Paper of Research Result Seminar

AKTIVITAS EKSTRAK ANTIFUNGI ISOLAT AKTINOMISETES

SA E40 FS ASAL TANAH PERAKARAN MANGROVE SEGARA
ANAKAN, CILACAP TERHADAP PERTUMBUHAN JAMUR
PATOGEN TANAMAN
Silviyatun Ni’mah1, Dini Ryandini2, Endang Sri Purwati3
Pemrasaran1, Pembimbing I2, Pembimbing II2
Fakultas Biologi Universitas Jenderal Soedirman Purwokerto
Email: silviyatun4869@gmail.com

Abstract

Actinomycetes are Gram positive bacteria that able to produce bioactive

compounds e.g antifungal compound. This research aims to know the inhibitory
activity of antifungal extract of actinomycetes against plant pathogenic fungi
(Fusarium sp., Rhizoctonia solani., Sclerotium rolfsii). This research used survey and
experimental methods by Factorial Completely Randomized Design with two factors,
i.e growth medium and incubation period. Each factor has three levels. Each
treatment was repeated 3 times. The independent variables were growth medium
SCN Broth (E1), ISP2 Broth (E3), ISP3 Broth (E3) and incubation period (7 days
(T7), 14 days (T14), 21 days (T21), while the dependent variable was the inhibitory
activity of antifungal extract against Fusarium sp., Rhizoctonia solani, and
Sclerotium rolfsii. The main parameter was the inhibitory zone wide of antifungal
extract against plant pathogenic fungi, dry biomass weight, and medium pH. The
supporting parameters were, zone wide of actinomycetes isolate against plant
pathogenic fungi, and Rf value of Thin Layer Chromatography (TLC). The data was
analyzed by Analysis of Variance (ANOVA) at 95% of confidence level, then
followed by Duncan's Multiple Range Test (DMRT). The result showed that 1 of 3
potential actinomycetes has the best capability in inhibiting the growth of pathogenic
fungi, i.e actinomycetes isolate E40 FS. The optimum incubation period in producing
antifungal compound was 21 days. The highest inhibitory zone wide showed by
treatment E1T21, with 4,57 mm against Fusarium sp., 4, 27 mm against Sclerotium
rolfsii, and 5,73 mm against Rhizoctonia solani. The characteristic of antifungal
extract has 3 fractions of bioactive compound with Rf value ranged to 0,70-0,85 in
the chloroform, ethyl acetate, and acetic acid solvents (5:3:1 v/v/v).

Keywords: actinomycetes, antifungal activity, Fusarium sp., Rhizoctonia solani,

Sclerotium rolfsii.

PENDAHULUAN merupakan tempat pertemuan antara

Keberadaan mikroba di dalam
tanah terutama dipengaruhi oleh sifat
kimia dan fisika tanah. Struktur tanah
akan menentukan keberadaan oksigen
dan lengas dalam tanah, sehingga hal
ini akan membentuk lingkungan mikro
dalam suatu struktur tanah. Mikroba
akan membentuk mikro koloni dalam
struktur tanah tersebut (Anas, 1989).
Menurut Rao (1994), rhizosfer
tanah dengan akar tumbuhan. Jumlah
mikroba di daerah perakaran lebih
banyak dibanding di tanah yang tidak
terdapat perakaran, karena di daerah
perakaran terdapat nutrien-nutrien
seperti asam amino dan vitamin yang
diekskresikan oleh jaringan akar.
Hutan mangrove Segara Anakan
secara ekologis berfungsi sebagai
tempat pemijahan (spawning ground),

1
dan mencari makan (feeding ground)
bagi berbagai jenis hewan seperti ikan,
udang dan makrobenthos (Moosa et
al., 1996). Pembusukan bahan organik
dan penambatan nitrogen yang
disebabkan oleh adanya proses
dekomposisi sisa vegetasi di kawasan
mangrove menyebabkan tingginya
kelimpahan Aktinomisetes di tanah
kawasan mangrove, salah satunya di
Segara Anakan. Hal tersebut
dikarenakan mayoritas Aktinomisetes
merupakan saprofit tanah dan air
(Sunaryanto et al., 2009).
Karakteristik morfologi
aktinomisetes mempunyai struktur
hifa, termasuk dalam bakteri Gram
positif. Streptomyces, aktinomisetes
yang telah banyak dipelajari,
mempunyai kandungan G+C tinggi,
berkisar 51-70% (Putri & Nurkanto,
2016). Streptomyces dan
Micromonospora diketahui mampu
menghasilkan senyawa antifungi
(Sunaryanto et al., 2009).
Produksi senyawa metabolit
aktinomisetes dipengaruhi oleh
sumber nitrogen, komponen mineral,
dan sumber karbon pada medium
pertumbuhannya. Produksi senyawa
metabolit juga dipengaruhi oleh laju
pertumbuhan isolat yang digunakan
(Lertcanawanichakul et al., 2015).
Senyawa antifungi atau senyawa
antimikroba lainnya biasanya
dihasilkan pada awal fase stasioner
dalam pertumbuhan mikroorganisme.
Umumnya selama 14-21 hari masa
inkubasi merupakan fase stasioner dari
aktinomisetes (Mulyadi & Sulistyani,
2013). Evaluasi senyawa antifungi
yang dihasilkan dapat diidentifikasi
menggunakan metode Kromatografi
Lapis Tipis (KLT) dengan melihat
besarnya nilai retention factor (Rf)
(Sajid et al., 2011).
Jamur adalah organisme yang
sel-selnya berinti sejati (eukaryotic),
biasanya berbentuk benang,
2
bercabang-cabang, tidak berklorofil,
dinding selnya mengandung kitin,
selulosa, atau keduanya. Jamur ada
yang dikenal sebagai jamur patogen
bagi pertumbuhan tanaman,
diantaranya, Fusarium, Rhizoctonia,
dan Sclerotium (Semangun, 1996).
Salah satu metode pengendaliannya
adalah dengan menggunakan agensia
biologis seperti jamur dan bakteri.
Beberapa spesies bakteri seperti
aktinomisetes mampu menghambat
pertumbuhan jamur patogen dengan
cara memproduksi zat anti jamur
(antibiotika) dan enzim hidrolitik
ekstraseluller seperti kitinase dan
selulase yang mampu mendegradasi
dinding sel jamur patogen (Raharini et
al., 2012).
Berdasarkan uraian di atas
maka aktinomisetes berpeluang
sebagai agensia pengendali jamur
pathogen tanaman. Tujuan penelitian
adalah mendapatkan isolat
aktinomisetes yang mampu
menghambat jamur pathogen tanaman,
bagaimana kemampuan
penghambatannya dan mengetahui
senyawa antijamur yang
dihasilkannya.
METODE PENELITIAN
Materi penelitian
Materi yang digunakan dalam
penelitian adalah isolat aktinomisetes
SA E46-3, SA 25, dan SAE40FS
koleksi Laboratorium Mikrobiologi
Fakultas Biologi Unsoed, isolat jamur
patogen Fusarium sp., R. solani, S.
rolfsii, koleksi Laboratorium Mikologi
dan Fitopatologi Fakultas Biologi
Unsoed, media Strach Casein Nitrate
Agar (SCNA), Potato Dextrose Agar
(PDA), Strach Caseine Nitrate Broth
(SCNB), Yeast Extract Malt Extract
Broth (ISP 2), Oatmeal Broth (ISP 3),
etil asetat, alkohol 70%, spiritus,
akuades, pH universal, kertas saring
Whatman no. 41, TLC alumunium
sheet silica gel 60 F254 Merck, KOH
3%.
Alat yang digunakan dalam
penelitian ini adalah mikroskop, oven,
autoklaf, Laminar Air Flow (LAF),
timbangan analitik, microwave, hot
plate dan magnetic stirrer, corong
pemisah, termometer, pipet ukur dan
filler, pipet tetes, mikropipet dan tip,
microtube, Erlenmeyer, beaker glass,
object glass, cover glass, batang
drugalsky, cawan petri, botol sampel,
gelas ukur, tabung reaksi, rak tabung,
lampu bunsen, spatula, batang
pengaduk, sprayer, jarum ose, lemari
pendingin, pH universal, kamera, UV
cabinet.
Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di
Laboratorium Mikrobiologi Fakultas
Biologi Unsoed, pada bulan Juni-
Oktober 2017.
Metode Penelitian
Penelitian dilakukan secara
survey dan eksperimental. Metode
survey dilakukan untuk menyeleksi
isolat aktinomisetes yang memiliki
kemampuan anti jamur terbaik, uji
KLT senyawa aktif. Penelitian
mengenai penghambatan ekstrak
senyawa antifungi isolat aktinomisetes
terhadap jamur patogen tanaman
dilakukan dengan metode
eksperimental menggunakan
Rancangan Acak Lengkap (RAL) pola
faktorial, yang terdiri atas dua faktor
yaitu jenis medium pertumbuhan dan
waktu inkubasi, dengan masing-
masing faktor terdiri atas tiga taraf.
Faktor pertama yang dicoba adalah :
E1 = Ekstrak senyawa antifungi dari
kutur SCNB
E2 = Ekstrak senyawa antifungi dari
kutur Yeast Extract Malt Extract Broth
(ISP 2)
3
E3 = Ekstrak senyawa antifungi dari
kutur Oatmeal broth (ISP 3)
Faktor kedua waktu inkubasi adalah :
T1 = Inkubasi 7 hari
T2 = Inkubasi 14 hari
T3 = Inkubasi 21 hari
Masing-masing perlakuan diulang 3
kali. Variabel bebas berupa jenis
medium isolat aktinomisetes dan masa
inkubasi, sedangkan variabel
tergantungnya adalah aktivitas
penghambatan dari ekstrak senyawa
antifungi terhadap Fusarium sp., R.
solani, dan S. rolfsii. Parameter utama
yang diamati adalah lebar zona hambat
yang terbentuk oleh ekstrak senyawa
antifungi isolat aktinomisetes terpilih,
dan parameter pendukung adalah
bobot kering biomassa, pH medium,
lebar zona hambat yang terbentuk oleh
3 isolat aktinomisetes terhadap
Fusarium sp., R. solani, dan S. rolfsii,
dan nilai Rf ekstrak senyawa antifungi
Cara Kerja
Sterilisasi Alat dan Medium
Pertumbuhan (Novel et al, 2008)
Alat-alat gelas dan media
pertumbuhan (SCNA, SCNB, PDA,
ISP 2, dan ISP 3) disterilisasi
mengguna-kan autoklaf dengan suhu
121oC (250oF) dan pada tekanan 2 atm
selama 15 menit.
Peremajaan Isolat Aktino-misetes
dan jamur pathogen tanaman
(Sharma & parihar, 2010)
Isolat aktinomisetes SA E46-3,
SA 25, dan SAE40FS diremajakan
pada medium SCNA miring. Kultivasi
dilakukan selama 5-7 hari pada suhu
ruang. Rekultur isolat jamur patogen
Fusarium sp., R. solani,, dan S. rolfsii
pada medium PDA di dalam cawan
petri, diinkubasi selama 7x24 jam.
Seleksi Isolat Aktinomisetes
Menghambat Pertumbuhan Jamur
Patogen Tanaman (Kang et al,
2010)
Isolat aktinomisetes SA E46 -3,
SA 25, dan SA E40 FS masing-masing
diinokulasikan pada bagian tengah
cawan petri berisi medium SCNA
dengan metode streak. Kemudian,
diinkubasi selama 7x24 jam. Setelah
itu, jamur patogen diambil tiga plug
dengan diameter 4 mm dan diletakkan
di sebelah sisi isolat aktinomisetes
dengan jarak dari tepi cawan 2 cm.
Selanjutnya, diinkubasi pada suhu
ruang. Zona hambat yang terbentuk
diamati setiap 1x24 jam selama 3 hari.
Karakterisasi Isolat Aktinomisetes
Terpilih (Sharma & Parihar, 2010)
Pengamatan Morfologi
Pengamatan makromorfologi
dilakukan dengan parameter koloni
yang diamati meliputi: warna
miselium aerial, warna miselium
substrat, bentuk koloni, tepi koloni,
elevasi koloni, permukaan koloni dan
ukuran koloni. Pengamatan
mikromorfologi dilakukan dengan cara
mengamati tipe rantai spora
menggunakan mikroskop cahaya
dengan perbesaran 400 hingga 1000
kali dan mengamati sifat dinding sel
(sifat Gram).
Pengamatan sifat biokimia
Pengamatan sifat biokimia yang
dilakukan adalah sifat dinding sel atau
sifat Gram dengan KOH 3% (Powers,
E.M., 1995), uji oksidase (Atlas et al.,
1984), uji katalase (Atlas et al.,1984),
uji Oksidatif-Fermentatif (Kismiyati,
2009), uji IMViC (Indol, Methyl Red,
Voges Proskauer, Citrate) (Atlas,
1984), Uji Penggunaan Sumber
Karbon dan Produksi Asam pada
raffinosa, mannosa, laktosa, arabinosa,
sukrosa, fruktosa, xylosa, dan maltosa.
(Charousova et al., 2016)
4
Produksi Senyawa Antifungi
Medium Fermentasi SCNB, ISP
2 broth, dan ISP 3 broth steril
disiapkan sebanyak 100 ml dan
dimasukkan dalam botol sampel
ukuran 120 ml. Isolat aktinomisetes
terpilih sebanyak 6 plug masing-
masing diinokulasi-kan, selanjutnya
diinkubasi selama 21 hari dengan
penggojogan menggunakan shaker
incubator dengan kecepatan 250 rpm
pada suhu 28oC.
Setiap selesai masa inkubasi
dilakukan filtrasi, pengukuran pH
medium, dan pengukuran bobot kering
biomassa miselium. Pengukuran pH
medium dilakukan dengan
menggunakan pH meter. Filtrasi
dilakukan dengan menyaring filtrat
menggunakan kertas Whatman no.41
untuk memisahkan filtrat dengan
biomassa. Biomassa yang didapat
kemudian dikeringkan menggunakan
oven pada suhu 80oC selama 2 jam,
kemudian dilakukan penghitungan
bobot kering biomassanya
menggunakan rumus :
Bobot Kering = Bobot akhir-bobot
awal
Ekstraksi Senyawa Antifungi
Filtrat diekstraksi dengan pelarut
etil asetat (1:1, v/v), penggojogan
filtrat selama 2x10 menit sehingga
antara filtrat dan pelarut terpisah dan
didapatkan ekstrak. Ekstrak kemudian
diuapkan menggunakan rotatory
evaporator pada suhu 70oC.
Uji Penghambatan Ekstrak
Senyawa Antifungi
Pengujian dilakukan dengan cara
membuat sumuran pada bagian tengah
medium PDA. Sumuran kemudian,
ditetesi ekstrak senyawa antifungi
sebanyak 100 µl. ekstrak dibiarkan
meresap pada medium uji.
Selanjutnya, isolat jamur patogen
tanaman diletakkan di tiga titik pada SAE40FS yang berpotensi
medium uji dengan jarak 2 cm dari menghambat pertumbuhan jamur
sisi cawan. Setelah itu, dilakukan patogen tanaman diperoleh isolat
inkubasi selama 2x24 jam. Lebar zona aktinomisetes SAE40FS (Gambar 1.),
hambat yang terbentuk diukur dan hal ini dapat diketahui dengan adanya
dihitung. hambatan pada pertumbuhan jamur
Lebar zona hambat = R1-R2/R1 patogen tanaman. Pertumbuhan pada
R1 = jari-jari koloni jamur yang jamur uji yang terhambat
berlawanan dengan pusat antagonis menunjukkan bahwa isolat SA E40 FS
R2 = jari-jari koloni jamur menuju mampu menghasilkan senyawa
pusat antagonis antifungi. Menurut Arifuzzaman et al.,
(2010) penentuan aktivitas
Karakterisasi Senyawa Antifungi penghambatan dapat diamati secara
(Prakash et al., 2013) kualitatif dengan memberi skor dari
Lempeng kromatografi diberi zona hambat yang terbentuk. Aktivitas
garis dan diberi penanda titik antifungi ditandai dengan
menggunakan pensil untuk pertumbuhan jamur patogen yang
menentukan titik awal dan titik akhir kurang baik.
jalannya senyawa Ekstrak kental Menurut Lahdenpera (2000),
senyawa antifungi (E1T21, E2T21, mekanisme penghambatan patogen
dan E3T21) sebanyak 10 µl masing- tanaman oleh Streptomyces yaitu, (1)
masing ditotolkan pada titik awal. melalui kompetisi yang terjadi di
Lempeng kemudian direndam dalam rhizosfer. Streptomyces mampu
eluen berupa campuran kloroform, etil menggunakan eksudat akar secara baik
asetat, dan asam asetat dengan untuk pertumbuhannya. (2)
perbandingan 5:3:1 hingga mencapai hiperparasitisme, kelompok
titik akhir. Lempeng diangkat dan Streptomyces mampu mempenetrasi
dikeringkan dalam oven pada suhu dinding miselium jamur patogen
80oC selama 10 menit. Lempeng Pythium, Rhizoctonia, dan Fusarium
kemudian diamati menggunakan alat oxysporum. Enzim pemecah dinding
UV cabinet. Spot yang terbentuk sel diperlukan dalam proses
diukur nilai Rfnya. hiperparasitisme.
Nilai Rf = jarak tempuh substansi/
SA E40 FS SA E40 FS SA E40 FS
jarak tempuh eluen

Analisis Data
Data hasil pengukuran aktivitas a b c
senyawa antifungi dianalisis dengan Gambar 1. Aktivitas penghambatan isolat
aktinomisetes SA E40 FS terhadap
metode Analysis of Variance pertumbuhan jamur patogen (a) Fusarium
(ANOVA) pada tingkat kepercayaan sp.,(b) Sclerotium rolfsii,(c) Rhizoctonia
solani
95%. Hasil uji ANOVA yang berbeda
nyata dilanjutkan dengan uji Duncan’s Isolat aktinomisetes SA E40 FS
Multiple Range Test (DMRT). Hasil mempunyai morfologi koloni berupa
karakterisasi dianalisis secara miselium substrat berwarna putih,
deskriptif. miselium aerial berwarna putih
keabuan, permukaan koloni berdebu
HASIL DAN PEMBAHASAN (powdery), bentuk koloni sirkuler, tepi
Hasil pengujian isolat koloni berbingkul (undulate), elevasi
aktinomisetes SAE46-3, SA25, dan koloni menonjol (raised), ukuran
5
koloni kurang lebih 3 mm (gambar 2).
Morfologi sel yang dimiliki oleh isolat
ini diantaranya memiliki sifat Gram
positif yang ditunjukkan dengan tidak
terbentuknya lendir saat ditetesi KOH
3%, bentuk rantai spora yang dimiliki
oleh isolat ini adalah spiral.
a b
Gambar 2. (a) karakter kultur, (b)
morfologi koloni Isolat Aktinomistes
SA E40 FS
Menurut Holt et al., (2000),
salah satu ciri khas genus
Streptomyces, adalah koloninya
diselimuti oleh miselium udara yang
bebas dan hifa yang dikelilingi oleh
selubung (sheath) hidrofobik.
Awalnya hifa berwarna putih,
kemudian saat mulai pembentukan
spora hifa berubah menjadi warna-
warna tertentu. Selanjutnya, koloni
tampak memiliki serbuk di
permukaannya. Warna koloni
aktinomisetes berbeda-beda, karena
perbedaan kandungan pigmen dalam
selnya (Susilowati, 2007).
Hasil uji biokimiawi
menunjukkan bahwa isolat SA E40 FS
mempunyai sifat oksidatif dan
fermentatif, artinya isolat ini bersifat
aerob fakultatif. Hasil uji penggunaan
sumber karbon dan produksi asam
pada isolate SA E40 FS menunjukkan
isolat ini mampu menggunakan karbon
yang disediakan yaitu, xylosa,
raffinosa, mannosa, arabinosa,
fruktosa, sukrosa, ramnosa, dan
maltosa. Menurut Angustine et al.,
(2005) Streptomyces dapat
menggunakan sumber karbon dari
berbagai jenis gula antara lain
dextrosa, fruktosa, laktosa, maltosa,
mannitol, ramnosa. Sumber karbon
yang dimaanfaatkan Streptomyces
6
dapat mempengaruhi produksi dari
senyawa metabolit sekunder yang
dihasilkan.
Hasil uji IMVIC menunjukkan
bahwa isolat E40 FS negatif terhadap
uji ini. Menurut Tyagi et al., (2014)
semua isolat Streptomyces tidak
memiliki hasil positif pada uji IMVIC.
Hasil uji katalase dan oksidase
menunjukkan hasil positif. Hasil ini
sesuai dengan penelitian yang
dilakukan oleh Hasani et al., (2013)
yang menyatakan bahwa Streptomyces
mampu menghasilkan enzim katalase
dan sitokrom oksidase dalam
metabolismenya. Selain itu,
Streptomyces mampu mendegradasi
lignin, adenin, gelatin, dan pati.
Isolat aktinomisetes SA E40 FS
yang ditumbuhkan pada medium
produksi SCNB (E1), ISP 2 (E2), dan
ISP 3 (E3) diketahui dapat
menghasilkan senyawa antifungi yang
dapat menghambat pertumbuhan
jamur patogen tanaman. Pengujian
kemampuan isolat SA E40 FS
dilakukan dengan metode difusi,
menggunakan filtrat dan ekstrak
senyawa antifungi. Hasil pengujian
secara difusi menunjukkan adanya
penghambatan dari ekstrak inkubasi
hari ke-21 (E1T21, E2T21, E3T21)
terhadap pertumbuhan jamur patogen
tanaman. Berdasarkan pengujian yang
dilakukan diketahui bahwa E2T21
memiliki nilai penghambatan terbesar
terhadap Fusarium sp., dengan lebar
pertumbuhan koloni yang terhambat
sebesar 4,67 mm, sedangkan ekstrak
yang menghambat pertumbuhan S.
rolfsii dan R. solani terbesar dimiliki
oleh E1T21 dengan masing-masing
nilai hambatan 4,27 mm, dan 5,73 mm
(Tabel 1 dan Gambar 3.).
Kombinasi Lebar Zona Hambat (mm)
Perlakuan
Fusarium R. solani S.
sp. rolfsii
E1T7 - -
E1T14 - - Tabel 2. Analisis Ragam (ANOVA) Uji Penghambatan
E1T21 4,67 5,73 4,27 Ekstrak Senyawa Antifungi Isolat Aktinomisetes SA
E2T7 - - - E40 FS terhadap Fusarium sp
E2T14 - - -
E2T21 3,87 3,43 3,2
E3T7 - - -
E3T14 - - -
E3T21 3,5 2,77 3,47
Tabel 1. Lebar Zona Hambat Ekstrak Antifungi Isolat Tabel 3. Analisis Ragam (ANOVA) Uji Penghambatan
Aktinomisetes SA E40 FS Terhadap Jamur Patogen Ekstrak Senyawa Antifungi Isolat Aktinomisetes SA
Tanaman E40 FS terhadap S. rolfsii

Hasil analisis ragam (ANOVA)

uji penghambatan ekstrak senyawa
antifungi isolat aktinomisetes terhadap
Fusarium sp. dan S. rolfsii
menunjukkan bahwa tidak adanya Tabel 4. Analisis Ragam (ANOVA) Uji Penghambatan
interaksi dari dua perlakuan yang Ekstrak Senyawa Antifungi Isolat Aktinomisetes SA
E40 FS terhadap R. solani
diujikan (Tabel 2, dan Tabel 3).
Berdasarkan hasil analisis yang
diperoleh hanya waktu inkubasi yang Penghambatan ekstrak senyawa
mempunyai pengaruh nyata terhadap antifungi isolat aktinomisetes terhadap
produksi senyawa antifungi dalam R. solani menunjukkan bahwa adanya
menghambat pertumbuhan jamur interaksi dari dua perlakuan yang
patogen tanaman, waktu inkubasi yang diujikan (Tabel 4). Berdasarkan hasil
optimal adalah hari ke-21. yang didapat senyawa antifungi yang
diproduksi pada medium SCNB dan
diinkubasi selama 21 hari mempunyai
pengaruh terhadap pertumbuhan R.
solani. Berdasarkan hasil ini, maka
hipotesis kedua ditolak.
Berdasarkan hasil penelitian
yang dilakukan diketahui bahwa lebar
zona hambat yang dihasilkan masing-
masing ekstrak berbeda-beda. Hal ini
menunjukkan bahwa senyawa
antifungi yang dihasilkan mempunyai
mekanisme kerja yang berbeda
terhadap jamur uji. Menurut Pathania
Gambar 3. Zona Hambat Hasil Uji Ekstrak dan Brown (2008), antifungi akan
Senyawa Antifungi Isolat Aktinomisetes SA menunjukkan aktivitas toksisitas
E40 FS (a) E1T21, (b) E2T21, (c) E3T21
Terhadap (1) Fusarium sp., (2) S. rolfsii, (3) selektif dan berbeda pada tiap
R.solani. organisme. Perbedaan daya hambat
juga dapat disebabkan karena
antifungi yang dihasilkan memiliki
perbedaan susunan kimia. Mekanisme
dan letak kerja antifungi dapat
dipengaruhi oleh adanya perbedaan
7
antifungi yang dihasilkan dan susunan yang berfungsi sebagai sumber karbon
dari struktur kimianya. (Wulandari & Sulistyani, 2016).
Berdasarkan hasil penelitian Biomassa yang dihasilkan dari
diketahui pada inkubasi hari ke-7 dan berbagai waktu inkubasi mengalami
14 isolat aktinomisetes belum peningkatan, namun untuk nilai akhir
memproduksi senyawa antifungi. pH medium fermentasi cenderung
Senyawa antifungi dihasilkan pada fluktuatif (Tabel 4.8.). Menurut
hari ke-21 waktu inkubasi. Tarhan et al (2011), biomassa dan nilai
Berdasarkan penelitian pH medium fermentasi mempengaruhi
Lertcanawanichakul et al. (2015), produksi metabolit yang dihasilkan.
beberapa metabolit sekunder disintesis Semakin tinggi bobot biomassa yang
tidak pada waktu yang sama dan tidak dihasilkan, maka produksi senyawa
pada semua waktu inkubasi. Produksi metabolit pun semakin tinggi. Naik
senyawa metabolit dipengaruhi oleh turunnya pH medium fermentasi
laju pertumbuhan isolat yang dipengaruhi oleh aktivitas hidrolisis
digunakan. Senyawa antifungi atau senyawa-senyawa karbon yang
senyawa antimikroba lainnya biasanya menghasilkan asam-asam organik,
dihasilkan pada awal fase stasioner sehingga akan mempengaruhi nilai
dalam pertumbuhan mikroorganisme. akhir dari pH medium fermentasinya.
Fase stasioner merupakan fase disaat Menurut Ayari et al., (2016)
kondisi medium pertumbuhan telah perubahan nilai pH medium yang
kehabisan nutrisi dan terjadi terjadi dapat menginduksi
akumulasi zat sisa metabolisme yang terbentuknya substansi baru yang
bersifat toksik (Madigan et al., 2015). mempunyai pengaruh terhadap
Umumnya selama 14-21 hari masa produksi antibiotik ataupun antifungi.
inkubasi merupakan fase stasioner dari
aktinomisetes yang merupakan fase Inkubasi Biomassa Miselium Nilai pH Medium
Hari ke- (g/100 ml)
mikroorganisme menghasilkan E1 E2 E3 E1 E2 E3
metabolit sekunder diantaranya adalah 7 0,070 0,032 0,068 6,5 6,8 6,7
antibiotik dan pigmen (Mulyadi & 14 0,082 0,133 0,069 6,9 6,7 6,4
Sulistyani, 2013).
21 0,140 0,200 0,174 6,4 6,7 6,5
Berdasarkan hasil penelitian
yang diperoleh medium SCNB Tabel 5. Biomassa dan Nilai pH Medium Fermentasi
Isolat Aktinomisetes pada Medium dan
merupakan medium yang optimal Waktu Inkubasi Berbeda
dalam menghasilkan senyawa
antifungi. SCNB mempunyai
kandungan starch sebagai sumber
karbon, casein sebagai sumber
nitrogen, dan nitrate sebagai kofaktor.
Adanya komponen yang kompleks
pada medium SCNB ini menyebabkan
isolat aktinomisetes dapat
menghasilkan senyawa metabolit
sekunder dalam jumlah yang banyak.
Gambar 4. Histogram Biomassa Kultur Isolat Aktinomisetes
Medium ISP 2 mengandung yeast SA E40 FS Pada Medium dan Waktu Inkubasi
extract yang berfungsi sebagai sumber Berbeda Berdasarkan Berat Kering Miselium

nitrogen, dan adanya malt extract yang

berfungsi sebagai sumber karbon.
Medium ISP 3 mengandung oatmeal
8
 Ekstrak kasar senyawa antifungi Nilai Rf ekstrak senyawa
c
isolat aktinomisetes dikarakterisasi antifungi isolat aktinomisetes yang
menggunakan metode KLT. Hasil dihasilkan berkisar dari 0,70 hingga
karakterisasi menggunakan lempeng 0,80 sehingga hipotesis yang ketiga
kromatografi berhasil memisahkan dapat diterima. Diduga salah satu
senyawa yang terkandung dalam fraksi memiliki aktivitas sebagai
ekstrak kasar. Terpisahnya senyawa senyawa antifungi. Menurut Ali
satu dengan yang lainnya ditandai (2009) karakterisasi secara parsial
dengan terbentuknya beberapa spot senyawa antifungi dari isolat terpilih
berwarna setelah dilihat menggunakan dapat menggunakan metode TLC-
sinar UV dengan panjang gelombang Bioautografi. Menurut Prakash et al.,
366 nm. Hasil yang diperoleh (2013) ekstrak kasar aktinomisetes
menunjukkan fraksi-fraksi senyawa (Streptomyces rochei MSA14)
aktif yang berbeda jaraknya terhadap dilakukan pemurnian secara parsial
origin spot (titik awal). Berdasarkan menggunakan TLC menunjukkan
perhitungan antara jarak spot yang beragam spot dari suatu senyawa aktif,
terbentuk terhadap jarak tempuh eluen, dengan nilai Rf antara 0,22 hingga
masing-masing ekstrak kasar 0,99. Faktor yang mempengaruhi
mempunyai jumlah fraksi yang sama keberhasilan KLT adalah sifat dari
dan nilai Rf yang relatif sama. Ekstrak penyerap dan derajat aktifitasnya,
E1T21 mempunyai 3 fraksi dengan tebal dan kerataan lapisan penyerap,
nilai Rf 0,78; 0,80; dan 0,84, ekstrak pelarut fase gerak, derajat kejenuhan,
E2T21 mempunyai 3 fraksi dengan jumlah cuplikan, konsentrasi senyawa,
nilai Rf 0,70; 0,78; dan 0,80, serta serta suhu dan kesetimbangan (Wall,
ekstrak E3T21 mempunyai 3 fraksi 2007).
dengan nilai Rf 0,70; 0,75; dan 0,82
(Gambar 4.7.).
KESIMPULAN DAN SARAN
Batas
Kesimpulan
eluen Kesimpulan pada penelitian ini
adalah :
1. Isolat aktinomisetes E40 FS asal
tanah perakaran mangrove Segara
Anakan Cilacap mempunyai
aktivitas antifungi terhadap
pertumbuhan jamur patogen
tanaman (Fusarium sp.,
Rhizoctonia solani, Sclerotium
rolfsii).
Origin spot 2. Waktu optimum isolat
c
a b aktinomisetes E40 FS dalam
menghasilkan senyawa antifungi
adalah 21 hari.
Gambar 5. Profil KLT pemisahan senyawa 3. Senyawa antifungi isolat
aktif dari ekstrak kasar isolat aktinomisetes
(a) E1T21, (b) E2T21, (c) E3T21 aktinomisetes E40 FS mempunyai
menggunakan fase gerak (eluen) kloroform, karakter nilai Rf antara 0,70 hingga
etil asetat, dan asam asetat (5:3:1 v/v) 0,84.

9
Saran
Perlu dilakukan penelitian lebih
lanjut untuk mengetahui fraksi aktif
sebagai antifungi dengan metode
bioautografi, dan menentukan jenis
senyawa antifungi dengan
menggunakan metode HPLC.
DAFTAR REFERENSI
Ali, A. 2009. Skrining dan
Karakterisasi Parsial Senyawa
Antifungi dari Actinomycetes
Asal Limbah Padat Sagu
Terdekomposisi. Jurnal Berk.
Penel. Hayati, 14:219-225
Anas. 1989. Biologi Tanah dalam
praktek. Bogor: Institut Pertanian
Bogor.
Angustine, SK., Bhavsar SP.,
Kapadamis, BP. 2005. Production
of Growth Dependent Metabolite
Active Against Dermatophytes by
Streptomyces rachei AK39.Indian
journal Medical Research, 121,
pp. 164-170.
Arifuzzaman, M., Khatun, M.R. dan
Rahman,H. 2010. Isolation and
Screening of Actinomycetes from
Sundarbans Soil for Antibacterial
Activity. African Journal of
Biotechnology, 9(29),pp. 4615-
4619.
Atlas, R.M., Brown, A.E., Dobra,
K.W., dan Miller, L. 1984.
Experimental Microbiology. New
York: Macmillan Publishing
Company.
Ayari, A., Morakchi, H., dan Djamila,
K.G. 2016. Isolation of Antifungal
Activity of Novel Marine
Actinomycete, Streptomyces sp.
AA13 Isolated from Sediments of
Lake Ougeria (Algeria) Against
Candida albicans. African
Journal of Microbiology
Reseacrh, 10(6), pp. 156-171.
10
Charousova, I., Javorekova, S., Medo,
J. dan Schade, R. 2016.
Characteristic of Selected Soil
Streptomycetes with
Antimicrobial Potential Against
Phytopathogenic Microorganism.
Journal of Microbiology,
Biotechnology and Food Sciences,
5(1), pp. 64-68.
Hasani, Amin., Ashraf K., dan
Khosrow I. 2013. Streptomycetes:
Characteristics and Their
Antimicrobial Activities.
International Journal of Advanced
Biological and Biomedical
Research, 2(1), pp. 63-75
Holt, J.G., Krieg, N.R., Sneath,
P.H.A., Staley, J.T., & Williams,
S.T. 2000. Bergey’s Manual of
Determinative Bacteriology 9th
Edition. Lippincott Williams &
Wilkins, Philadelphia USA.
Kang,M.J., Strap, J.L. dan Crawford.
2010. Isolation and
Characterization of Potent
Antifungal Strains of The
Streptomyces violaceusniger
Clade Active Against Candida
albicans, J. Inda Microbiol.
Biotechnol, 37 pp. 35-41.
Kavitha., M. Vijayalakshmi., P.
Sudhakar., dan G. Narasimha.
2010. Screening of Actinomycete
Strains for The Production of
Antifungal Metabolites. African
Journal of Microbiology
Research, 4 (91), pp. 027-032.
Kismiyati., Subekti, R., Yusuf,
R.W.N., dan Kusdarwati, R. 2009.
Isolasi dan Identifikasi Bakteri
Gram Negatif pada Luka Ikan
Maskoki (Carassius auratus)
Akibat Infestasi Ektoparasit
Argulus sp. Jurnal Ilmiah
Perikanan dan Kelautan, 1(2), pp.
129-134.
Lahdenpera, M.L. 2000. How
Mycostop Acts in the Control of
 Fungal Plant Disease. Verdera, 5,
pp. 1-2.
Lertcanawanichakul, M., K. Pondet,
dan J. Kwanep. 2015. In Vitro
Antimicrobial and Antioxidant
Activities of Bioactive
Compounds (Secondary
Metabolites) Extracted from
Streptomyces lydicus A2. Journal
of Applied Pharmaceutical
Science, 5(02), pp. 17-21.
Madigan, M.T., Martinko, J.M.,
Bender, K.S., Buckley, D.H.,
& Stahl, D.A. 2015. Brock
Biology of Microorganisms
14th Edition. Pearson
Education, USA.
Moosa, Kasim, D. Rokhmin, M.
Hutomo, S.S. Ismu, and S. Salim.
1996. Indonesian Country Study
on Integrated Coastal and Marine
Biodiversity Management.
Ministry of State for Environment
Republic of Indonesia in
coorporation with Directorate for
Nature Management, Kingdom of
Norway.
Mulyadi., dan Sulistyani, N. 2013.
Aktivitas Cairan Kultur 12 Isolat
Actinomycetes Terhadap Bakteri
Resisten. Jurnal Kesmas, 7(2), pp.
55-122.
Novel, S.S., Asri, P.W., dan Ratu, S.
2008. Praktikum Mikrobiologi
Dasar. Jakarta: Erlangga
Pathania, Ranjana., dan Eric D.
Brown. 2008. Small and Lethal:
Searching for New Antibacterial
Compounds With Novel Modes of
Action. India: Departement of
Biotechnology, Indian Istitute of
Technology, Roorkee.
Powers, E.M. 1995. Fficacy of The
Ryu Nonstaining KOH technique
for rapidly Determining Gram
Reactions of Food-Borne and
Waterborne Bacteria and Yeasts.
Applied and Environmental
11
Microbiology, 61 (10), pp. 3756-
3758.
Prakash, S., Ramasubburayan, R., P.
Iyappraja., C. Kumar., C.J. Mary.,
A. Palavesam., dan G. Immanuel.
2013. Screening and Partial
Purification of Antifungal
Metaboliter from Streptomyces
rochei MSA14: an Isolate from
Marine Mining Soil of Southwest
Coast of India. Indian Journal of
Geo-Marine Sciences, 42(7), pp.
888-897.
Putri, Ade Lia dan Nurkanto, A. 2016.
Keragaman Aktinomisetes Asal
Serasah, Sedimen, dan Tanah
Pulau Enggano, Bengkulu. Berita
Biologi, 15(3), pp. 217-225.
Raharini, Aninda O., R. Kawuri., dan
K. Khalimi. 2012. Streptomyces
sp. Sebagai Biokontrol Penyakit
Layu pada Tanaman Cabai Merah
(Capsicum annuum L.) yang
Disebabkan Oleh Fusarium
oxysporum f.sp. capsici. Agrotrop,
2(2), pp. 151-150.
Rao, N.S.S. 1994. Soil Microbiology,
Fourth Edition of Soil
Microorganism and Plant
Growth. USA: Science Publisher,
Inc.
Sajid, I., Shaaban, K.A. dan Hasnain,
S. 2011. Identification, Isolation
and Optimization of Antifungal
Metabolites from the
Streptomyces malachitofuscus
CTF9. Brazilian Journal of
Microbiology, 42, pp. 592-604.
Semangun. 1996. Pengantar Ilmu
Penyakit Tumbuhan. Yogyakarta:
Gajah Mada University Perss.
Sharma, Harpreet dan Leena.P. 2010.
Antifungal Activity of Extracts
Obtained from Actinomycetes.
Journal of Yeast and Fungal
Research, 1(10), pp. 197-200.
Sunaryanto, R., Marwoto, B., Irawadi,
T. T., Mas’ud, Z.A., dan Hartoto,
L. 2009. Isolasi dan Penapisan
 Aktinomisetes Laut Penghasil
Antimikroba. Jurnal Ilmu
Kelautan,14(2), pp. 98-101.
Susilowati, Dwi N., Ratih D. H., dan
Erny Y. 2007. Isolasi dan
Karakterisasi Aktinomisetes
Penghasil Antibakteri
Enteropatogen Escherichia coli
K1.1, Pseudomonas pseudomallei
02 05, dan Listeria
monocytogenes 5407. Jurnal
AgroBiogen, 3(1), pp. 15-23.
Tarhan, L., Kayah, H.A., Sazak, A., &
Sahin, N. 2011. The Correlation
Between TCA-Glyoxalate
Metabolite and Antibiotic
Production of Streptomyces sp.
M4018 Grown in Glycerol,
Glucose, and Starch Medium.
Journal of Appl. Biochem
Biotechnol, 165, pp. 318-337.
Tyagi, J., Bhatnagar, T., & Pandey, F.
2014. Isolation and
Characterization of
Actinomycetes from Soil and
Screening Their Antifungal
Activities. International Journal
of Life Sciences Research, 2(4) :
81-85.
Wall, P.E. 2007. Thin-Layer
Chromatography: A Modern
Practical Approach. United
Kingdom : Royal Society of
Chemistry.
Wulandari, Sabrina dan Sulistuyani.
2016. Pengaruh Media Terhadap
Pertumbuhan Isolat
Actinomycetes Kode AL35 Serta
Optimasi Produksi Metabolit
Antibakteri Berdasarkan Waktu
Fermentasi dan pH. Media
Farmasi, 13 (2), pp. 186-198.

12