Inhibidor enzimático

MARCO TEORICO

Los inhibidores enzimáticos son moléculas que se unen a enzimas y disminuyen

su actividad. Puesto que elbloqueo de una enzima puede matar a un organismo pa
tógeno o corregir un desequilibrio metabólico, muchosmedicamentos actúan como
inhibidores enzimáticos. También son usados como herbicidas y pesticidas. Sinem
bargo, no todas las moléculas que se unen a las enzimas son inhibidores; los activ
adores enzimáticos se unen alas enzimas e incrementan su actividad.
La unión de un inhibidor puede impedir la entrada del sustrato al sitio activo de la e
nzima y/u obstaculizar que laenzima catalice su reacción correspondiente. La unió
n del inhibidor puede ser reversible o irreversible. Normalmente, los inhibidores irre
versibles reaccionan con la enzima de forma covalente y modifican su estructura q
uímica a nivelde residuos esenciales de los aminoácidos necesarios para la activid
ad enzimática. En cambio, los inhibidoresreversibles se unen a la enzima de forma
no covalente, dando lugar a diferentes tipos de inhibiciones, dependiendode si el in
hibidor se une a la enzima, al complejo enzima-sustrato o a ambos.
Muchos medicamentos son inhibidores enzimáticos, por lo que su descubrimiento
y mejora es un campo deinvestigación activo en la bioquímica y la farmacología.
La validez de un inhibidor enzimático medicinal suele venirdeterminada por su esp
ecificidad (su carencia de unirse a otras proteínas) y su potencia (su constante ded
isociación, la cual indica la concentración necesaria para inhibir a una enzima). Un
a alta especificidad y potenciaasegura que el medicamento va a tener pocos efecto
s secundarios y por tanto una baja toxicidad.
Los inhibidores enzimáticos también son usados en la naturaleza y están implicado
s en la regulación delmetabolismo. Por ejemplo, las enzimas en una ruta metabólic
a pueden ser inhibidas por los productos resultantes desus respectivas rutas. Este
tipo de retroalimentación negativa retarda el flujo a través de la ruta cuando los pro
ductoscomienzan a acumularse y es una manera importante de mantener la home
ostasis en una célula. Otros inhibidoresenzimáticos celulares son proteínas que se
unen específicamente e inhiben una diana enzimática. Esto puedeayudar a control
ar enzimas que pueden ser dañinas para la célula, como las proteasas o nucleasas
. Un buenejemplo es el inhibidor de la ribonucleasa, que se une a esta enzima en u
na de las interacciones proteína–
proteínamás fuertes conocidas.[1] Como inhibidores enzimáticos naturales también
cabe destacar los venenos, que sonusados como defensa contra los depredadores
o como forma de matar a una presa.
 1 ) Inhibidores ó sustractos reversibles

Los inhibidores reversibles se unen a las enzimas mediante interacciones no coval

entes tales como los puentes dehidrógeno, las interacciones hidrofóbicas y los enla
ces iónicos. Los enlaces débiles múltiples entre el inhibidor y elsitio activo se combi
nan para producir una unión fuerte y específica. Al contrario de lo que ocurre con el
sustrato y losinhibidores irreversibles, los inhibidores reversibles generalmente no
experimentan reacciones químicas cuando seunen a la enzima y pueden ser elimin
ados fácilmente por dilución o por diálisis.
Tipos de inhibidores reversibles

Inhibición competitiva:el sustrato (S) y elinhibidor (I) compitenpor el sitio activo.

Existen tres tipos de inhibidores reversibles. Se clasifican en base al efecto produci
do por la variación de laconcentración del sustrato de la enzima en el inhibidor.

En la inhibición competitiva, el sustrato y el inhibidor no se pueden unir a la mis
ma enzima al mismo tiempo, comose muestra en la figura de la derecha. Esto gen
eralmente ocurre cuando el inhibidor tiene afinidad por el sitio activode una enzima
en el que también se une el sustrato; el sustrato y el inhibidor compiten para el acc
eso al sitio activode la enzima. Este tipo de inhibición se puede superar con conce
ntraciones suficientemente altas del sustrato, esdecir, dejando fuera de competició
n al inhibidor. Los inhibidores competitivos son a menudo similares en estructura al
sustrato verdadero (ver ejemplos expuestos más abajo).
 En la inhibición mixta, el inhibidor se puede unir a la enzima al mismo tiempo que
el sustrato. Sin embargo, la unióndel inhibidor afecta la unión del sustrato, y viceve
rsa. Este tipo de inhibición se puede reducir, pero no superar alaumentar las conce
ntraciones del sustrato. Aunque es posible que los inhibidores de tipo mixto se una
n en el sitioactivo, este tipo de inhibición resulta generalmente de un efecto alostéri
co donde el inhibidor se une a otro sitio queno es el sitio activo de la enzima. La un
ión del inhibidor con el sitio alostérico cambia la conformación (es decir, laestructur
 a terciaria o la forma tridimensional) de la enzima de modo que la afinidad del sustr
ato por el sitio activo sereduce.
 La inhibición no competitiva es una forma de inhibición mixta donde la unión del
inhibidor con la enzima reduce suactividad pero no afecta la unión con el sustrato.
Como resultado, el grado de inhibición depende solamente de laconcentración de i
nhibidor.

1.2 ) Descripción cuantitativa de la inhibición reversible

La inhibición reversible puede ser descrita cuantitativamente en términos de la unió

n del inhibidor a la enzima y alcomplejo enzima-
sustrato, y sus efectos en las constantes cinéticas de la enzima. En el esquema clá
sico deMichaelis-
Menten mostrado abajo, una enzima (E) se une a su sustrato (S) para formar el co
mplejo enzima-
sustratoES. En la catálisis, este complejo se rompe para liberar el producto P y la e
nzima E. El inhibidor (I) puede unirsetanto a E como a ES con las constantes de di
sociación Ki o Ki', respectivamente.


Los inhibidores competitivos se pueden unir a E, pero no a ES. La inhibición co

mpetitiva aumenta el valor de Km (es decir, elinhibidor interfiere con la unión del su
strato), pero no afecta a laVmax (el inhibidor no obstaculiza la catálisis en ES porqu
e no sepuede unir a ES).

 Los inhibidores no competitivos tienen afinidades idénticas por Ey ES (Ki = Ki').

La inhibición no competitiva no cambia la Km (esdecir, no afecta a la unión del sust
rato) pero disminuye la Vmax (esdecir, la unión del inhibidor obstaculiza la catálisis).

 Los inhibidores de tipo mixto se unen tanto a E como a ES, perosus afinidades
por estas dos formas de enzimas son distintas (Ki ≠ Ki'). Por lo tanto, los inhibidore
s de tipo mixto interfieren con launión del sustrato (incremento de Km) y dificulta la
catálisis en elcomplejo ES (disminución de la Vmax).
Cuando una enzima tiene múltiples sustratos, los inhibidores pueden mostrar distin
tos tipos de inhibicionesdependiendo del sustrato que se considere, ya que el sitio
activo posee dos diferentes lugares para la unión con elsustrato en el mismo sitio a
ctivo, uno para cada sustrato. Por ejemplo, un inhibidor puede competir con el sust
rato Apor el primer sitio de unión, pero ser un inhibidor no competitivo con respecto
al sustrato B en el segundo sitio deunión

1.2.1 )
Medición de las constantes de disociación en un inhibidor re
versible

Diagramas de Lineweaver-
Burke de los diferentes tipos deinhibidores enzimáticosreversibles. La flecha muest
ra elefecto producido por elincremento de lasconcentraciones de inhibidor.
Según lo observado arriba, un inhibidor enzimático está caracterizado por sus dos
constantes de disociación, Ki y Ki', de la enzima y del complejo enzima-
sustrato, respectivamente. La constante del complejo enzima-
inhibidor Ki puedeser medida directamente por varios métodos. Un método extrem
adamente exacto es la calorimetría isoterma detitulación, en donde el inhibidor es ti
tulado en una solución de enzimas y el calor liberado o absorbido es medido.[4]Sin
 embargo, la otra constante de disociación Ki' es difícil de medir directamente, ya qu
e el complejo enzima-
sustratotiene un periodo de vida muy corto y está dando lugar a la reacción químic
a para formar el producto. Por lo tanto, Ki' suele medirse de forma indirecta, observ
ando la actividad enzimática bajo varias concentraciones de sustrato einhibidor, y a
justando los datos[5] a una ecuación de Michaelis–Menten modificada:
Así, en presencia del inhibidor, la efectividad de la enzima Km y Vmax es ahora (α/α')
Km y (1/α')Vmax, respectivamente. Sin embargo, la ecuación de Michaelis-
Menten modificada asume que la unión del inhibidor a laenzima alcanza el equilibri
o, el cual puede ser un proceso muy lento para los inhibidores con constantes secu
ndariasnanomolares de disociación. En estos casos, es usualmente más práctico tr
atar al inhibidor de unión fuerte como uninhibidor irreversible (ver abajo). Sin emba
rgo, todavía puede ser posible estimar Ki' cinéticamente si Ki es medidoindependie
ntemente.
Los efectos de diferentes tipos de inhibidores enzimáticos reversibles en la activida
d enzimática pueden servisualizados usando la representación gráfica de la ecuaci
ón de Michaelis–Menten, mediante los diagramas deLineweaver-Burke o de Eadie-
Hofstee. Por ejemplo, en los diagramas de Lineweaver-
Burk a la derecha, las líneas dela inhibición competitiva intersecan el eje-
y, ilustrando que tales inhibidores no afectan a la Vmax. De igual manera, las líneas
de la inhibición no competitiva intersecan el eje-
x, mostrando que estos inhibidores no afectan a la Km. Sinembargo, puede ser com
plicado estimar Ki y Ki' con precisión en estos diagramas,[6] por lo que es recomend
ableestimar estas constantes usando métodos más fiables de regresión no lineal, s
egún lo descrito arriba

1.3 ) Casos especiales

 El mecanismo de la inhibición parcialmente competitiva es similar al de la inhibi
ción no competitiva, excepto queel complejo EIS tiene actividad catalítica, la cual d
ecrece o incluso aumenta (activación parcialmente competitiva) encomparación al
complejo enzima-
sustrato (ES). Esta inhibición suele exhibir un valor más bajo de Vmax, pero un valor
de Km inalterado.[7]
 La inhibición no competitiva se produce cuando el inhibidor se une sólo al compl
ejo enzima-
sustrato, no a laenzima libre. El complejo EIS es catalíticamente inactivo. Esta form
a de inhibición es rara y causa una disminucióntanto en el valor de Vmax como en el
de Km.[7]
 La inhibición por sustrato y por producto es donde el sustrato o el producto de
una reacción enzimática inhiben laactividad enzimática. Este tipo de inhibición pue
de seguir los patrones competitivos, no competitivos o mixtos. En lainhibición por s
ustrato hay una disminución progresiva de la actividad a altas concentraciones de
sustrato. Estopuede indicar la existencia de dos sitios de unión entre sustrato y enz
ima. Cuando hay poco sustrato, se ocupa elsitio de alta afinidad y sigue la cinética
normal. Sin embargo, a altas concentraciones, el segundo sitio de inhibiciónse ocu
pa, inhibiendo a la enzima.[8] La inhibición por parte del producto es a menudo una
característica reguladoraen el metabolismo y puede ser una forma de retroalimenta
ción negativa.
 La inhibición lenta y fuerte se produce cuando el complejo enzima-
inhibidor EI inicial experimenta unaisomerización a un segundo complejo más fuert
emente unido, EI*, pero el proceso total de la inhibición es reversible. Esto se mani
fiesta como un lento aumento en la inhibición enzimática. En estas condiciones, la t
radicional cinética deMichaelis–
Menten da un valor falso para Ki, el cual depende del tiempo. El verdadero valor de
Ki puede ser obtenidoa través de un análisis más complejo de las constantes de ra
ngo de encendido (kon) y apagado (koff) para laasociación del inhibidor (véase la inh
ibición irreversible para más información).

 Ejemplos de Inhibidores reversibles

Estructura molecular delritonavir, un inhibidor deproteasa de carácterpeptídico.

Puesto que las enzimas han evolucionado para unirse a sus sustratos fuertemente,
y la mayoría de los inhibidoresreversibles se unen al sitio activo de las enzimas, e
s poco sorprendente que algunos de estos inhibidores sean muysimilares en estruc
tura a los sustratos de sus dianas. Como ejemplo de estos imitadores de sustratos
caben destacarlos inhibidores de la proteasa, una clase muy efectiva de fármacos
antirretrovirales usados para tratar el VIH.[9] Laestructura del ritonavir (figura de la d
erecha), un inhibidor de la proteasa, consiste en un péptido con tres enlacespeptídi
cos. Dicha estructura se asemeja a la proteína que es el sustrato de la proteasa de
l VIH, por lo que amboscompiten por la unión al sitio activo de la enzima.
Los inhibidores enzimáticos son a menudo diseñados para imitar el estado de trans
ición o intermedio de unareacción catalizada por una enzima. Esto asegura que el i
nhibidor cambie el estado de transición estableciendo unefecto en la enzima, lo qu
e resulta en una afinidad de unión mejor (baja Ki) que los diseños basados en sustr
atos. Unejemplo de un inhibidor en ese estado de transición es el fármaco antiviral
oseltamivir, que imita la naturaleza planadel anillo del ion oxonio en la reacción de l
a neuraminidasa, una enzima del virus.[10]

Estructura molecular deltipranavir, un inhibidor deproteasa de carácter nopeptídico.

Sin embargo, no todos los inhibidores están basados en la estructura del sustrato.
Por ejemplo, la estructura de otroinhibidor de la proteasa del VIH, el tipranavir,
(representada a la derecha), no está basada en un péptido y no tienesimilitudes est
ructurales obvias con la proteína sustrato. Estos inhibidores no peptídicos pueden
ser más establesque los inhibidores que contienen enlaces peptídicos porque esto
s no son sustratos para las peptidasas, con lo queson menos propensas a ser degr
adadas en la célula.
En el diseño de fármacos es importante considerar las concentraciones de sustrato
a las cuales se expondrá laenzima en cuestión. Por ejemplo, algunos inhibidores d
e proteínas quinasas tienen estructuras químicas que sonsimilares al adenosín trifo
sfato, uno de los sustratos de esta enzima. Sin embargo, ciertos fármacos que son
simplemente inhibidores competitivos tendrán que competir con altas concentracio
nes de ATP en la célula. Lasproteínas quinasas también pueden ser inhibidas por
competencia en el sitio de unión donde la quinasa interactúacon sus proteínas sust
rato, y la mayoría de las proteínas presentes en el interior de una célula se encuent
ran aconcentraciones mucho menores que las concentraciones de ATP. En consec
uencia, si dos inhibidores de proteínasquinasas se unen en sus sitios activos con a
finidad similar, pero solo uno tiene que competir con el ATP, entonces elinhibidor c
ompetitivo en el sitio de unión de la proteína inhibirá a la enzima más
eficientemente

1.4 ) Inhibidores irreversibles

Reacción del inhibidor irreversiblediisopropilfluorofosfato (DFP) con unaserín-

proteasa.
Los inhibidores irreversibles normalmente modifican una enzima covalentemente,
con lo que la inhibición no puedeser invertida. Los inhibidores irreversibles suelen
contener grupos funcionales reactivos como mostazasnitrogenadas, aldehídos, hal
oalcanos o alquenos. Estos grupos electrofílicos reaccionan con las cadenas deam
inoácidos para formar uniones covalentes. Los residuos modificados son aquellos
que contienen en sus cadenaslaterales nucleófilos como por ejemplo un grupo hidr
oxilo o un grupo sulfhidrilo. Esto incluye a los aminoácidos serina(como en el DFP,
a la derecha), cisteína, treonina o tirosina.[13]
Tipos de inhibiciones irreversibles
La inhibición irreversible es diferente de la inactivación enzimática reversible. Los i
nhibidores irreversibles songeneralmente específicos para un tipo de enzima y no i
nactivan a todas las proteínas. No funcionan destruyendo laestructura proteínica, si
no alterando específicamente la estructura tridimencional del sitio activo inhabilitán
dolo. Porejemplo, el pH y las temperaturas extremas causan la desnaturalización d
e casi todas las proteínas, pero este no esun efecto específico. De forma similar, al
gunos tratamientos químicos no específicos destruyen la estructura de laproteína:
por ejemplo, si son sometidas a una elevada concentración de ácido clorhídrico, el
cual hidrolizará losenlaces peptídicos que mantienen unidos los aminoácidos de la
s proteínas.[14]
Los inhibidores irreversibles dan lugar a una inhibición dependiente del tiempo y, p
or ello, su potencia no puede sercaracterizada mediante la determinación del valor
editar] Análisis de la inhibición irreversible

Esquema de la cinética enzimática delos inhibidores irreversibles.

Como se muestra en la figura de la izquierda, los inhibidores irreversibles forman in
icialmente un complejo reversibley no covalente con la enzima (EI o ESI), que reac
cionará posteriormente para producir una modificación covalente enlo que se deno
mina el "complejo del punto muerto" EI*. La tasa a la cual se forma EI* es llamada t
asa de inactivacióno kinact. Puesto que la formación de EI puede competir con ES, l
a unión de los inhibidores irreversibles puede serprevenida por competencia tanto
con el sustrato como con un segundo inhibidor reversible. Este efecto de protecció
nes una buena evidencia de una reacción específica del inhibidor irreversible con e
l sitio activo.
Los pasos de unión e inactivación de esta reacción son analizados incubando la en
zima con el inhibidor y midiendola actividad que va quedando a lo largo del tiempo.
La actividad irá disminuyendo de forma paulatina con tiempo, generalmente siguie
ndo una dinámica de decaimiento exponencial. Ajustando estos datos a una ecuaci
ón de rangopodemos obtener la tasa de inactivación a esta concentración de inhibi
dor. Esto se hace a diferentesconcentraciones de inhibidor. Si un complejo EI rever
sible está involucrado el rango de inactivación será saturable yal ajustarla a esta cu
rva obtendremos los valores de kinact y Ki.[16]
Otro método que es ampliamente utilizado en estos análisis es la espectrometría d
e masas. En este caso, la medidaexacta de la masa de la enzima nativa sin modifi
car y de la enzima inactivada, nos da el aumento en la masacausado por la reacció
n con el inhibidor, con lo que obtenemos la estequiometría de la reacción.[17] Para ll
evar acabo esta técnica suele ser necesario el uso de un espectrómetro de masas
MALDI-
TOF. Una técnicacomplementaria a esta es la huella peptídica, que implica la diges
tión de proteínas nativas o modificadas con unapeptidasa como la tripsina. Esto ge
nera una serie de péptidos que pueden ser analizados usando un espectrómetrode
masas. El péptido que cambie su masa después de llevar a cabo la reacción con e
l inhibidor será aquel quecontenga el sitio de la modificación.

1.4.1 ) Casos especiales

Mecanismo químico para inhibición irreversible de la ornitinadescarboxilasa por me

dio de DFMO. El piridoxal 5'-
fosfato (Py) y laenzima (E) no se muestran.[18] (Adaptado del artículo que figura en
lareferencia).
No todos los inhibidores irreversibles forman uniones covalentes con la enzima que
tienen como diana. Algunosinhibidores reversibles se unen tan fuertemente a su o
bjetivo que son prácticamente irreversibles. Estos inhibidoresde unión fuerte suele
n mostrar una cinética similar a la de los inhibidores irreversibles que forman enlac
escovalentes. En estos casos, algunos de estos inhibidores se unen rápidamente a
la enzima formando un complejo EIde baja afinidad, que después experimenta un
a reacción más lenta hacia un complejo EI* muy fuertemente unido(ver la imagen a
rriba). Este comportamiento cinético es denominado unión lenta.[19] Este lento reaju
ste posteriornormalmente implica un cambio conformacional cuando la enzima se p
liega alrededor de la molécula inhibidora. Como ejemplos de inhibidores de unión l
enta cabe destacar algún fármaco importante como el metotrexato,[20] elalopurinol[2
1] y la forma activada del aciclovir
Ejemplos de inhibidores irreversibles

Tripanotión reductasa donde se muestrandos moléculas unidas al centro activo: lai

nferior es un inhibidor unido de formairreversible y la superior un inhibidor unidode
forma reversible.
El diisopropilfluorofosfato (DFP) se muestra como un ejemplo de inhibidor irreversi
ble de la proteasa en el apartado"Inhibidores irreversibles" arriba a la derecha. La
enzima hidroliza el enlace entre el fósforo y el flúor, pero el residuode fosfato se m
antiene unido a una serina en el centro activo, inactivándolo.[23] Además, el DFP ta
mbién reaccionacon el centro activo de la acetilcolinesterasa en la sinapsis de las
neuronas, lo que lo convierte en una potenteneurotoxina, con una dosis letal a parti
r de cantidades inferiores a 100 mg.[24]
La inhibición suicida es un tipo común de inhibición irreversible donde la enzima co
nvierte al inhibidor en unasustancia reactiva en su centro activo. Un ejemplo de est
o es el inhibidor de biosintetizadores de poliaminas α-
difluorometilornitina o DFMO, que es un análogo del aminoácido ornitina, y es usad
o para tratar la TripanosomiasisAfricana (enfermedad del sueño). La ornitina decar
boxilasa puede catalizar la descarboxilación del DFMOsustituyendo a la ornitina, c
omo se muestra en la figura del apartado anterior. Sin embargo, esta reacción ded
escarboxilación es seguida por la eliminación del átomo de flúor, lo que convierte a
este intermediario en una imina, una especie altamente electrofílica. Esta forma re
activa del DFMO reacciona posteriormente con un residuo decisteína o lisina en el
centro activo para inactivar la enzima irreversiblemente.[18]
Puesto que la inhibición irreversible implica a menudo la formación inicial de un co
mplejo EI no covalente, a veces esposible que un inhibidor pueda unirse a una enzi
ma de diversas formas. Como ejemplo cabe destacar el caso de laenzima tripanoti
ón reductasa perteneciente al protozoo y parásito humano Trypanosoma cruzi, don
de dos moléculasde un inhibidor llamado mostaza quinacrina, presentan la capacid
ad de unirse a su centro activo. La moléculasuperior se une de forma reversible, pe
ro la de abajo se une de forma covalente al reaccionar con un residuo deaminoácid
o a través de su grupo de mostaza nitrogenada

1.5 ) Descubrimiento y diseño de inhibidores

La investigación y desarrollo de nuevos fármacos es un largo proceso en el cual el
primer paso casi siempre es eldescubrimiento de un nuevo inhibidor enzimático. E
n el pasado, la única forma de descubrir estos nuevos inhibidoresera mediante el si
stema de prueba y error: probando un elevado número de compuestos contra la en
zima a la cualse quiere inhibir y esperando conseguir alguno que sea efectivo. Esta
aproximación, si bien se basa en la fuerzabruta, sigue logrando actualmente un gr
an éxito gracias a nuevos sistemas de barrido, como la químicacombinatoria, que r
ápidamente producen un gran número de compuestos novedosos, y a la tecnologí
a basada en lainvestigación de procesamiento de alto-
rendimiento, mediante la cual se pueden revisar rápidamente estas enormesbibliot
ecas químicas de inhibidores útiles.[26]
Más recientemente, se ha comenzado a aplicar un nuevo tipo de investigación alter
nativa: el diseño racional defármacos que usa la estructura tridimensional del sitio
activo de una enzima para predecir qué moléculas podrían serinhibidores.[27] Una v
ez realizada la predicción, se prueban y se selecciona el mejor. Este nuevo inhibid
or es usadodespués para tratar de obtener una estructura de la enzima en un com
plejo enzima-
sutrato para mostrar cómo seune la molécula al sitio activo. Esta estructura es des
pués inspeccionada y se llevan a cabo ciertos cambios en laestructura del inhibidor
con el fin de optimizar la unión con la enzima. Este ciclo de prueba y optimización
se repite deforma sucesiva hasta obtener un inhibidor lo suficientemente potente, e
s decir, cuando se alcanza un valor de laconstante de disociación que esté en torn
o a <10-9

1.6 )Aplicaciones de los inhibidores

Los inhibidores enzimáticos pueden ser encontrados en la naturaleza, pero tambié

n son diseñados y producidoscomo parte de la farmacología y la bioquímica. Los v
enenos naturales son a menudo inhibidores enzimáticos quehan evolucionado par
a defender a una planta o animal contra sus depredadores. Estas toxinas naturales
incluyenalgunos de los compuestos más venenosos conocidos hasta hoy. Los inhi
bidores artificiales son a menudo usadoscomo medicamentos, pero también existe
n algunos utilizados como insecticidas (como el malathion), herbicidas(como el glif
osato) o desinfectantes, (como el triclosán).
aprovechan las diferencias presentes en la estructura de los ribosomas o en la sínt
esis de ácidos grasos.
El diseño de fármacos se ve muy facilitado en estos casos en los que la enzima dia
na es esencial para lasupervivencia del patógeno y no está presente o es muy difer
ente en humanos.

1.7 )Control metabólico

Los inhibidores enzimáticos son también importantes a nivel del control metabólico.
Muchas de las rutas metabólicasque tienen lugar en la célula son inhibidas por me
tabolitos que controlan la actividad enzimática mediante procesosde regulación alo
stérica o inhibición por sustrato. A modo de ejemplo cabe destacar la regulación al
ostérica de laglucólisis. Esta ruta catbólica consume glucosa y produce ATP, NAD
H y piruvato. Una de las etapas clave en laregulación de la glucolisis es la reacción
catalizada por la fosfofructoquinasa-
1 (PFK1). Cuando los niveles de ATPaumentan, el ATP se une a un sitio alostérico
de la PFK1, con lo que se reduce la actividad de la enzima, la glucolisisse inhibe y
los niveles de ATP se reducen de nuevo. Este control por retroalimentación negati
va (feedback negativo) ayuda a mantener los niveles de ATP constantes en la célul
a. Sin embargo, las rutas metabólicas no estánúnicamente reguladas por medio de
la inhibición, la activación enzimática es igualmente importante. La enzima PFK1pr
esenta activadores alostéricos, como son la fructosa 2,6-bifosfato y el ADP.[32]
La inhibición enzimática fisiológica también puede ser producida por inhibidores pr
oteicos específicos. Estemecanismo se puede observar en el páncreas, donde se s
intetizan multitud de precursores de enzimas digestivasdenominadas zimógenos.
Muchos de ellos son activados por la tripsina, una proteasa, por lo que es muy imp
ortanteinhibir la actividad de la tripsina en el páncreas con el fin de prevenir fenóm
enos de autodigestión. Uno de losmecanismos para mantener la tripsina inactiva e
s la producción de un potente y específico inhibidor de tripsina en elpáncreas. Este
inhibidor se une con una alta afinidad a la tripsina, previniendo así su actividad.[33]
Aunque elinhibidor de tripsina es una proteína, no es hidrolizado por la propia tripsi
na, ya que elimina las moléculas de agua desu centro activo y desestabiliza el esta
do de transición.[34] Otros ejemplos de inhibidores enzimáticos fisiológicos sonel inh
ibidor barstar, cuya función es inhibir la actividad de una ribonucleasa bacteriana d
enominada barnasa,[35] y losinhibidores de las protein-fosfatasas

Inhibidores de la acetilcolinesterasa

Con el fin de disuadir a los depredadores desemillas, las legumbres incorporan inhi
bidoresde tripsina, que interfieren con la digestión.
La acetilcolinesterasa (AChE) es una enzima que se encuentra en los animales, de
sde los insectos hasta loshumanos. Es esencial en la actividad que desempeñan la
s neuronas, ya que su función consiste en la ruptura delneurotransmisor acetilcolin
a en sus constituyentes, acetato y colina. Es una caso único entre los neurotransmi
sores, ya que la mayoría de ellos, como la serotonina, la dopamina o la noradrenali
na, son reabsorbidos en la brechasináptica. Existe un amplio número de inhibidore
s de la AChE que son utilizados tanto en el campo de la medicinacomo en el camp
o de la agricultura. Algunos de estos inhibidores son reversibles, como el edrofonio
, la fisostigmina, y la neostigmina, los cuales son utilizados en el tratamiento de la
miastenia gravis y en la aplicación de anestesia. Los pesticidas del tipo carbamato
son otro ejemplo de inhibidores reversibles de la AChE. Como ejemplo deinhibidor
es irreversibles de la AChE caben destacar los insecticidas organofosforados, com
o el malathion, el paratióny los clorpirifós.

2 ) METABOLISMO Y FUNCION DEL ACIDO FOLICO

El ácido fólico es una vitamina hidrosoluble incluida en la serie conocida como
complejo vitamínico B. El derivado activo de esta molécula es el ácido 5,6,7,8-
tetrahidrofólico, denominado normalmente tetrahidrofolato, el cual actúa como
coenzima transportando unidades activas de un átomo de carbono. La variedad e
importancia de las reacciones metabólicas en las que participa este derivado
hacen que, el ácido fólico sea una molécula indispensable para la vida (Stryer L.,
1995)

2.1 ) Absorción y transporte del ácido fólico

Los mamíferos no poseen la capacidad de sintetizar el anillo de pterina, por ello

deben recurrir a otras fuentes. En efecto, adquieren esta vitamina principalmente a
partir de la dieta y, en menor proporción, de los microorganismos existentes en su
tubo digestivo. Se encuentra principalmente en vegetales verdes, muchas frutas,
hígado, riñón, huevos y leche, pero se destruye fácilmente durante la cocción. Los
requerimientos diarios de un ser humano adulto son de 50 a 100 µg, aunque estas
necesidades aumentan hasta 400 µg durante el embarazo. Esta vitamina se
encuentra en los alimentos generalmente en forma de poliglutamatos; es decir que
el residuo de ácido glutámico presente en la molécula de ácido fólico se encuentra
unido a otras moléculas de ácido glutámico mediante uniones peptídicas (función
amida). Los poliglutamatos no pueden ser absorbidos por el intestino por lo cual
primero se escinde la cadena de residuos de glutamato para obtener el
monoglutamato (ácido fólico propiamente dicho). Esta reacción es catalizada por
un grupo de enzimas denominadas conjugasas presentes en el borde en cepillo de
las células de la mucosa yeyunal.
Posteriormente y sin el requerimiento de ningún cofactor, como es necesario para
otras vitaminas, es absorbido y convertido, en el interior de la célula de la mucosa
intestinal, en N5 - metiltetrahidrofolato (figura 3.1). El ácido fólico circula en el
plasma en forma de N5 -metiltetrahidrofolato libre o ligado débilmente a la
albúmina y es captado por todos los tejidos, pero principalmente por el tejido
hepático donde se almacena y participa en las reacciones metabólicas que se
detallan en la próxima sección.
Figura 3.1. Derivados del ácido fólico que participan en reacciones
metabólicas transportando unidades monocarbonadas y las reacciones
mediante las cuales se interconvierten.

2.2 ) Tetrahidrofolato como transportador de fragmentos de un átomo

de carbono.

Como se mencionó anteriormente, el tetrahidrofolato actúa como transportador de

unidades de un solo átomo de carbono (Stryer L., 1995). Este fragmento
monocarbonado está unido al átomo de N-5 o al N-10 (que se indican como N5 y
N10), o a ambos y puede existir en tres estados de oxidación. La forma más
reducida corresponde al grupo metilo, la forma intermedia corresponde al grupo
metileno. Las formas más oxidadas corresponden a los grupos metenilo, formilo o
formimino. Como puede observarse en la figura 3.1 estas unidades de un átomo
de carbono son interconvertibles, existiendo para ello un conjunto de reacciones
bioquímicas específicas. Estos derivados del tetrahidrofolato sirven como dadores
de unidades monocarbonadas en una amplia gama de reacciones biosintéticas. La
metionina, por ejemplo, se sintetiza a partir de homocisteína por transferencia del
grupo metilo del N5 -metiltetrahidrofolato. Ciertos átomos de carbono de las
purinas derivan del N10-formilderivado. El grupo metilo de la timina, una pirimidina,
proviene del N5 ,N10-metilentetrahidrofolato. Este último derivado también
participa en la síntesis de glicina a partir de CO2 y NH4 + cediendo un fragmento
monocarbonado. Por otra parte, el tetrahidrofolato sirve como aceptor de
fragmentos monocarbonados de ciertas reacciones degradativas. En particular,
tiene gran importancia la conversión de serina en glicina, la cual origina N5 ,N10-
metilentetrahidrofolato (figura 3.1). Esta reacción permite obtener fragmentos
monocarbonados a partir de carbohidratos. Otra reacción relevante es la escisión
de la histidina que genera el N5 -formiminotetrahidrofolato.
2.3) Déficit de ácido fólico
La falta de ácido fólico afecta a todas aquellas rutas metabólicas en las cuales el
mismo participa cediendo o aceptando unidades monocarbonadas. Esto produce
una serie de trastornos que se manifiestan en forma de patologías (Rapaport,
1988; Ranney y Rapaport, 1993) . El déficit de ácido fólico puede producirse en los
mamíferos y, en particular en el hombre, por diversos motivos. Uno de ellos, el
más frecuente, es una mala alimentación. La dieta habitual no contiene mucho
más de la demanda diaria mínima y los depósitos tisulares en los adultos sólo se
mantienen unos tres meses. Otra causa es la absorción deficiente que ocurre, en
general, en asociación con los síndromes de malabsorción intestinal. La utilización
inadecuada del ácido fólico, en cambio, es mucho menos frecuente y puede estar
asociada a Introducción 30 cierto bloqueo de su metabolismo por el alcohol o por
el uso de antagonistas del ácido fólico, como el metotrexato, utilizado
habitualmente en el tratamiento de neoplasias. De todas las reacciones
bioquímicas en las que participan los derivados del ácido fólico las más
importantes son las involucradas en la síntesis de nucleótidos (monómeros de los
ácidos nucleicos). Cuando estas reacciones se interrumpen por algún motivo,
déficit de ácido fólico, por ejemplo, los ácidos nucleicos no pueden sintetizarse y,
como consecuencia de esto, las células no pueden replicarse. Por lo tanto, se ven
seriamente afectadas todas aquella regiones del organismo que requieren de la
multiplicación constante de ciertas células. En efecto, los tejidos y órganos más
afectados son los relacionados con las células sanguíneas y la mucosa intestinal.
De esta manera, la alteración en la síntesis de DNA que existe en el déficit de
ácido fólico conduce a una patología con un cuadro morfológico característico en la
sangre periférica y en la médula ósea, que se conoce con el nombre de anemia
megaloblástica. Por otra parte, se produce una atrofia de la mucosa del tubo
digestivo que puede provocar un estado de malabsorción que puede, a su vez,
intensificar el déficit primario.

3) INHIBIDORES DE LA ANHIDRASA CARBONICA

4) INHIBIDORES DEL METABOLISMO DE LOS
CARBOHIDRATOS ( GLUCONEOGENESIS)

La gluconeogénesis (GNG) es una vía metabólica que produce glucosa a partir de

ciertos sustratos de carbono sin hidratos de carbono . A partir de la
descomposición de proteínas, estos sustratos incluyen a los aminoácidos
glucogénicos (aunque no los aminoácidos cetogénicos); desde la descomposición
de lípidos (tales como los triglicéridos), éstos incluyen glicerol (aunque no ácidos
grasos); y de otras etapas en el metabolismo que incluyen piruvato y lactato.

La gluconeogénesis es uno de los principales mecanismos utilizados por los seres

humanos y muchos otros animales para mantener los niveles de glucosa en la
sangre, evitando niveles bajos (hipoglucemia). Otros medios incluyen la
degradación del glucógeno (glucogenolisis), [1] degradación de los ácidos grasos.
La gluconeogénesis es un proceso ubicuo, presente en plantas, animales, hongos,
bacterias y otros microorganismos.[2] En los vertebrados, la gluconeogénesis tiene
lugar principalmente en el hígado y, en menor medida, en la corteza de los riñones.
En los rumiantes, esto tiende a ser un proceso continuo.[3] En muchos otros
animales, el proceso ocurre durante períodos de ayuno, inanición, dietas bajas en
carbohidratos o ejercicio intenso. El proceso es altamente endergónico hasta que
se acopla a la hidrólisis de ATP o GTP, haciendo efectivamente el proceso
exergónico. Por ejemplo, la ruta que conduce desde piruvato a glucosa-6-fosfato
requiere 4 moléculas de ATP y 2 moléculas de GTP para proceder
espontáneamente. La gluconeogénesis se asocia a menudo con cetosis. La
gluconeogénesis es también un objetivo de la terapia para la diabetes tipo 2, como
el fármaco antidiabético, la metformina, que inhibe la formación de glucosa y
estimula la captación de glucosa por las células.[4] En los rumiantes, debido a que
los carbohidratos en la dieta tienden a ser metabolizados por los organismos del
rumen, la gluconeogénesis se produce independientemente del ayuno, las dietas
bajas en carbohidratos, el ejercicio, etc

Determinados tejidos NECESITAN un aporte CONTINUO de glucosa

- Cerebro: depende de glucosa como combustible primario
- Eritrocito: utiliza glucosa como único combustible.

- Las reservas directas de glucosa solo son suficientes para cubrir las necesidades
de un día : períodos más largos de ayuno implican la necesidad de sistemas
alternativos de obtener glucosa.

GLUCONEOGENESIS : Síntesis de glucosa a partir de precursores que no sean

hidratos de carbono
- LACTATO : músculo esquelético activo cuando Glicolisis > fosforilación oxidativa
- AMINOACIDOS: degradación de proteínas de la dieta o proteínas de músculo
esquelético.
- GLICEROL: hidrólisis triacilglicéridos en células adiposas.

b) REACCION DE LA GLUCONEOGENESIS
La conversión de piruvato a fosfoenolpiruvato en lagluconeogénesis se lleva a
cabo en dos pasos. El primero de ellos es la reacción de piruvato y dióxido de
carbono para dar oxaloacetato. Este paso requiere energía, la cual queda
disponible por hidrólisis de ATP
5 ) INHIBIDORES DEL ACIDO URICO
El ácido úrico es el producto metabólico de las purinas resultantes de la oxidación
de las xantinas por la enzima xantina oxidasa.

La xantina oxidasa es una molibdoflavoenzima distribuida en diversas especies,

desde las bacterias hasta los seres humanos y algunos tejidos en mamíferos. Su
enfoque de estudio se debe a su afinidad por producir especies
reactivas de oxígeno, fenómeno implicado en varios estados patológicos. Esta
enzima se encuentra en dos formas, la Xantina Deshidrogenasa NAD+-
dependiente, que produce NADH y urato, la cual puede ser transformado en
Xantina Oxidasa que es dependiente del oxígeno, la cual origina el anión radical
superóxido (O2) y peróxido de hidrógeno (H2O2) y urato.
6 ) INHIBIDORES DEL ADN – GIRASA
 falta

CONCLUSIONES :

- La célula puede compararse con un minúsculo laboratorio, en el cual tiene la síntesis y la

degradación de un gran numero de sustancias. Estos procesos son efectuados por enzimas
a la temperatura normal del organismo ya que a temperaturas sobre lo normal se produce
la desnaturalización y la in activación de las enzimas y con PH normal para efectuar sus
procesos.

- Las enzimas son los catalizadores biológicos. que es una sustancia que acelera las
reacciones químicas si modificarse lo que significa que puede ser utilizado una y otra vez.
- Las enzimas son proteínas que tienen uno o más lugares llamados sitios activos a los
cuales se les unen el sustrato, es decir, la sustancia sobre la que actúa la enzima. El
sustrato es modificado químicamente y convertido uno o mas productos

E + S = [ES] = E+P
Donde [ES] es un complejo enzima - sustrato intermediario. Las enzimas aceleran la
reacción hasta que se alcanza un equilibrio y puedan ser eficientes como para que la
velocidad de reacciones sea de 10 a 10 veces mas rápida que en ausencia de un
catalizador.
- Una característica muy importante de la actividad enzimático es su especificad de
manera que cada enzima particular actúa sobre un determinado sustrato.
- Las enzimas suelen ser tan específicas que son incapaces de actuar sobre las sustancias
estrechamente relacionadas.
- Las enzimas vienen a ser las proteínas catalíticas que aceleran la velocidad de las
reacciones celulares al bajar la energía de activación y estabilizar las intermediaciones del
estado de transición.
- El sitio activo de la enzima comprende dos partes adicionales una región de unión de
sustrato y la otra catalítica.
- En el centro activo encontramos restos de aminoácidos constituyentes funcionales para
la catálisis del sustrato, estos utilizan las llamadas coenzimas que son moléculas orgánicas
que sufren modificaciones durante la reacción enzimático para ayudar a la modificación
final del sustrato

REFERENCIAS UTILIZADAS :

1) Principles of Medicinal Chemistry, D. A. Williams, T. L. Lemke, Ed. Lippincott Williams &

Wilkins, 2002. ISBN: 0-683-30737-1.
2) Introducción a la Química Terapéutica, A. Delgado Cirilo, C. Minguillón Llombart, J.
Joglar Tamargo, Ed. Díaz de Santos, 2004. ISBN: 84-7978-601-9.
3) Introducción a la Síntesis de Fármacos, A. Delgado, C. Minguillón, J. Joglar, Ed. Síntesis,
2002. ISBN: 84-9756-029-9.
4) An introduction to Medicinal Chemistry, G. L. Patrick, Ed. Oxford, 2001. ISBN: 0- 19-
850533-7.