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1. INTRODUCCIÓN
El efecto tóxico o la respuesta tóxica es cualquier cambio en el funcionamiento normal del organismo
que ha sido producido por la exposición a una sustancia tóxica, para este efecto se consideran
solamente los cambios irreversibles o que permanecen un periodo prolongado después de la
exposición. Para el efecto de toxicología ambiental las exposiciones se clasifican en exposiciones
crónicas, subcrónicas y agudas. Las exposiciones crónicas duran entre el 10 % y el 100% de la vida
del organismo, las exposiciones crónicas son menores al 10% del periodo vital y las exposiciones
agudas suceden en un solo evento y abarcan periodos cortos como de 24 a 120 horas (1). El objetivo
de realizar pruebas de toxicidad aguda es identificar el potencial toxicológico de compuestos químicos
ya sean comerciales o presentes en el ambiente. Este tipo de pruebas son más factibles de hacer
debido a que el tiempo de exposición es corto.
El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga (Lactuca sativa) es una prueba estática de
toxicidad aguda (120 horas de exposición) en el que se pueden evaluar los efectos fitotóxicos de
compuestos puros o de mezclas complejas en el proceso de germinación de las semillas y en el
desarrollo de las plántulas durante los primeros días de crecimiento. Como puntos finales para la
evaluación de los efectos fitotóxicos, se determina la inhibición en la germinación y la inhibición en la
elongación de la radícula y del hipocotilo (Figura 1). Es importante destacar que durante el período de
germinación y los primeros días de desarrollo de la plántula ocurren numerosos procesos fisiológicos
en los que la presencia de una sustancia tóxica puede interferir alterando la supervivencia y el
desarrollo normal de la planta, siendo por lo tanto una etapa de gran sensibilidad frente a factores
externos adversos. Por otra parte, muchas de las reacciones y procesos involucrados son generales
para la gran mayoría de las semillas, por lo que la respuesta de esta especie y los datos obtenidos a
partir de la aplicación de esta prueba son en gran medida representativos de los efectos en semillas o
plántulas en general. El éxito o aptitud de una plántula para establecerse en un ambiente determinado
es de gran importancia para garantizar la supervivencia de la especie. La evaluación del desarrollo de
la radícula y del hipocotilo, constituyen indicadores representativos para determinar la capacidad de
establecimiento y desarrollo de la planta.
2. OBJETIVO
Los alumnos evaluarán los efectos fitotóxicos de una solución que contiene un elemento contaminante,
en el proceso de germinación de las semillas y en el desarrollo de las plántulas de lechuga (Lactuca
sativa L.) durante los primeros días de crecimiento.
**El papel de filtro que se seleccione como sustrato de germinación debe tener las siguientes
características: trama amplia y porosa que asegure una buena capacidad de retención de
líquido; resistencia de la fibra del papel para que las radículas crezcan por su superficie sin
atravesarlo, situación que dificultaría la remoción de las plántulas sin dañarlas; ausencia de
residuos tóxicos (por ejemplo, blanqueadores; y que no promueva el desarrollo de hongos (no
asociados a las semillas).
4. METODOLOGÍA
5. RESULTADOS
El efecto medido en este bioensayo es la inhibición de la elongación de la radícula, hipocotilo y de la
germinación (Figura 2). Como resultado final se espera obtener la CE50 o CI50 o % de inhibición. Los
valores serán aceptados si el porcentaje de germinación es superior al 90% en el control negativo.
I. Observar cuidadosamente cada caja y anotar cualquier indicador de fitotoxicidad como
necrosis, pelos poco desarrollados, radículas con crecimiento ensortijado. La necrosis
se manifiesta como manchas de color pardas, blancas o marrones.
II. Utilizando una regla medir la longitud de la radícula y del hipocotilo de casa plántula.
III. La medida de la elongación de la radícula se considera desde el nudo hasta el ápice
radicular.
Antes de cada medición se recomienda congelar las cajas y descongelarlas conforme se van
midiendo, el objetivo de la congelación y la descongelación es obtener las plántulas menos rígidas.
La medida de elongación del hipocotilo se considera desde el nudo hasta el sitio de inserción de los
dos cotiledones.
6. EXPRESIÓN DE RESULTADOS
Para la expresión de resultados se realizarán los siguientes cálculos:
I. Promedio y desviación estándar de la elongación de la radícula y del hipocotilo de
las plántulas de cada repetición.
II. Porcentaje de inhibición del crecimiento de la radícula y del hipocotilo con el
promedio de elongación para cada dilución respecto del promedio de elongación
del control negativo
III. Porcentaje de inhibición de la germinación
IV. Con los datos anteriores realizar una gráfica dosis-respuesta, colocando en el eje de
las ordenadas el porcentaje de inhibición y en el eje de las abscisas la
concentración.
Bibliografía:
Peña E. Carlos, Dean E. Carter y Ayala-Fierro Felix. 2001. Toxicología Ambiental:
Evaluación de Riesgos y Restauración Ambiental. Distribuido en internet vía Southwest
Hazardous Waste Program website http://superfund.pharmacy.arizona.edu/toxamb/.
PRACTICA No. 7
INTRODUCCIÓN
Los bioensayos con lombrices son ampliamente reconocidos como prueba para evaluar la toxicidad
de suelos contaminados (Dorn et al., 1998; Wilson et al., 2002). La lombriz más utilizada en México
ha sido Eisenia en sus especies foetida y andrei, las cuales pertenecen a la familia Lumbricidae. Estas
especies de lombriz son exógenas en México, pero de amplia distribución, fácil manejo y cultivo
(Fragoso, 2002). Su principal característica morfológica es la presencia de segmentos externos e
internos en su cuerpo, son hermafroditas y cuando son adultas se observa una protuberancia
epidérmica denominada clitelo, en el que se forman los capullos en los cuales son depositados los
huevos (Santamaría, 1996).
El presente ensayo se basa en la guía 207 de la OECD para la evaluación de sustancias (OCDE,
1984). La prueba por contacto en papel filtro involucra la exposición de las lombrices a sustancias de
prueba sobre un papel filtro húmedo con la finalidad de identificar el potencial tóxico del compuesto
presente en el suelo. Esta prueba tiene una duración de 48 horas pero puede ampliarse hasta 72
horas.
OBJETIVO
Los alumnos evaluarán los efectos tóxicos de una solución de cromo hexavalente en papel filtro por
contacto con lombriz de tierra (Eisenia andrei) durante 48 horas.
*Las lombrices de tierra (Eisenia foetida) utilizadas en ésta práctica fueron una donación del
proyecto de la Dra. M Olivia Franco Hernández de la UPIBI-IPN
METODOLOGÍA
Para esta prueba se deben lavar los contenedores de vidrio con agua caliente y detergente, se deben enjuagar
y dejar secar. Cortar papel filtro con 4.5 cm de ancho por 7 cm de longitud depositarlo en el frasco. No debe
exceder del borde del frasco.
Las concentraciones a emplear serán tres. Para cada tratamiento o nivel de concentración se preparan 10
replicas. Una lombriz se coloca en cada frasco, depositándola sobre el papel filtro húmedo. Antes de ser
colocadas en los viales, las lombrices son depositadas por tres horas en papel filtro humedecido, con la finalidad
de vaciar sus intestinos; después son lavadas y secadas. Los viales son colocados en forma horizontal en la
oscuridad, a una temperatura de 20 o 22± 2 C, durante un periodo de 48 horas. Las lombrices se consideran
muertas cuando no responden a ningún estimulo mecánico. Cualquier síntoma patológico se reporta.
RESULTADOS
El efecto medido en este bioensayo es la mortalidad y como resultado final se espera obtener la
CL50. Sin embargo, de no obtener dicha respuesta, cualquier cambio en el estado general de las
lombrices deberá ser reportado y concluir sobre los hallazgos de este efecto tóxico.
REPORTE DE LA PRUEBA
En el reporte del ensayo debe incluirse la siguiente información:
Los datos del compuesto que se probó
Las características del organismo de prueba, incluyendo la especie, condiciones de cultivo,
número de lombrices utilizadas por réplica
Las condiciones de la prueba, así como cualquier variación de las condiciones de la misma.
Los resultados del peso promedio de los organismos al inicio y final de la prueba. Así como
una descripción de cambios físicos o patológicos observados en los organismos
Los resultados del bioensayo deberán plasmarse en una gráfica en donde se comparen los datos de
todos los equipos que trabajaron con diferentes concentraciones del tóxico y se discutirá acerca de
los resultados y de la utilidad, ventajas y desventajas del bioensayo como prueba toxicológica.
Bibliografía:
Dorn, P. B., T. E. Vipond J. P. Salanitro y H. L. Wisniewksi. 1998. Assessment of the acute toxicity of
crude oils in soil using earthworms, microtox and plants. Chemosphere 37(5):845-860.
Fragoso, G. C. 2002. Las lombrices de tierra en México: diversidad, distribución y manejo. II
Simposium Internacional y Reunión Nacional Lombricultura y abonos orgánicos.
Ramírez-Romero Patricia, Mendoza-Cantú Ania, 2008. Ensayos toxicológicos para la evaluación de
sustancias químicas en agua y suelo. La experiencia en México. SEMARNAT. Tercera parte:
ensayos en suelo. Ensayo de toxicidad aguda con la lombriz de tierra Eisenia andrei. Cuevas-Diaz
Maria del Carmen, Ferrera- Cerrato Ronald, Roldan-Martin Adriana, Rodriguez-Vazquez Refugio. pp:
209- 224.
Organization for Economic Cooperation and Development (OECD). 1984. Earthworm, acute toxicity
tests. Guideline for testing of chemicals N° 207 (consultado en abril de 1984). OCDE, París, 9 pp.