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Citohistología Humana
Pasos previos a la coloración
Cortes micrótomo
Desparafinado en
horno 60°C, hidratación
TINCIONES
• Proceso mediante el cual un cuerpo es
teñido por una sustancia colorante.
• Sin perder el color cuando es lavado con
un disolvente.
TEORÍAS DE LA COLORACIÓN
1. TEORÍA FÍSICA
– Proceso físico de adsorción
– Penetración en espacios intra e
intercelulares por cohesión molecular
TEORÍAS DE LA COLORACIÓN TEORÍA QUÍMICA
• El colorante se une a la sustancia
combinándose por agrupaciones
moleculares ácidas o básicas
formando uniones iónicas,
covalentes o puentes de Hidrógeno,
formando sales insolubles.
COLORANTE
–Sustancia que puede conferir
color a otros cuerpos
Esqueleto
incoloro
(anillo
aromático
cromófo
ro cromó
geno
auxócro
mo
Clasificación de los colorantes
Por su origen
• Animales (Carmin)
•Vegetales •Colores de anilinas
(Hematoxilina,
Orceína, safranina)
COLORANTES NATURALES
• Animales
– Carmín (hembra de cochinilla)
• Vegetales
– Índigo (Indigófera)
– Hematoxilina (Palo de Campeche)
– Orceína (líquenes)
– Safranina (azafrán)
– Achiote
COLORANTES ARTIFICIALES
• Derivados del benceno.
– cromóforo
• Nitroso Fast green
• Nitro ácido pícrico
• Azo: Naranja G, Rojo Ponceau
• Quinona-imina: azul de
tolueno, safranina, azul de
metileno
• Xanteno: pironina Y,
Rodamina S
• Arilmetano: auramina O,
Fuschina básica
Indigo
COLORANTES ARTIFICIALES
Benceno + cromóforo = cromógeno
• Poseen
– Cromógeno
• Radicales asociados a color
– Auxócromo
• Radicales que intensifican la
acción del cromófono
Clasificación de los colorantes
(auxócromo)
Ácidos Básicos
Neutros Indiferentes
Colorantes Ácidos
• Poseen grupos hidroxilo o carboxilo y en
solución liberan iones hidronio y el colorante
queda en carga negativa (aniónicos)
• Afinidad a grupos amino de proteínas,
• Afinidad por componentes
básicos(citoesqueleto).
• tiñe citoplasma rosado o rojo
• Ej.
• Eosinato de Sodio
• Fucsina ácida
• Naranja G
Colorantes Básicos
Poseen grupos amino los que en solución tienden a
adquirir iones hidronio y el colorante queda con
carga positiva (catiónicos).
Ortocromáticos Policromático
Monocromáticos Metacromático
Pancromático
Ortocromáticos
• Colorantes que tiñen el tejido de un solo
color, el cual será el mismo que posee la
solución.
• Ej. Eosina Y
Monocromáticos
• Colorantes que tiñen de un solo color, pero no siempre es el mismo
color de la solución
• Ej. Hematoxilina
Metacromáticos
• Tiñen de diferentes colores dependiendo el grado de
polimerización en que se encuentren (grado de oxidación
del colorante). Ej. Azul de toluidina
Tinción metacromática
Pulmón: fibrosis de depósitos amiloides
de la lengua
Policromáticos
• Son mezclas o combinaciones de dos o más colorantes, con esto se
utilizan las propiedades de cada uno de colorantes.
• Eosina A: eosina Y + verde brillante amarillento + café de Bismark
Directos Combinada
Indirectos Simple
Progresivo
Directos
• Conocida como sustantivo
• Obedece a principios físicos como
capilaridad, osmolaridad, absorción
• Ej. Azul de metileno y eosina
Tinción con Azul de
metileno de corte de
hueso, osteones
Indirectos
• Conocida como Adjetivo
• Este tipo de coloraciones utiliza mordientes, su función es
la de unir el colorante y la estructura que se va a colorear
• Ej. Cristal Violeta y hematoxilina
Tinción nuclear
combinada
• Utiliza combinación de colorantes o soluciones
• Tiñe una variedad de estructuras celulares y tisulares
• Ej. Papanicoloau
Papanicolaou cervico-vaginal
con coilocitos
Tinción nuclear
Colorante utilizados en
Histología
HEMATOXILINA …1
• Colorante Vegetal (Extracto de la planta leguminosa
Haematoxylon campechianum, palo de Campeche)
• Colorante básico
• Al oxidarse produce un color morado oscuro hemateína
– Tiñe los núcleos celulares (Hematoxilina de Mayer)
– Tiñe además otras estructuras (Hematoxilina de Harris)
HEMATOXILINA …2
• Se debe utilizar previa oxidación
– Al aire (varios meses de exposición)
– Oxidantes artificiales
• Óxido de mercurio
• Permanganato de Potasio
• Dicromato potásico
• Colorante indirecto
– En la práctica se utiliza como en forma de laca (mordiente)
hematoxilínica
HEMATOXILINA …3
• Utiliza mordientes (sustancias que se utilizan para
fijar tintes)
– Iones metálicos
– Sales de Hierro III y Aluminio II
Es colorante neutro
Coloraciones Romanowsky...2
• Colorantes básicos
• Azul de metileno (trimetil-tionina) ya que por medio de
y sus derivados oxidación se pueden lograr
son colorantes metacromáticos otras mezclas de azures y
esto es lo que diferencia a los
colorantes Romanowsky de
los otros
Coloraciones Romanowsky...3
• Colorantes ácidos
• Eosina
Y sus derivados Los compuestos más utilizados
son la eosina Y, eosina B,
eritrocina B y Floxina B
Wright
Giemsa
Leishman
Coloraciones
Romanowsky
May-Grunwald
McNeal
Jenner
Wright…1
• Es la más utilizada de las mezclas de Romanowsky
• Aplicación
– Frotes Sanguíneos,
– Muestras citológicos
– Fijación simultánea
– características metacromáticas
• Se ve influida por el pH
• Diferentes elementos celulares tengan afinidad selectiva
Wright…2
Microsporium. Sp en
intestino
Coloración Papanicolaou
Papanicolaou
• George Nicholaus Papanicolaou (1883-1962)
• Prueba más adecuada para el diagnóstico de
cáncer uterino
TINCION DE PAPANICOLAOU
• Hematoxilina: tinción nuclear (Harris)
• Orange G: tinción de queratina y
prequeratina y eritrocitos
• Eosina A (36, 50, 65):
– Eosina Y: tinción del citoplasma de las
células escamosas maduras, cilios y
nucleolos
– Verde brillante amarillento: tiñe verde-azul
las células intermedias y parabasales
– Ácido fosfotúngstico: mordiente para el
verde brillante amarillento
• Café de Bismark R: tinción de la mucina
Pasos básicos para la tinción
papanicolau
Fijar muestra Hidratación Tinción Nuclear
Tinción
Naranja G Eosina A
citoplasma
Tinción
Deshidratación Azulamiento
citoplasma
Aclaramiento Observación
Coloración Papanicolaou
Coloración Papanicolaou
Otras Tinciones…1
TINCION ALGUNOS COLORANTES
UTILIZADOS
Intravital Fagocitosis, Azul y Rojo de Tripan, Tinta
china.
Histoquímicas Enzimas
Plata de Montana Melanina
Bielchowskys
Oro, fibras
reticulares
Tricromico
de Gomori
Tincion de Perls, hemosiderina Tincion argentica, fibras reticulares
Tincion de PAS
Celulas caliciformes
Rojo Sudán
Tinción de lípidos
Fluorescencia
Gracias