1.

Sterilisasi botol yang digunakan untuk kultur

2. Menentukan jenis media yang akan digunakan
3. Membuat media kultur
4. Persiapan atau pemilihan bahan tanam (eksplan)
5. Strelisisai, meliputi ruangan, peralatan, teknisi, bahan atau sampel tanaman, dan media kultur
6. Penanaman eksplan pada media kultur

Pembentukan kultur
Tanaman induk (Gambar 1) diperoleh dari dealer setempat dengan memastikan bahwa, mereka terlihat
sehat dan bebas dari tanda-tanda stres atau noda permukaan. Seleksi selanjutnya dilakukan dengan
menumbuhkan tanaman di bawah akuarium air tawar yang terkontrol lingkungan pada suhu 28 ± 20C
dengan fotoperiod 12 jam. Tunas lateral yang mengandung tunas apikal (Gambar 2) dikeluarkan dari
tanaman induk dan dicuci dengan air keran selama 10 menit, direndam dalam larutan detergen 5%
(Cleansol, India) selama 10 menit dan kemudian dicuci bersih dengan air keran. untuk menghilangkan
kotoran dangkal. Sterilase permukaan mencoba mendapatkan kultur axenic termasuk 0,1% merkuri
klorida (HgCl2) dan pemutih komersial yang mengandung natrium hipoklorit 5,25% sebagai bahan aktif
(Robin Liquid Bleach, Reckitt Benckiser, India). Untuk menstandarisasi prosedur sterilisasi permukaan
yang paling sesuai, eksplan diobati dengan 0,1% HgCl2 selama 5 jangka waktu yang berbeda (1, 2, 3, 4
dan 5 menit) dan dengan enam pengenceran larutan pemutih komersial yang berbeda (5, 10, 15, 20,
25 dan 30%) untuk enam jangka waktu yang berbeda (1, 5, 10, 15, 20 dan 25 menit
Standarisasi media
Media yang diupah untuk memulai inisiasi kultur awal dan regenerasi tunas termasuk media basal MS
murni PGR dan media MS ditambah 0,1 sampai 0,3 mg / l (pada interval 0,05) 6- Benzil aminopurin
(BAP), 0,1 sampai 0,3 mg / l pada interval 0,05) kinetin dan 0,1 sampai 0,3 mg / l BAP dalam kombinasi
dengan asam asetat 0,1mg / l α-naftalen (NAA). Kuncup basal dari rimpang in vitro yang dihasilkan pada
masing-masing media dikenai subkultur berulang pada media yang sama untuk menguji konsistensi
dalam laju multiplikasi tunas. Pengamatan pada inisiasi kultur, perbanyakan tunas, pemanjangan tunas
dan pembentukan akar pada masing-masing media dicatat setelah 4 minggu subkultur ketiga pada
masing-masing media.
Untuk menganalisis pengaruh 5 konsentrasi BAP yang berbeda, 5 konsentrasi kinetin yang berbeda dan
5 konsentrasi BAP yang berbeda dalam kombinasi dengan NAA 0,1 mg / l pada inisiasi kultur, tiga
percobaan dibuat secara terpisah dalam Rancangan Acak Rangkap Lengkap (RAL), masing-masing
dengan 6 perlakuan (termasuk basal MSL bebas PGR sebagai kontrol) dan 10 ulangan. Jumlah hari yang
diambil untuk pelepasan kuncup pada masing-masing media diambil sebagai pengamatan dan media
dimana inisiasi tunas dimulai paling awal distandarkan sebagai media yang paling tepat untuk inisiasi
kultur. Dengan cara yang sama, tiga percobaan masing-masing dibuat untuk membakukan medium
perkalian tunas dan media pemanjangan tunas. Untuk standarisasi medium untuk pembentukan akar in
vitro, hanya ada satu set percobaan tunggal yang ada pada CRD dengan 6 perlakuan (0 sampai 0,3 mg / l
BAP dalam kombinasi dengan 0,1 mg / l NAA) dan 10 ulangan. Untuk standarisasi medium terbaik untuk
perbanyakan tunas, jumlah tunas yang terbentuk pada berbagai media setelah 4 minggu subkultur
ketiga diambil sebagai pengamatan. Panjang (cm) tunas in vitro (panjang stolon) dan jumlah akar in vitro
per tunas pada masing-masing medium setelah 4 minggu subkultur ketiga diambil sebagai pengamatan
untuk membakukan media pemanjangan tunas dan pembentukan akar in vitro. Data diolah dengan
transformasi akar kuadrat (kecuali data perpanjangan tunas) dan dianalisis dengan Analisis Varian
Univariate dengan menggunakan SPSS ver. 20. Perbedaan yang signifikan jika ada di antara mean
dibandingkan dengan Tukey HSD (Zar, 1999)
Pengerasan
Pengerasan dilakukan dengan mengkultur planlet akar pada konsentrasi rendah (1/10) dari garam MS
tanpa regulator pertumbuhan, agar atau sukrosa untuk 4 minggu pertama dan kemudian pada air suling
selama 4 minggu ke depan dalam kondisi terkendali 24 ± 20C di bawah fotoperiod 12 jam dengan
intensitas cahaya 35 foton foton m-2s-1. Tanaman itu kemudian ditanam dalam gelas plastik kecil yang
mengandung media tanam Metro Mix-500. Sebanyak 20 tanaman dikenai prosedur pengerasan pada
satu waktu dan jumlah kelangsungan hidup setelah 8 minggu transfer terakhir ke aquaria dianggap
sebagai ukuran keandalan prosedur. Percobaan aklimatisasi diulang satu kali.
Google Terjemahan untuk Bisnis:Perangkat PenerjemahPenerjemah Situs Web