝑜𝑙 𝐺𝑙𝑢 𝑉𝑒𝑛𝑧𝑖𝑚𝑎

𝑔
𝑚𝑔 ∗ 𝐿
1 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐺𝑙𝑢 103 𝑢𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐺𝑙𝑢 1 𝑢𝑚𝑜𝑙 𝑆𝑎𝑐 0,3 𝑚𝐿
𝐴𝑐𝑡. = 0,4019 ∗ ∗ ∗ ∗ ∗
𝑚𝐿 ∗ 𝑚𝑖𝑛 180 𝑚𝑔 1 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐺𝑙𝑢 2 𝑢𝑚𝑜𝑙 𝐺𝑙𝑢 0,15 𝑚𝐿

𝑈𝐼
𝐴𝑐𝑡. = 2,2327 ∗ 20 = 44,6540 𝑈𝐼/𝑚𝑙
𝑚𝐿 𝑒𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜
𝑈𝐼
𝐴𝑐𝑡. = 2,2327 ∗ 0,6𝑚𝐿 = 1,3333 𝑈𝐼
𝑚𝐿 𝑒𝑥𝑡𝑟𝑎𝑐𝑡𝑜

𝐴𝑐𝑡𝑖𝑣. 𝐴𝑝𝑙𝑖𝑐. = 1,3333 𝑈𝐼 ∗ 20 = 26,6 𝑈𝐼

1,3333 𝑈𝐼 𝑈𝐼 𝑈𝐼
𝑨𝒄𝒕. 𝑨𝒑𝒍𝒊. 𝑮𝒓𝒑. 𝟏 = = 4,4333 ∗ 20 = 88,600
0,3 𝑔 𝑔 𝑔

1,3333𝑈𝐼 𝑈𝐼 𝑈𝐼
𝑨𝒄𝒕. 𝑨𝒑𝒍𝒊𝒄. 𝑮𝒓𝒑. 𝟐 = = 4,4631 ∗ 20 = 89,2620
0,298 𝑔 𝑔 𝑔

Cálculo demostrativo de la actividad del sobrenadante

𝑃𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 ∗ 1000 ∗ 𝑉𝑜𝑙. 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙

𝐴𝑐𝑡. = ∗ 𝐹𝐷
𝑃𝑀 𝐺𝑙𝑢.∗ 𝑉𝑜𝑙. 𝐸𝑛𝑧𝑖𝑚𝑎 ∗ 2
 𝑉𝑒𝑙𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑 ∗ 1000 ∗ 𝑉𝑜𝑙. 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙
𝐴𝑐𝑡. = ∗ 𝐹𝐷
𝑃𝑀 𝐺𝑙𝑢.∗ 𝑉𝑜𝑙. 𝐸𝑛𝑧𝑖𝑚𝑎 ∗ 2

𝑚𝑔
0,0755 𝑚𝐿 ∗ 𝑚𝑖𝑛 ∗ 1000 ∗ 0,3𝑚𝐿
𝐴𝑐𝑡. = 𝑚𝑔 ∗1
180 ∗ 0,150𝑚𝐿 ∗ 2
𝑚𝑚𝑜𝑙

𝑈𝐼
𝑨𝒄𝒕. = 0,4194 ∗ 3𝑚𝐿 = 1,2583 𝑈𝐼
𝑚𝐿

𝐴𝑐𝑡. 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 = 26,66 𝑈𝐼 − 1,2583 𝑈𝐼

𝑨𝒄𝒕. 𝑻𝒐𝒕𝒂𝒍 = 25,4017 𝑈𝐼

Tabla N° 9: Determinación de la actividad enzimática para el sobrenadante y lavado de los dos

grupos.

Grupo Muestra Pendiente Activ. (UI) Activ. Total (UI)

Sobrenadante 0,0755 1,2583 25,4017
1° lavado 0,0971 1,6183 25,0417
1
2° lavado 0,0072 0,1200 26,5400
3° lavado 0,0036 0,0600 26,6000
Sobrenadante 0,1511 2,5183 24,1417
1° lavado 0,0612 1,0200 25,6400
2
2° lavado 0,0036 0,0600 26,6000
3° lavado 0,0018 0,0300 26,6300
Elaborado por: Apunte, D., Espinoza, M., Muñoz, D., Pincay, A., Pinchao, B., Silva, Pamela.
Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas.

Cálculo demostrativo de rendimiento de inmovilización

𝐴𝑐𝑡. 𝑎𝑝𝑙𝑖𝑐. −𝐴𝑐𝑡. 𝑠𝑜𝑏𝑟𝑒. − ∑𝑛𝑖 𝐴𝑐𝑡. 𝑙𝑎𝑣𝑎𝑑𝑜

𝑹𝒆𝒏𝒅. 𝒊𝒏𝒎𝒐𝒗. =
𝐴𝑐𝑡. 𝑎𝑝𝑙𝑖𝑐

88,600 𝑈𝐼 − 1,2583 𝑈𝐼 − 1,6183 𝑈𝐼 − 0,12 𝑈𝐼 − 0,06 𝑈𝐼

𝑹𝒆𝒏𝒅. 𝒊𝒏𝒎𝒐𝒗. = ∗ 100%
88,600 𝑈𝐼

𝑹𝒆𝒏𝒅. 𝒊𝒏𝒎𝒐𝒗. = 95,55%

Tabla N° 9: Determinación de la actividad aplicada y el rendimiento de inmovilización de los
dos grupos con el hueso calcinado.

Grupo Activ. Aplic. (UI/g) Rend. Inmov. (%)

1 88,6000 96,5500
2 89,2620 95,9400
Elaborado por: Apunte, D., Espinoza, M., Muñoz, D., Pincay, A., Pinchao, B., Silva, Pamela.
Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas.

Tabla N° 7: Datos obtenidos por el método de atrapamiento con el alginato de sodio

Absorbancia a 540 nm Tiempo de reacción (min)

0 1 2 3 4 5
Grupo 1 Sobrenadante 0,0000 0,4650 0,9860 1,6430 2,1650 2,7150
Lavado 0,0000 0,0796 0,2570 0,4690 0,6680 0,9130
Grupo 2 Sobrenadante 0,0000 0,5670 1,1450 1,6620 2,2740 2,5350
Lavado 0,0000 0,1230 0,2890 0,5130 0,7920 0,8450
Elaborado por: Apunte, D., Espinoza, M., Muñoz, D., Pincay, A., Pinchao, B., Silva, Pamela.
Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas.

Tabla N° 8: Cálculo de Azúcares reductores a partir de la absorbancia a 540 nm

Tiempo de reacción (min) [Glucosa] (mg/mL)

0 1 2 3 4 5
Grupo 1 Sobrenadante 0,0088 0,8451 1,7822 2,9638 3,9027 4,8919
Lavado 0,0088 0,1520 0,4710 0,8523 1,2103 1,6509
Grupo 2 Sobrenadante 0,0088 1,0286 2,0682 2,9980 4,0987 4,5682
Lavado 0,0088 0,2300 0,5286 0,9315 1,4333 1,5286
Elaborado por: Apunte, D., Espinoza, M., Muñoz, D., Pincay, A., Pinchao, B., Silva, Pamela.
Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas.

Gráfico N° 10: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del sobrenadante del
grupo 1.
 Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)
del sobrenadante
6.0

5.0

[Glucosa] (mg/ml)
4.0

3.0
y = 0.9934x - 0.0845
2.0 R² = 0.9981
1.0

0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)

Gráfico N° 11: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del primer lavado del
grupo 1.

Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)

del lavado
2.0

1.5
[Glucosa] (mg/ml)

1.0
y = 0.3362x - 0.1162
0.5 R² = 0.9817

0.0
0 1 2 3 4 5 6
-0.5
Tiempo (min)

Gráfico N° 12: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del sobrenadante del
grupo 2.
 Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)
del sobrenadante
6.0
5.0

[Glucosa] (mg/ml)
4.0
3.0
y = 0.9411x + 0.1091
2.0 R² = 0.9915
1.0
0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)

Gráfico N° 11: Tiempo (min) vs. Concentración de Glucosa (mg/mL) del primer lavado del
grupo 2.

Tiempo (min) Vs. [Glucosa] (mg/mL)

del lavado
2.0
[Glucosa] (mg/ml)

1.5

1.0
y = 0.3318x - 0.0526
0.5 R² = 0.9775

0.0
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)

Cálculo demostrativo de la determinación de actividad de la enzima en el sobrenadante y

actividad total.

𝑃𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 ∗ 1000 ∗ 𝑉𝑜𝑙. 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙

𝐴𝑐𝑡. = ∗ 𝐹𝐷
𝑃𝑀 𝐺𝑙𝑢.∗ 𝑉𝑜𝑙. 𝐸𝑛𝑧𝑖𝑚𝑎 ∗ 2

𝑉𝑒𝑙𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑 ∗ 1000 ∗ 𝑉𝑜𝑙. 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙

𝐴𝑐𝑡. = ∗ 𝐹𝐷
𝑃𝑀 𝐺𝑙𝑢.∗ 𝑉𝑜𝑙. 𝐸𝑛𝑧𝑖𝑚𝑎 ∗ 2

𝑚𝑔
0,9934 ∗ 1000 ∗ 0,3𝑚𝐿
𝐴𝑐𝑡. = 𝑚𝐿 ∗ 𝑚𝑖𝑛 ∗1
𝑚𝑔
180 ∗ 0,150𝑚𝐿 ∗ 2
𝑚𝑚𝑜𝑙

𝑈𝐼
𝑨𝒄𝒕. = 5,5189
𝑚𝐿

𝑈𝐼 𝑈𝐼
𝑨𝒄𝒕. 𝑻𝒐𝒕𝒂𝒍 = 26,66 − 5,5189
𝑚𝐿 𝑚𝐿

𝑈𝐼
𝐴𝑐𝑡. 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 = 21,1411
𝑚𝐿
Tabla N° 9: Determinación de la actividad enzimática para el sobrenadante y lavado de los dos
grupos.

Activ. Total
Grupo Muestra Pendiente Activ. (UI/ml Enz)
(UI/ml Enz)
Sobrenadante 0,9934 5,5189 21,1411
1
Lavado 0,3362 1,8677 24,7922
Sobrenadante 0,9411 5,2283 21,4317
2
Lavado 0,3318 1,8433 24,8167
Elaborado por: Apunte, D., Espinoza, M., Muñoz, D., Pincay, A., Pinchao, B., Silva, Pamela.
Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas.

Cálculo demostrativo de la determinación de actividad

𝐴𝑐𝑡. 𝐴𝑝𝑙. = 1,3333 𝑈𝐸 ∗ 20 = 26,6 𝑈𝐸

1,3333 𝑈𝐸 𝑈𝐸 𝑈𝐼
𝑨𝒄𝒕. 𝑨𝒑𝒍𝒊. 𝑮𝒓𝒑. 𝟏 = = 4,4333 ∗ 20 = 88,6000
0,3 𝑔 𝑔 𝑔

1,3333𝑈𝐼 𝑈𝐼 𝑈𝐼
𝑨𝒄𝒕. 𝑨𝒑𝒍𝒊. 𝑮𝒓𝒑. 𝟐 = = 4,4631 ∗ 20 = 89,2620
0,298 𝑔 𝑔 𝑔

Rendimiento de inmovilización (%)

𝐴𝑐𝑡. 𝑎𝑝𝑙𝑖𝑐. −𝐴𝑐𝑡. 𝑠𝑜𝑏𝑟𝑒. − ∑𝑛𝑖 𝐴𝑐𝑡. 𝑙𝑎𝑣𝑎𝑑𝑜

𝑹𝒆𝒏𝒅. 𝒊𝒏𝒎𝒐𝒗. =
𝐴𝑐𝑡. 𝑎𝑝𝑙𝑖𝑐

𝑈𝐼 𝑈𝐼 𝑈𝐼
88,600 − 5,5189 − 1,8677
𝑹𝒆𝒏𝒅. 𝒊𝒏𝒎𝒐𝒗. = 𝑚𝑙 𝑚𝑙 𝑚𝑙 ∗ 100%
𝑈𝐼
88,600
𝑚𝑙

𝑹𝒆𝒏𝒅. 𝒊𝒏𝒎𝒐𝒗. = 91,66%

Tabla N° 9: Determinación de la actividad aplicada y el rendimiento de inmovilización de los

dos grupos con el alginato de sodio.

Grupo Activ. Aplic. (UI/g) Rend. Inmov. (%)

1 88,6000 91,6600
2 89,2620 92,7700
Elaborado por: Apunte, D., Espinoza, M., Muñoz, D., Pincay, A., Pinchao, B., Silva, Pamela.
Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las Enzimas.

III. DISCUSIÓN:

La técnica de inmovilización en alginato de sodio es relativamente simple. Se disuelve el alginato

de sodio en un poco de agua caliente, se mezcla bien, y cuando ya está frío se agregan las enzimas
que serán inmovilizadas. Se deja caer la mezcla final, gota a gota, en una solución de cloruro de
calcio. Con el intercambio de iones calcio (del medio) y sodio (del alginato) se forma una matriz
de alginato de calcio que las retiene (Malajovich, 2017). En general, el proceso de gelificación se
inicia a partir de una solución de sal de alginato y una fuente de calcio externa o interna desde
donde el ión calcio puede difundirse formando así una cadena polimérica, reordenando la
estructura de los compuestos y dando como resultado la formación de materiales sólidos capaces
de encapsular sustancias activas (Lupo et.al., 2011).

En un experimento realizado por Escobar (2005), se evidenció un rendimiento de inmovilización

de amiloglucosidasa en hueso calcinado del 95.7%, el rendimiento de inmovilización de invertasa
en el mismo soporte fue de 95-96%, aproximándose al valor obtenido por Escobar (2005) y que
a diferencia de la inmovilización con alginato presentó ventaja apreciable de 4 puntos
porcentuales. En efecto, se asume que dicha diferencia se debe a que el soporte de alginato al
poseer poros muy grandes presenta fugas de enzima y por tanto una reducida actividad catalítica,
esto lo menciona Betigeri y Neau (2002) en uno de sus experimentos en el cual compararon la
actividad enzimática con fugas de una lipasa inmovilizada por atrapamiento en relación a las
inmovilizadas en un complejo polielectrolítico, el cual reducía las fugas.

IV. CONCLUSIONES:
 Se evaluó los métodos de absorción en hueso calcinado y atrapamiento en alginato para
la inmovilización de invertasa de levadura, teniendo que el método de absorción en hueso
calcinado y el de atrapamiento en alginato de calcio presentan una similar actividad y un
alto rendimiento de inmovilización, siendo el hueso calcinado el que presenta el mayor
rendimiento de 96,55%.
 Se analizó la actividad enzimática de la invertasa en las dos matrices de inmovilización
teniendo que el hueso calcinado presento una mayor actividad que la matriz de alginato,
sin embargo, su diferencia no fue muy grande, mostrando que las dos matrices son buenas
opciones al momento de inmovilizar enzimas.
 Se determinó el rendimiento de la inmovilización, teniendo valores mayores en la matriz
de hueso calcinado siendo este método el mejor dentro de la experimentación realizada

V. RECOMENDACIONES:
 Pesar todo el material y registras su peso para una obtención real del rendimiento
de inmovilización
  Al trabajar con las columna con hueso calcinado se debe verificar que este bien
limpia y sin humedad
 En los lavados y en las diluciones se debe usar el tampón de actividad con el que
se trabaje en este caso acetato de sodio al 0,05 M

VI. BIBLIOGRAFIA

Betigeri, S. S. y Neau, S. H. (2002). Inmovilización de lipasa utilizando polímeros hidrofílicos en

forma de perlas de hidrogel. Biomateriales 23, 3627-3636.

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amiloglucosidasa inmovilizada en hueso de pollo. Recuperado de
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Malajovich, M. (2017). “Inmovilización de células en alginato”. Recuperado de:

https://bteduc.com/guias_es/10_Inmovilizacion_en_alginato.pdf (14/01/2017)