TRIGLYCERIDES

Trigliceridos
GPO-POD. Enzimático colorimétrico

Determinación cuantitativa de triglicéridos Blanco Patrón Muestra

IVD RT (mL) 1,0 1,0 1,0
(Nota1,2)
Patrón ( L) -- 10 --
Conservar a 2-8ºC
Muestra ( L) -- -- 10
PRINCIPIO DEL METODO Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC o 10 min. a temperatura ambiente.
Los triglicéridos incubados con lipoproteinlipasa (LPL) liberan glicerol y 4. Leer la absorbancia (A) del Patrón y la muestra, frente al Blanco de
ácidos grasos libres. El glicerol es fosforilado por glicerolfosfato reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos.
deshidrogenasa (GPO) y ATP en presencia de glicerol quinasa (GK) para
producir glicerol-3-fosfato (G3P) y adenosina-5-difosfato (ADP). El G3P CALCULOS
es entonces convertido a dihidroxiacetona fosfato (DAP) y peróxido de ( A ) Muestra
x 200 (Conc. Patrón) = mg/dL de triglicéridos en la muestra
hidrogeno (H2O2) por GPO. ( A ) Patrón
Al final, el peróxido de hidrogeno (H2O2) reacciona con 4-aminofenazona
(4-AF) y p-clorofenol, reacción catalizada por la peroxidasa (POD) dando Factor de conversión: mg/dL x 0,0113 = mmol/L.
una coloración roja:
CONTROL DE CALIDAD
LPL
Triglicéridos + H2O Glicerol + Ácidos grasos libres Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
Glicerol quinasa SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
Glicerol + ATP G3P+ ADP Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el
GPO instrumento, los reactivos y el calibrador.
G3P + O2 DAP + H2O2
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
POD correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
H2O2 + 4-AF + p-Clorofenol Quinona + H2O
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de VALORES DE REFERENCIA
triglicéridos presentes en la muestra ensayada1,2,3. Hombres: 40 – 160 mg/dL
SIGNIFICADO CLINICO Mujeres: 35 – 135 mg/dL
Los triglicéridos son grasas que suministran energía a la célula. Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
Al igual que el colesterol, son transportados a las células del organismo establezca sus propios valores de referencia.
por las lipoproteínas en la sangre. CARACTERISTICAS DEL METODO
Una dieta alta en grasas saturadas o carbohidratos puede elevar los Rango de medida: Desde el limite de detección de 0,7 mg/dL hasta el limite de
niveles de triglicéridos. linealidad de 1000 mg/dL.
Su aumento es relativamente inespecífico. Diversas dolencias, como Si la concentración es superior al límite de linealidad, diluir la muestra 1/2 con
ciertas disfunciones hepáticas (cirrosis, hepatitis, obstrucción biliar) o ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
diabetes mellitus, pueden estar asociadas con su elevación 3,6,7,. Precisión:
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos
clínicos y de laboratorio. Intraserie (n=20) Interserie (n=20)
Media (mg/dL) 118 216 119 215
REACTIVOS SD 0,67 0,94 2,17 2,91
R1 GOOD pH 7,5 50 mmol/L CV (%) 0,60 0,43 1,83 1,36
Tampón p-Clorofenol 2 mmol/L
Lipoprotein lipasa (LPL) 150000 U/L Sensibilidad analítica: 1 mg/dL = 0,0012 A.
Glicerol quinasa (GK) 500 U/L Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas
R2 Glicerol-3-oxidasa (GPO) 2500 U/L significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
Enzimas Peroxidasa (POD) 440 U/L Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:
4 – Aminophenazone (4-AF) 0,1 mmol/L Coeficiente de correlación (r): 0,996.
ATP 0,1 mmol/L Ecuación de la recta de regresión: y= 1,00x + 0,0743.
TRIGLYCERIDES CAL Patrón primario acuoso de Triglicéridos 200 mg/dL Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
PREPARACION INTERFERENCIAS
Reactivo de trabajo (RT): Disolver ( ) el contenido de un vial de R 2 No se han observado interferencias con bilirrubina hasta 170 mol/L y
Enzimas en un frasco de R 1 Tampón. hemoglobin hasta 10 g/L .
2

Ref: 1001310 Reactivo de trabajo (RT): Reconstituir ( ) el contenido de Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la
4,5
un vial de R 2 Enzimas en 10 mL de R 1 Tampón. determinación de los triglicéridos .
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. NOTAS
RT Estabilidad: 6 semanas en nevera (2-8ºC) o una semana a 15-25ºC. 1. TRIGLYCERIDES CAL: Debido a la naturaleza del producto, es
aconsejable tratarlo con sumo cuidado ya que se puede contaminar con
CONSERVACION Y ESTABILIDAD facilidad.
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad 2. LCF(Lipid Clearing Factor) está integrado en el reactivo.
indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 3. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores sistemáticos
2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. en métodos automáticos. En este caso, se recomienda utilizar calibradores
No usar reactivos fuera de la fecha indicada. séricos.
Indicadores de deterioro de los reactivos: 4. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensación.
- Presencia de partículas y turbidez. 5. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de
- Absorbancia (A) del Blanco a 505 nm > 0,14. este reactivo en distintos analizadores.
MATERIAL ADICIONAL BIBLIOGRAFIA
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 505 nm. 1. Buccolo G et al. Quantitative determination of serum triglycerides by use of enzimes.
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. Clin Chem 1973; 19 (5): 476-482.
- Equipamiento habitual de laboratorio. 2. Fossati P et al. Clin. Chem 1982; 28(10): 2077-2080.
3. Kaplan A et al. Tryglycerides. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
MUESTRAS Princeton 1984; 437 and Lipids 1194-1206.
Suero y plasma heparinizado o EDTA 1. Estabilidad de la muestra: 5 días 4. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
a 2-8ºC. 5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
6. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
PROCEDIMIENTO 7. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
1. Condiciones del ensayo:
PRESENTACION
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . 505 (490-550) nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz Ref: 1001310 5 x 10 mL
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC Ref: 1001311 10 x 20 mL
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. Ref: 1001312 Cont. 10 x 50 mL
3. Pipetear en una cubeta: Ref: 1001313 4 x 125 mL
Ref: 1001314 4 x 250 mL

BSIS31-E Ed.02/2007 SPINREACT,S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com
 TRIGLYCERIDES

Triglycerides
GPO-POD. Enzymatic colorimetric

Quantitative determination of triglycerides 3. Pipette into a cuvette:

IVD Blank Standard Sample
WR (mL) 1.0 1.0 1.0
Store at 2-8ºC (Note 1,2)
-- 10 --
Standard ( L)
PRINCIPLE OF THE METHOD Sample ( L) -- -- 10
Sample triglycerides incubated with lipoproteinlipase (LPL), liberate glycerol and
free fatty acids. Glycerol is converted to glycerol-3-phosphate (G3P) and 4. Mix and incubate for 5 min. at 37ºC or 10 min. at room temperature.
adenosine-5-diphosphate (ADP) by glycerol kinase and ATP. Glycerol-3- 5. Read the absorbance (A) of the samples and Standard, against the
phosphate (G3P) is then converted by glycerol phosphate dehydrogenase Blank. The colour is stable for at least 30 minutes.
(GPO) to dihydroxyacetone phosphate (DAP) and hydrogen peroxide (H 2O2).
In the last reaction, hydrogen peroxide (H2O2) reacts with 4-aminophenazone CALCULATIONS
(4-AP) and p-chlorophenol in presence of peroxidase (POD) to give a red ( A ) Sample
colored dye: x 200 (Standard conc.) = mg/dL triglycerides in the sample
( A ) S tan dard
LPL
Triglycerides + H2O Glycerol + free fatty acids Conversion factor: mg/dL x 0.0113= mmol/L.
Glycerol kinase
Glycerol + ATP G3P+ ADP QUALITY CONTROL
GPO Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures:
G3P + O2 DAP + H2O2 SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and 1002210).
POD If control values are found outside the defined range, check the instrument,
H2O2 + 4-AP + p-Chlorophenol Quinone + H2O
reagents and calibrator for problems.
The intensity of the color formed is proportional to the triglycerides Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective
1,2,3
concentration in the sample .
actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
CLINICAL SIGNIFICANCE
REFERENCE VALUES
Triglycerides are fats that provide energy for the cell.
Like cholesterol, they are delivered to the body’s cells by lipoproteins in the Men 40 – 160 mg/dL
blood. A diet with a lot of saturated fats or carbohydrates will raise the Women 35 – 135 mg/dL
triglyceride levels. The increases in serum triglycerides are relatively non-
These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its
specific. For example liver dysfunction resulting from hepatitis, extra
own reference range.
hepatic biliary obstruction or cirrhosis, diabetes mellitus is associated with
the increase 3,6,7. PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should Measuring range: From detection limit of 0.7 mg/dL to linearity limit of 1000
integrate clinical and other laboratory data. mg/dL.
If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/2 with
REAGENTS
NaCl 9 g/L and multiply the result by 2.
R1 GOOD pH 7.5 50 mmol/L
Precision:
Buffer p-Chlorophenol 2 mmol/L
Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
Lipoprotein lipase (LPL) 150000 U/L
Mean (mg/dL) 118 216 119 215
Glycerolkinase (GK) 500 U/L
R2 Glycerol-3-oxidasa (GPO) 2500 U/L SD 0.67 0.94 2.17 2.91
Enzymes Peroxidase (POD) 440 U/L CV (%) 0.60 0.43 1.83 1.36
4 – Aminophenazone (4-AP) 0.1 mmol/L Sensitivity: 1 mg/dL = 0.0012 A.
ATP 0.1 mmol/L Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show
Triglycerides aqueous primary standard 200 systematic differences when compared with other commercial reagents (x).
TRIGLYCERIDES CAL The results obtained using 50 samples were the following:
mg/dL
Correlation coefficient (r): 0.996.
PREPARATION Regression equation: y= 1.00x + 0.0743.
Working reagent (WR): Dissolve ( ) the contents of one vial R 2 The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
Enzymes into one bottle of R 1 Buffer.
INTERFERENCES
Ref: 1001310 Working reagent (WR): Dissolve ( ) the contents of one No interferences were observed with bilirubin up to 170 mol/L and
2
vial R 2 Enzymes in 10 mL of R 1 Buffer. hemoglobin up to 10 g/L .
A list of drugs and other interfering substances with cholesterol
Cap and mix gently to dissolve contents. 4, 5
determination has been reported by Young et al .
WR stability: 6 weeks at 2-8ºC or 1 week at room temperature (15-25ºC).
STORAGE AND STABILITY NOTES
All the components of the kit are stable until the expiration date on the 1. TRIGLYCERIDES CAL: Proceed carefully with this product because
label when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and due its nature it can get contamined easily.
contaminations prevented during their use. Do not use reagents over the 2. LCF (Lipid Clearing Factor) is integrated in the reagent.
expiration date. 3. Calibration with the aqueous Standard may cause a systematic error in
Signs of reagent deterioration: automatic procedures. In these cases, it is recommended to use a
- Presence of particles and turbidity. serum Calibrator.
- Blank absorbance (A) at 505 nm > 0.14. 4. Use clean disposable pipette tips for its dispensation.
ADDITIONAL EQUIPMENT 5. SPINREACT has instruction sheets for several automatic
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 505 nm. analyzers. Instructions for many of them are available on request.
- Matched cuvettes 1.0 cm light path. BIBLIOGRAPHY
- General laboratory equipment. 1. Buccolo G et al. Quantitative determination of serum triglycerides by use of enzimes. Clin
Chem 1973; 19 (5): 476-482.
SAMPLES 2. Fossati P et al. Clin. Chem 1982; 28(10): 2077-2080.
1 3. Kaplan A et al. Tryglycerides. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton
Serum or heparinized or EDTA plasma . Stability of the sample: 5 1984; 437 and Lipids 1194-1206.
days at 2-8ºC . 4. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
PROCEDURE 6. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
1. Assay conditions: 7. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . .. . . . . 505 nm (490-550)
PACKAGING
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm light path
Ref: 1001310 5 x 10 mL
Temperature . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC Ref: 1001311 10 x 20 mL
2. Adjust the instrument to zero with distilled water. Ref: 1001312 Cont. 10 x 50 mL
Ref: 1001313 4 x 125 mL
Ref: 1001314 4 x 250 mL

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