CARACTERIZAREA CELULELOR

IN CULTURA
 Scopul caracterizarii celulelor
• Determinarea trans-contaminarilor celulare
• Determinarea (confirmarea) speciei de origine a celulelor
• Corelarea cu tesutul de origine a celulelor
– Determinarea liniei progenitoare la care apartin celulele
– Determinarea pozitiei celulelor in cadrul liniei progenitoare
(daca sunt stem, precursoare sau diferentiate)
• Determinarea transformarilor aparute in cadrul liniilor celulare
– Daca linia celulara are viata limitata sau este continua
– Daca exprima caractere asociate cu malignizarea
• Determinarea instabilitatii genetice si a variabilitatii fenotipice
• Identificarea liniilor celulare in cadrul unui grup de celule cu
aceeasi origine, a suselor celulare sau a liniilor celulare hibride
Cariotipare
• Metoda citogenetica
– Permite identificarea
speciei si a sexului de
origine a celulelor
(umane, soarece,
hamster etc)
– Detrmina numarul de
cromozomi si
structura lor prin
bandare (colorarea
specifica)

Cariotiparea prin metoda picaturii

 Bandarea cromozomilor pentru
identificarea perechilor omologi

Bandarea cu Giemsa

Bandarea cu fluorescenta
Hoechst 33258
 Realizarea
cariotipului
 Caracterizarea morfologica
• Metoda simpla si des utilizata
• Este relativa si depinde de momentul examinarii, de
localizarea celulelor in cultura (central sau spre periferie)
sau de densitatea celulelor.
• Pentru morfologie se utilizeaza frecvent termenii “tip
fibroblastic” (daca lungimea celulei depaseste de cel
putin 2 ori latimea) si “tip epiteloid” (daca celulele sunt
poligonale, cu dimensiuni uniforme si formeaza grupari
celulare)
• Se recomanda examinarea morfologiei in starea vie a
celulei (nefixata, necolorata) cu ajutorul microscopiei
fotonice prin contrast de faza
• Daca se recurge la coloratie – Giemsa este cel mai des
utilizat colorant
Exemple de morfologie celulara in cultura
Detrminararea electroforetica a mobilitatii izoenzimelor
• Izoenzime – enzime cu acelasi specific functional, insa cu structura
si activitate mai mult sau mai putin diferita in functie de specie, rasa
sau tesut
• Pentru determinarea de specie sunt utilizate 7 izoenzime, dintre
care doar 4 sunt de cele mai multe ori suficiente pentru a face un
diagnostic de specie, rasa sau tesut sau pentru a determina
prezenta unei trans-contaminari (minm 10%) cu celule provenite de
la alta specie
– Nucleosid fosforilasa
– Glucozo-6-fosfat dehidrogenaza
– Malat dehidrogenaza
– Lactat dehidrogenaza
– Aspartat aminotransferaza
– Manozo-6-fosfat izomeraza
– Peptidaza
• Se determina calitativ activitatea unei enzime in functie de viteza de
deplasare si intensitatea benzii formate de aceasta in gelul de
agaroza sau poliacrilamida
Identificarea electroforetica a izoenzimelor
 Metoda ELISA de determinare a
antigenelor de suprafata

• Este o metoda frecvent utilizata, care foloseste

anticorpi monospecifici pentru un anumit set de
antigene specifice
• Pentru determinare sunt necesare kituri si
materiale de control
 Identificarea prin metode de colorare imunocitochimice

Metoda citochimica de identificare cu anticorpi monospecifici

generatori de produsi insolubili sau colorati sau anticorpi
monospecifici cuplati cu fluorocromi. Permite identificarea,
vizualizarea, localizarea si apreciarea cantitativa a unor constituenti
celulari specifici.
• Filamentele intermediare specifice unui anumit tip celular
• Keratine – in celulele epiteliale
• Vimentinele – in celulele de origine mesodermica
• Desminele – in celule musculare
• Proteina gliala acida – in astrocite
• Neurofilamentele – in neuroni etc.
• Componente specifice de suprafata
• Proteine de legare intercelulara – de tip CAM
• Markeri specifici de suprafata de tip CD
• Componente ale metabolismului specific
• Albumina – in hepatocite adulte
• Α feto-proteine (AFP) – in hepatocitele embrionare
• Hormoni – in celule secretoare specifice
 Imagini imunocitochimice

Proangiogenic astrocytes. (A) fibronectin (FN, green), PECAM-1 (red), PDGFRα

(blue); lectin (red), integrin α5 or β1 (green) at the sprouting vascular edges of P5
retina. (B and C) Retinal vessels. (B) PECAM-1 (red), PDGFRα (green) . (C) PECAM-
1 staining. (D) PDGFRα (red) and fibronectin (green) in P7 retina.