INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Práctica No. 5.6 Inhibición enzimática

Moreno Juárez Marian/Ramírez Estrada Jonathan

4QM2 SECCIÓN 3

INTRODUCCIÓN. agua, se les la misma cantidad de inhibidor junto

con el regulador de pH (4.7) y volúmenes iguales
Muchas sustancias alteran la actividad enzimática al
de enzima la cal se dejo actuar durante 5 minutos,
unirse con la enzima por lo que influyen en la unión
pasado este tiempo se detuvo la reacción con el
con el sustrato o el número de recambio de ambos.
3,5-DNS y se sometió a un tratamiento de calor
Se denominan inhibidores enzimáticos a la
para el desarrollo de color. Se diluyeron los tubos
moléculas que interfieren en la catálisis, alentando
con 2 mL de agua, posteriormente se leyeron sus
o deteniendo las reacciones enzimáticas.
absorbancias a 540 nm.
Existen dos tipos de inhibidores, irreversibles
(forman una unión covalente con la enzima) y los
reversibles, este último se clasifican en: RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
 Inhibidores competitivos: Son aquellas Tabla 1. Actividad de la invertasa a diferentes
comncentraciones de sustrato con inhibidor
sustancias que compiten directamente con
el sustrato por el sitio activo de la enzima, Tu Abs [A.R.] V0 [S] 1/ V0 1/[S]
por lo general este tipo de inhibidor se bo µmoles/L
asemeja al sustrato al grado de formar una
unión específica con el sitio activo pero 1 0.|411 5.4 0.54 20 1.8518 0.05
difiere lo suficiente para no reaccionar, lo
que significa que la enzima se vuelve menos 2 0.422 5.5 0.55 40 1.8181 0.025
a fin al sustrato puesto que hay aun agente
3 0.549 7.1 0.71 60 1.4084 0.0166
extraño que impide la formación del
complejo E-S por lo tanto este tipo de 4 0.582 7.5 0.75 100 1.3333 0.01
inhibidores aumentan la km.
5 0.495 6.4 0.64 160 1.5625 0.006
 Inhibidores no competitivos: los cuales se
unen al complejo enzima-sustrato o a la 6 1.140 14.6 1.46 300 0.6849 0.003
enzima en un sitio diferente al sitio activo,
por lo tanto no es una sustancia
estructuralmente similar al sustrato. El Como se puede apreciar en la Tabla 1, las
inhibidor no competitivo no afecta la km absorbancias de inhibición en los últimos 2 tubos
pues el sustrato puede entrar al sitio activo fueron muy dispersas, esto se pudo deber a una
y formar el complejo E-S pero si afecta la incubación excesiva, ya que se trataba de la
velocidad max. disminuyéndola debido a primera vez que realizábamos un experimento de
que el complejo se ve entorpecido por el cinética enzimática. De igual manera la mayoría de
cambio conformacional que ocasiona este las lecturas obtenidas difirieron demasiado lo cual
inhibidor se vio reflejado en las graficas para obtener la km.
OBJETIVOS. Considerando lo anterior, la km obtenida por medio
del método de Limeweaver-Burk fue de 62.5, por lo
 Determinar el tipo de inhibición producido
que podríamos decir que la anilina se trata de un
por la anilina sobre al actividad de la
inhibidor competitivo con la sacarosa por la km
invertasa.
elevada y similar V max, pero esto no es así ya que
METODOLOGÍA. para asegurar de que se trata de una inhibición
Se preparo una serie de seis tubos problema y un competitiva además de tener los parámetros
testigo, a los tubos problema se les agrego las anteriores, se debe considerar la estructura de la
cantidades correspondientes de sacarosa 0.2M y molécula quien debe ser isostérica (de forma
similar) al sustrato, esto con el fin de interaccionar
de la misma forma con el sitio catalítico.
La anilina es considerada un inhibidor no
competitivo, por lo cual nuestra gráfica nos debió
mostrar una km similar a la del sustrato sin enzima
esto no fue asi debido a nuestras lecturas, y por
ende a errores en el proceso experimental, como el
mal pipeteo de reactivos, una incubación excesiva o
insuficiente, o agregar la cantidad incorrecta de
enzima.
CONCLUSIONES.
 Los inhibidores reducen la velocidad de
reacción por lo tanto las absorbencias son
menores.
 La anilina es un inhibidor no competitivo
sobre la actividad de la invertasa.
 La km obtenida por el método de
Limeweaver y Burk es de 62.5.
 El inhibidor no estaba a la concentración
adecuada.

BIBLIOGRAFÍA.
 Fornaguera J., G. Gómez, “Bioquímica: LA
CIENCIA DE LA VIDA” Ed. EUNED, México,
2007P. 70
 Voelt D., J. Voelt, “Bioquímica”, Ed.
Panamericana, 3ra edición, Buenos Aires,
2006 p 498-502