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FACULTAD DE BIONALISIS
LABORATORIO DE PARASITOLOGIA
MANUAL DE PARASITOLOGIA
ALUMNAS:
MAGDA ELENA HERNANDEZ HERNANDEZ
SANDRA LUZ HERNANDEZ LOPEZ
* TOMA DE MUESTRA PARA EXAMEN
COPROPARASITOSCOPICO
INTRODUCCION :
A continuación , se hará referencia a los diversos aspectos con los cuales deberán
proceder las muestras a analizar con fines parasitologicos para obtener resultados
reproducibles y de esta manera ayudar eficazmente al médico en el diagnostico,
pronostico , y tratamiento del paciente.
Toma de muestra :
Criterios de rechazo :
NOTA : Estas muestras deben procesarse de inmediato (30 minutos como máximo después
de la deposición) en caso contrario se debe adicionarse algun conservador e indicarlo en la
etiqueta de identificación pues de no rexaminarse dentro de un margen de tiempo
prudencial pues al acidificarse muchos gérmenes patógenos se lisan .
RASPADO PERIANAL :
Recipiente de recolección :
Toma de muestra :
NOTA : Los conductos biliares desembocan en duodeno, por lo que también pueden
hallarse huevos de parásitos procedentes del hígado o del árbol biliar en el jugo duodenal
y yeyunal.
Toma de muestra :
Las muestras de jugo duodenal y yeyunal suelen obtenerse mediante sonda gastrica
o bien durante un procedimiento endoscópico, por el medico tratante , las cuales
tras unas adecuada identificación, deberán ser enviadas rápidamente al laboratorio
y procesadas inmediatamente .
Recipiente de recolección :
Criterios de rechazo :
E. histoltyca, Giardia ,
Formalina 10 % Quistes de Balantidium coli.
HECES T°
PAF; PVA Criptosporidium , Isospora belli. ,
FORMADAS ambiente
Medio de transp : (no muy comúnes en personas inmunocompetentes)
Cary blair Trichuris.Ascaris,Necator,Ancylostoma etc
HECES T°
Formalina 10 % Trofozoito de Balantidium coli etc.
DIARREICAS ambiente
ESPUTO ,
T° Pneumocistis ,
SECRECIÓN Formalina 10 %
ambiente Paragonimus, Fasciola hepatica, ,Giardia.
BILIAR .
Giardia,
CONTENIDO T°
Formalina 10 % Strongyloides,Paragonimus,Fasciola,Ancylostoma
DUODENAL ambiente
, Necator etc.
Huevos de :
T° Enterobius vermicularis
FROTIS PERIANAL T° ambiente
ambiente Ascaris lumbricoides,
Taenia sp.
Hymenolepis nana.
SECRECION T° Frotis en
Trichomona vaginalis.
VAGINAL ambiente lamina
LCR. Naegleria, Acanthamoeba yBalamuthia
SANGRE Tripanosoma,Plasmodium,Leishmania
BIOPSIA DE
4°C Formol 10 % Trichinella spiralis (triquinoscopia)
TEJIDOS
PARASITOLOGICO-HECES,
MATERIAL
Suero fisiológico
Aplicador
Pinza de metal
Coladera de plástico o malla metalica.
PROCEDIMIENTO :
RESULTADOS .
El color anormal ayuda al médico a seleccionar las pruebas tanto químicas como
microbiológicas necesarias para llegar finalmente a extender un buen diagnostico
, pronostico y plan de tratamiento adecuados para el paciente.
A continuación se hará referencia a los colores más comunes que pueden presentar
las heces fecales ya sea por alguna patología o bien por algún otro factor externo :
COLOR SIGNIFICADO
AMARILLO VERDOSO Diarrea abundante.
Como se pude observar la historia clínica del paciente , los antecedentes dietéticos
y el tratamiento bajo el cual se encuentre el paciente , son aspedctos sumamente
importantes que debe saber el Qumico clínico para poder distinguir anormalidades
importantes en las heces fecales de simples interferencias.
EXAMENES PARASITOLOGICOS : Consistencia
Color
CARACT. DE LAS HECES :
Mucus,
I * EXAMEN MACROSCOPICO : Sangre
Especímenes
TAMIZADO
(Nematodos adultos y huevos de Taenia)
METODO DIRECTO
ideal para buscar trofozoitos móviles ó larvas LUGOL : Estructuras internas , núcleos y vacuolas .
Huevos y lavas
* MUESTRA FRESCA DE
HECES
DIARREICAS LIQUIDAS
EXAMEN EN FRESCO
CENTRIFUGAR
MEZCLAR
Y
**TROFOZOITOS:
SEDIMENTO
E.histolytica
Giardia lamblia
SEDIMENTO
Balantidium coli
QUISTES
Balantidium coli FROTIS DEL SEDIMENTO
Giardia lamblia
OOQUISTES: NEGATIVO POSITIVO
Cryptosporidium
**
I. belli
B, hominis
Cyclosporidium BAERMAN HEMATOXILINA ZIEHL-NEELSEN
LARVAS: Larvas Strongyloides FERRICA O
S, stercolaris Coccidios
TRICROMICA
Útil para Ooquistes de
HUEVOS : I, belli
Trofozoito de Entamoeba
H, nana
Quistes de G,lamblia
* TAMIZADO
GENERALIDADES:
Fases de desarrollo:
Huevos: Los huevos que producen los adultos de ambas especies de Taenia
son semejantes e indistinguibles al examen microscópico. Son esféricos, miden de
30 a 45 micras de diámetro y poseen una cápsula gruesa radiada y una membrana
hialina de origen embrionario. En su interior, se encuentra el embrión (oncosfera o
embrión hexacanto) que generalmente posee tres pares de ganchos.
EXAMENES DE LABORATORIO:
MATERIAL y EQUIPO
Aplicadores de madera
Portaobjetos de 25 X 76 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Solución salina isotónica
Lugol
Microscopio
METODO:
a) En un portaobjetos limpio y desengrasado, se colocan separadamente, una gota
de solución salina y otra de lugol.
b) Con el aplicador de madera se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces 8 en
muestras con sangre y moco elegir esa parte para estudiar) y se mezcla con la
solución, con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos,
procurando hacer una suspensión no un frotis.
c) Colocar el cubreobjetos.
d) Repetir estas operaciones en la gota de lugol.
e) Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X. No es recomendable
usar objetivo de inmersión (100 x) , pues se puede ensuciar el microscopio.
Recorrer la lamina siguiendo un sentido direccional , ejemplo :de derecha a
izquierda , o de arriba abajo.
NOTA: Con el suero fisiológico, los trofozoitos y quistes de los protozooarios se observan
en forma natural , y con lugol , las estructuras internas , núcleos y vacuolas.
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
Se informará detalladamente la presencia de alguna forma parasitaria observada
durante el análisis coproparasitoscopico , indicando su especie y estado evolutivo
(trofozoito, quiste en caso de un protozoo) ó (huevo , larva en caso de un helminto)
* COPROPARASITOSCÓPICO MEDIATO O INMEDIATO CON
COLORANTES VITALES
MATERIAL y EQUIPO
Aplicadores de madera
Portaobjetos de 25 X 76 mm
Puente de tinción
Lámpara de alcohol
Azul de metileno al 3.5%
Agua destilada
Microscopio
METODO:
a) En un portaobjetos se coloca una gota de azul de metileno al 3.5%
b) Se toma una porción pequeña de heces fecales con un aplicador y se realiza
una suspensión homogénea con el colorante.
c) Se deja actuar el colorante por 3 minutos o bien se flamea pero sin que
hierva la muestra, sólo hasta la emisión de vapores. Observar al microscopio
con objetivos de 10X y 40X.
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo
(trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
FUNDAMENTO: Se basa en que los quistes y/o huevos de los parásitos flotan en
la superficie por ser de menor densidad que el sulfato de zinc a 33,3%, cuya
densidad es 1180. Es útil para la búsqueda de quistesy/o huevos de parásitos y
excepcionalmente se observan larvas. Se recomienda controlar la densidad del
sulfato de zinc y usar agua filtrada para el lavado previo de la muestra.
MATERIAL y EQUIPO
Vaso de precipitado de 50 ml
Tubos de ensaye de 15 X 100 mm
Gradilla
Embudo de polietileno
Gasa cortada en cuadros de 15 cm por lado
Portaobjetos de 76 X 26 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Aplicadores de madera
Asa de alambre terminada en círculo de 3 a 5 mm
de diámetro y formando ángulo recto con el resto
del alambre.
Solución de Sulfato de Zinc 1.180° Baumé
Lugol
Microscopio
Centrífuga
METODO:
a) Se hace una suspensión homogénea con 1 g de materia fecal y 10 ml de
agua.
b) Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, colectando
el filtrado directamente en el tubo.
c) Se centrifugan los tubos a 2000 rpm durante 1 min.
d) Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con agua. Se
centrífuga nuevamente, repitiendo la misma operación hasta que el
sobrenadante se observe limpio.
e) Se decanta el último sobrenadante, se resuspende el sedimento y se agrega
Sulfato de Zinc 1.180° Baumé y se centrífuga a 2000 rpm durante 1 min.
f) Con el asa se recoge la muestra de la película superficial que se encuentra
en el menisco, dos o tres ocasiones y se deposita sobre el portaobjetos; se
añade una gota de lugol, se mezcla con el ángulo del cubreobjetos y se cubre
con el mismo.
g) Se observa la preparación con objetivos de 10 X y 40 X.
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo
(trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
Unas ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas
parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada
antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de
tratamiento y determinación de frecuencia.
MATERIAL y EQUIPO
Centrífuga
Tubos de ensaye cónicos de 15 ml
Gasa cortada en cuadros de 15 cm
por lado
Embudos de polietileno
Vasos de precipitado de 50 ml
Aplicadores de madera
Pipetas Pasteur con bulbo
Portaobjetos de 26 X 76 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Solución salina isotónica
Solución de formaldehido al 10%
Microscopio
METODO
a) Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia
fecal en el vaso de precipitado, se añaden 10 ml de solución salina y se
homogeniza.
b) Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo
el filtrado en el tubo cónico.
c) Se centrífuga la suspensión durante 1 min a 2000 rpm.
d) Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con solución
salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo las veces necesarias
hasta que el sobrenadante sea claro.
e) Al último sedimento se agregan 10 ml de solución de formaldehído al 10%,
se mezcla y se deja reposar durante 10 min.
f) 6.- Se añaden después 5 ml de éter, se tapan los tubos con tapones de
caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos.
g) Se centrífuga durante 2 minutos a 1500 rpm.
h) Después de centrifugar se observan 4 capas:
éter en la superficial,
un tapón de restos fecales,
formaldehído,
sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo
(trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
MATERIAL y EQUIPO
Probeta graduada de 100 ml con
tapón esmerilado
Pipetas de Stoll o graduadas de 2 ml
en 0.01 ml.
Varilla de vidrio de 20 cm de longitud
Perlas de vidrio
Portaobjetos de 74 X 38 mm
NaOH 0.1 N
Microscopio
METODO:
a) Se coloca en la probeta Hidróxido de Sodio 0.1 N hasta la marca de 56 ml.
b) Con la varilla de vidrio, se añade materia fecal hasta aforar a 60 ml.
c) Si las heces son duras, se espera un tiempo a que se reblandezcan.
d) Se añaden 15 perlas de vidrio, se tapa la probeta, se agita fuertemente, de
arriba abajo, durante 1 minuto, hasta formarse una suspensión homogénea.
e) Los huevos y restos empiezan a precipitar en cuanto cesa la agitación. Con
la pipeta se toma inmediatamente 0.075 o 0.15 ml del centro de la
suspensión. Se recomienda el segundo volumen, que da una muestra mayor
para el recuento. Llevando la punta de la pipeta al centro del matraz, el error
debido a la precipitación de los huevos disminuye.
f) Se pasa la totalidad del contenido de la pipeta a un portaobjetos y se cubre
la gota con el cubreobjetos.
g) Se examina la preparación sistemáticamente con el objetivo seco débil y se
cuentan todos los huevos y larvas presentes cuidando no contar dos veces
la misma estructura.
CALCULOS:
El número de huevos y larvas contados se multiplica por:
100, si la materia fecal es dura.
200, si la materia fecal es pastosa.
400, si la materia fecal es líquida.
NOTA:
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo
(trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
METODO:
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo
(trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
MATERIAL y EQUIPO
Portaobjetos De 26 X 76 mm
Abatelenguas
Cinta de celulosa Scotch
Microscopio
METODO:
a) Sobre un extremo del abatelenguas se coloca la cinta Scotch con la parte
adherente hacia fuera, sujetándola con los dedos pulgar e índice.
b) Se presiona la superficie sobre la región perianal hacia uno y otro lado,
finalmente se hace un frote perianal.
c) Separar cuidadosamente la cinta del abatelenguas y adherirlo sobre un
portaobjetos.
d) Observar con objetivo de 10X.
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo
(trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
FUNDAMENTO: este método permite Realizar un cultivo de huevos para obtener desarrollo
de larvas y así poder precisar la especie.
MATERIAL Y EQUIPO:
Agua Destilada
Tubos de ensaye de punta cónica de 15 ml
Gradilla
Abatelenguas o aplicadores de madera
Tiras de papel filtro de 13 X 120 mm
Portaobjetos de 26 X 76 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Pipetas Pasteur con bulbo
Sol. De lugol o ácido acético al 20%
Microscopio
METODO:
a) Se extiende una fina película de heces ( de 1 a 2 mm) en un lado del tercio medio
de una tira de papel filtro.
b) Se coloca el papel en un tubo de ensaye con 3 ml de agua destilada forzando la tira
hasta aproximadamente el nivel de 1 cm y presionando el lado limpio contra la pared
del tubo.
c) Se conserva el cultivo a temperatura ambiente (24-28°C) en la oscuridad durante un
periodo de 1-5 días añadiendo agua según se vaya necesitando para mantener el
nivel bastante por encima del extremo inferior del papel filtro.
d) El flujo capilar del agua que sube a través del papel y la película fecal mantiene
húmedas las heces y transporta sus elementos solubles hacia la parte superior del
papel, donde se evaporan o acumulan en un depósito oscuro.
e) Al alcanzar la fase infecciosa, las larvas migran hacia abajo contra la corriente del
flujo del agua, y al alcanzar el nivel de ésta se sumergen hacia el fondo, donde
pueden verse con una lupa y tomarse con una pipeta para su examen microscópico.
f) La tira de papel filtro puede transferirse a un tubo limpio lleno de agua para recoger
las larvas que hayan podido quedar en la película fecal.
g) Algunas especies de larvas tienen tendencia a no migrar hacia abajo. Antes de
retirarlas, las larvas pueden inmovilizarse introduciendo el tubo a baño María (50-
60°C) o añadiendo una cantidad de ácido Acético al 20%.
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá anotar
en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo (trofozoito o
quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
* METODO DE BAERMAN
METODO:
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá anotar
en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo (trofozoito o
quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
*ESTUDIO DE AMIBAS DE VIDA LIBRE
GENERALIDADES:
Las amebas de vida libre son numerosas y se encuentran en la naturaleza,
en medios como: agua, suelos y vegetación. Los géneros Naegleria y
Acanthamoeba ; tienen importancia en salud pública ya que pueden producir
enfermedades de tipo mortal como la meningoencefalitis.
La puerta de entrada para estas amebas al ser humano es a través de la piel o de
las mucosas, así como también la inhalación de agua o aire contaminados con estos
patógenos. Una vez en el organismo, aparece una lesión y a través del sistema
circulatorio, las amebas pueden alcanzan el sistema nervioso central. En este tipo
de infección las lesiones se caracterizan por formar gránulos o tumoraciones en los
tejidos.
DIAGNOSTICO EN EL LABORATORIO:
METODO
a) Colocar en un lado del portaobjetos una gota de solución salina y del otro
extremo una gota de lugol.
b) Agregar una porción de materia fecal porcina y homogeneizar.
c) Colocar el cubreobjetos procurando no hacer vacíos.
d) Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X.
e) Hacer los dibujos y anotar resultados.
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo
(trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
MATERIAL Y EQUIPO
Microscopio
Hisopo
Portaobjetos
Cubreobjetos
Tubo de ensaye con sol. Isotónica estéril
Espejo vaginal
Puente de tinción
Pipeta Pasteur con bulbo
Aceite de inmersión
Colorante de Wright
Secreción vaginal, uretral u orina
Pizeta con agua destilada
METODO:
a) Se coloca a la paciente en posición ginecológica.
b) Introducir con cuidado el espejo vaginal.
c) Con un hisopo tomar la muestra del fondo de saco posterior.
d) Depositar la primera toma en un portaobjetos limpio y hacer un extendido.
e) La segunda toma depositarla en un tubo de ensaye con solución salina conservando
a 37°C.
f) Una vez seco el extendido se procede a teñir con el colorante de Wright de 1 a 3
min.
g) Se observa al microscopio con objetivos de 10X, 40X y 100X agregando a éste
último aceite de inmersión.
h) Con una pipeta Pasteur se toma una gota del fondo del tubo de ensaye y se deposita
en un portaobjetos y se cubre.
i) Examinar con objetivos de 10X y 40X.
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá anotar
en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo (trofozoito o
quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos).
METODO:
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá
anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo
(trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de
helmintos).
* ESTUDIO DE PLASMODIUM
GENERALIDADES:
El procedimiento para el diagnóstico de protozoos en sangre circulante es el
estudio al microscopio de preparaciones en portaobjetos las cuales son la extensión
fina y la gruesa. La extensión fina ideal es la que tiene el grosor de una célula y en
la que los elementos celulares aparecen algo aplanados. La extensión fina es útil
para estudiar detalles de los hematíes y de los parásitos de la sangre, su principal
limitación es que la cantidad de sangre presente en la muestra es pequeña.La
extensión gruesa contiene 6-20 veces más sangre por unidad de superficie que la
extensión fina. Es fundamental que no se fije antes de la tinción ya que los hematíes
tienen que deshemoglobinizarse durante el procedimiento.
MATERIAL Y EQUIPO:
portaobjetos
Cubreobjetos
Frasco coplin o placas Petri
Colorante de hematoxilina
Cytoseal o bálsamo de Canadá
Alcoholes 50%, 70%, 85%, 95%
Solución Schaudinn
Solución mordiente de sulfato de fierro y amonio
Tintura de yodo
Solución fisiológica
Microscopio binocular
METODO:
a) Preparar un set de placas petri 100 x 150 mm o el frasco Coplin con los reactivos
correspondientes y con ayuda de un estilete o pinza curva hacer un frotis fino en la
lámina o la laminilla, esta última sujeta al porta-laminilla.
b) Si la muestra es dura, hacer una emulsión previa en solución fisiológica, realizar el
frotis y pasaren solución Schaudinn por 3 a 5 minutos.
c) Pasar por alcohol 70% más 1 a 2 gotas de tintura de yodo por 5 minutos
d) Pasar por alcohol 70% y 50% de 5 a 10 minutos cada vez.-Pasar por agua corriente
por 5 a 10 minutos
e) Pasar por la solución mordiente 2% de 5 a 10 minutos y enjuagar con agua corriente.
f) Pasar por colorante por 5 a 10 minutos (1 mL de solución colorante hematoxilina y
9 mL de agua)
g) Lavar con agua y pasar por una segunda solución de mordiente al 2% para
decolorar, observandola intensidad de la coloración
h) Lavar con agua corriente a chorro continuo de 10 a 15 minutos
i) Deshidratar pasando por alcohol 70%, 85%, 95% y absoluto, de 10 a 15 minutos
cada uno
j) Aclarar con xilol agitando el frotis, montar con cytoseal o bálsamo de Canadá y
observar al microscopio.
k) Informar el nombre del parásito y el estadio evolutivo
NOTA:
Observar con objetivo de inmersión 1000x. El citoplasma de los parásitos se observan de
color azul oscuro y los núcleos de color morado intenso a negruzco.
MATERIAL Y EQUIPO:
Portaobjetos
Cubreobjetos
Puente para tinción
Fucsina fenicada
Verde de malaquita o azul de metileno acuoso
Metanol
Hidróxido de sodio al 4%
Alcohol acido
METODO:
a) Realizar un frote de heces en el portaobjetos y dejar secar.
b) Colocar las laminas sobre el puente de tinción
c) Fijar la lamina con alcohol metílico de 2 a 3 minutos y dejar secar
d) Agregar hidróxido de sodio, sobre el preparado por un minuto y eliminar el
exceso con agua de la llave.
e) Cubrir la lamina con fucsina fenicada (previa agitación del frasco que
contiene dicho reactivo). Por 5 minutos. Es importante recordar que la fucsina
debe ser diluida previamente con agua al tercio (1 ml de colorante mas 2 ml
de agua)
f) Lavar suavemente la lamina con agua corriente
g) Cubrir el portaobjetos con alcohol acido por unos segundos hasta quitar el
colorante.
h) Lavar suavemente la lamina con agua corriente
i) Colocar el colorante de contraste a la lamina que puede ser verde de
malaquita al 1% o azul de metileno al 1.4%, durante 5 minutos( diluidas
previamente al tercio)
j) Lavar suavemente la lamina con agua corriente y secar a temperatura
ambiente.
k) Realizar el montaje con cytoseal, bálsamo de Canadá o Permount, cubrir con
un portaobjetos.
l) Observar al microscopio.
NOTA:
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algún parasito acido alcohol resistente en la tinción se deberá anotar
en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo .
*PROTOZOOARIOS INTESTINALES:
ENTAMOEBAS :
TROFOZOITO
QUISTE Entamoeba :
FLAGELADO
AMEBA TROFOZOITO QUISTE
TRANSITORIO
Naegleria fowleri
Acanthamoeba sp..
Balamuthia mandrillaris..
*PROTOZOOARIOS FLAGELADOS :
* HELMINTOS :
HUEVOS DE NEMATODOS Y CESTODOS PRESENTES EN HECES :
* HELMINTOS :
HUEVOS DE NEMATODOS Y CESTODOS PRESENTES EN HECES :
* HUEVOS DE TREMATODOS PRESENTES EN LAS HECES
Cinetoplasto
Gránulos de
votulina
Cuerpo Membrana
Basal ondulante
Membrana Núcleo
ondulante
Núcleo Núcleo
Núcleo
*Forma transitoria
* Plasmodium
*Forma infectante al hombre
FASE ERITROCITARIA :
Los fijadores sirven para preservar protozoarios, sin que se modifiquen las
estructuras internas, sobre todo cuando las muestras no pueden ser procesadas
inmediatamente.
I. PAF (phenol-alcohol-formol):
UTILIDAD:
Conserva las estructuras de los parásitos (trofozoítos, quistes, huevos y
larvas), pudiéndose incluso observarse en semanas o meses (6) sin que haya
ocurrido deterioro alguno. Es recomendable mantener el fijador preparado en
frascos color ámbar. Además, permite observar el material al microscopio.
MATERIAL:
Fijador PAF
Tionina o azure A
Agua destilada.
Hisopo.
Tubos de centrífuga de 15 mL.
Aplicadores.
Tritón NE. Éter.
Embudo de vidrio.
Solución fisiológica
PROCEDIMIENTO:
a) La muestra de heces se mezcla con el fijador en un recipiente en la
proporción 1:1.
b) Para la observación microscópica. Mezclar bien la muestra fijada en PAF y
con ayuda de un embudo y una gasa doblada en un tubode 15 mL, colar de
3 a 4 mL del material fijado
c) Agregar solución salina hasta un volumen de 12 mL y centrifugar a 1800
r.p.m. por 3 minutos.
d) Decantar el sobrenadante y obtener un sedimento de 0,5 mL; si es menor,
agregar de la muestra filtrada una cantidad suficiente y volver a centrifugar
para obtener el volumen del sedimento deseado.
e) Decantar el sobrenadante y completar 12 mL con solución fisiológica,
emulsionar con el aplicador centrifugar a 1800 r.p.m. por 3 minutos.
f) Repetir el centrifugado y lavar de 2 a 3 veces más.
g) Agregar 2 mL de solución fisiológica al sedimento final, emulsionar y obtener
una gota del sedimento con una pipeta Pasteur y colocarla en una lámina
portaobjetos
h) Agregar una gota del colorante tionina o azure A, cubrir con una laminilla
cubreobjetos y examinar al microscopio.
i) Al sedimento emulsionado y sobrante del procedimiento anterior, agregar 10
mL de solución fisiológica y una gota de Triton NE.
j) Mezclar, agregar 2 mL de éter, tapar con un tapón de jebe o de corcho, agitar
suavemente y destapar.
k) Centrifugar a 2 000 r.p.m. por 3 minutos, decantar y eliminar los detritus de
las paredes del tubo mediante un aplicador cubierto de algodón.
l) Agregar al sedimento 1 ó 2 gotas de solución fisiológica, mezclar y obtener
del fondo del tubo con una pipeta Pasteur una gota que se colocará en una
lámina portaobjeto.
m) Agregar una gota de colorante tionina o azure A, cubrir con una laminilla y
observar al microscopio
NOTA:
Se deberán observar los elementos parasitarios: el citoplasma se ve de color
azul y el núcleo azul oscuro.
UTILIDAD:
Fija y preserva, principalmente los trofozoítos y quistes de protozoarios, por
tiempo muy prolongado sin modificación importante de su morfología.
MATERIAL:
Solución fijadora
Conservador de PVA
Aplicador
Viales de vidrio de 3 a 4 mL.
Portaobjetos
PROCEDIMIENTO:
a) Colocar en una lámina portaobjetos 1 ó 2 mg de muestra,
b) Secar el frotis, agregar 2 ó 3 gotas de PVA y secar o guardar hasta por 3
meses para colorearlos,
c) Agregar al frasco que contiene la muestra v/v 1 a 4 mL. Generalmente se
puede preservar por meses y cuando se considere conveniente se realizará
la coloración con Trichrome Gomori Wheatley.
UTILIDAD:
Fija y colorea simultáneamente los quistes y huevos de parásitos,
permitiendo la observación inmediata de la muestra.
MATERIAL:
Solución MIF
Viales de vidrio de 3 a 4 mL.
Aplicador
PROCEDIMIENTO:
a) Colocar 1 ó 2 mL de la solución MIF en el vial con ayuda del una pipeta.
b) Para la observación microscópica, colocar 1 ó 2 mL o su equivalente de la
muestra fresca de heces.
c) Mezclar y observar al microscopio.
NOTA:
Se deberán observar los parásitos teñidos de color amarillo oro.
UTILIDAD:
.
MATERIAL:
Formol 10%
Solución AFA
Alcohol 70%
Glicerina 5%
Láminas portaobjetos.
Pabilo o pesas de metal según modelo
Frascos boca ancha 150 – 200 mL.
Placas petri 150 x 100 mm y 240 x 200 mm.
PROCEDIMIENTO:
Colección y lavado de los helmintos:
Fijación:
Aplanamiento:
g) Útil para céstodes y tremátodes, los cuales se colocan entre láminas y se les
ajusta con el pabilo para favorecer su aplanamiento
h) Se sumerge en formol 10% o AFA de 1 a 3 días, luego del cual se puede
colorear o conservar como pieza de museo en formol 10% y glicerina 5%.
i) Los tremátodes como Fasciola y/o Paragonimus pueden prepararse y
conservarse siguiendo los pasos dados para los céstodos.
AFA: Fijador conteniendo alcohol, formol y ácido acético.
CÁPSULA OVÍGERA: Vesícula que contiene huevos.
CESTODO: Gusano o helminto platelminto de forma acintada.
COLORANTE VITAL: Colorante que permite ver la estructura interna del
parásito vivo.
COPRO-ANTÍGENO: Antígeno presente en las heces.
CRISTAL DE CHARCOT - LEYDEN: Cristales de proteínas provenientes de
los gránulos de eosinófilos, que se destruyen en el intestino.
DIAFANIZAR: Aclarar para facilitar la visualización microscópica
DIAGNÓSTICO PARASITOLÓGICO: Demostración directa o indirecta de
alguna forma o estadio evolutivo del parásito.
ENTEROPARÁSITO: Parásito que tiene por hábitat el tubo digestivo,
especialmente el intestino.
ESPORA: Esporoquiste aislado.
ESPOROQUISTE: Quiste con cubierta definida que contiene esporozoítos.
ESTRÓBILA: Porción del cuerpo de las tenias o céstodes formadas por una
cadena de proglótidos.
FIJACIÓN: Conservación de la estructura del parásito.
HECES: Mezcla de productos de excreción y secreción que se eliminan por
el intestino.
HELMINTO: Ser pluricelular con exoesqueleto flexible, ausencia de
apéndices y con movimientos reptantes.
HPG: Número de huevos por gramo de heces.
HUEVO: Producto de la fecundación con potencialidad de desarrollar un
nuevo ser.
LARVA: Estadio evolutivo de algunos seres vivos como los helmintos y los
artrópodos en quienes aún no se han desarrollado los aparatos genitales.
MIF: Fijador que contiene merthiolate, yodo y formol.
MONTAR: Colocar el espécimen entre lámina y laminilla con bálsamo de
Canadá para su conservación permanente.
NEMATODO: Gusano o helminto de forma cilíndrica.
OOQUISTE: Quiste que contiene el huevo o cigoto.
PAF: Fijador y/o conservador conteniendo fenol, alcohol y formol para
muestras con parásitos, sobretodo protozoario.
PVA: Alcohol polivinílico, fijador para conservar los parásitos en muestras
fecales.
PARÁSITO: Ser vivo de escala zoológica inferior que vive a expensas de otro
de escala superior.
PATOGENICIDAD: Capacidad de producir daño.
PROTOZOARIO: Ser unicelular.
PROGLÓTIDE: Segmento o anillo de la estróbila de las tenias o céstodes y
que puede ser inmaduro, maduro o grávido, según el estadío de desarrollo
de sus aparatos genitales.
QUISTE: Forma de resistencia de los protozoos, los cuales se rodean de una
membrana dura e impermeable.
SOLUCIÓN SOBRESATURADA: Solución en la cual el soluto está en su
máxima concentración.
TROFOZOÍTO: Forma vegetativa, libre y en movimiento de los protozoos.
TREMÁTODE: Gusano aplanado o platelminto, que presenta su cuerpo
indivisible.
BIBLIOGRAFIA:
http://groups.msn.com/parasitologia1
http://www.invdes.com.mx/anteriores/Febrero2002/htm/amebas.html
http://www.drscope.com/privados/pac/generales/parasitologia/teniasis.html
http://www.scribd.com/doc/2362490/Manual-parasitologia-laboratorio-parte-I
http://www.scribd.com/doc/2362916/MANUAL-PARASITOLOGIA-
LABORATORIO-PARTE-II
http://www.scribd.com/doc/995852/165-NT37