UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

B.C.T - I - Lab.
Extracción y purificación de ADN humano

GRUPO: 2451

Brígido Mazas Zurisadaí

Carreón García Moisés Antonio
De la Cruz Castañeda Ernesto
Equipo: 7
 OBJETIVOS
 Analizar el fundamento de la extracción de ADN.
 Extraer el ADN de una muestra de sangre humana utilizando el equipo de
reactivos “Wizard Genomic DNA purification”.
 Revisar las distintas aplicaciones que tiene la obtención de ADN.

RESULTADOS
1. Después de incubar la mezcla de lisis celular, centrifugar y desechar el
sobrenadante de ésta, el ADN tiene la apariencia de una resina blanquizca
y se encuentra en el fondo del tubo.

2. Se agregó solución de lisis de núcleos se formó una solución viscosa en la

cual se podían observar grumos por eso se puso a incubar a una
temperatura de 37º C.

3. Se agregó solución de precipitado de proteínas se observó en la solución

una formación de pequeños grumos. Se centrifugo a 350 rpm y se observó
en el fondo del tubo una pequeña plasta de un color café la cual son las
proteínas en una solución transparente en la que se encuentra el ADN.

4. Se transfirió el sobrenadante a un tuvo que contenía isopropanol para que

precipitara el ADN lo cual se pudo observar al formarse unas hebras que
tenían la apariencia de hilos de color blanco entrelazados unos con otros.

5. Se centrifugo a 3500 rpm durante 1 min y se observó en el fondo del tubo una
pequeña plasta de color blanco la cual era el ADN.

6. Después de quitar el sobrenadante y agregar etanol para el

secado del ADN se agregó solución rehidratante y se pudo
ver como el ADN recobraba una apariencia en solución.

Hebras de ADN
 ANÁLISIS DE RESULTADOS
El ADN se encuentra en las células de los seres vivos principalmente en el núcleo
de estas. Para el objetivo de esta práctica se empleó una muestra de sangre en la
cual se encontraban las células sanguíneas conocidos como eritrocitos y
leucocitos. Estos últimos contienen núcleo por lo tanto son las células que se
requieren para obtener el ADN.
Sin embargo el ADN se encuentra rodeado y constituido por otras moléculas que
se deben separar para poder ser estudiado, por lo tanto, se llevan a cabo
procesos de purificación del mismo.
Existen diferentes formas de llevar a cabo la purificación del ADN, aunque el
proceso en general es como sigue: 1,2

- Se deben romper las membranas de la célula lisándola. Las sales caotrópicas

ayudan a romper la estructura tridimensional de macromoléculas como las
proteínas o los ácidos nucleicos consiguiendo su desnaturalización. La adición de
un detergente como el SDS es necesaria a menudo para eliminar las membranas.
- Degradación de la fracción proteica asociada al ADN. Se deben separar las
proteínas con la finalidad de obtener solamente los ácidos nucleicos. Se consigue
mediante la adición de una proteasa. La fracción proteica puede precipitarse mejor
con la ayuda de sales como el acetato de amonio o el acetato sódico.
• Precipitación del ADN. El ADN es insoluble en alcohol, por lo que se puede
precipitar etanol frío o isopropanol y recuperar mediante una centrifugación. El
alcohol del sobrenadante se llevará las sales añadidas previamente.
• Lavado del pellet. Se realiza con alcohol frío volviendo a centrifugarse.
• Recuperación. El sedimento se puede resuspender en agua o tampón Tris tras
ser secado completamente.
- Finalmente, se comprueba la purificación del ADN aplicándole electroforesis de
ADN.

CONCLUSIONES
Se pudo observar como el ADN cambiaba su estado físico durante el proceso de
extracción y purificación del mismo y también se pudo obtener una cantidad
considerable del ADN el cual se utilizara en su cuantificación y la electroforesis
donde se podrá comprobar el grado de pureza. Dado que en esta práctica todavía
no se puede medir cuantitativamente si los resultados finales son correctos en la
extracción y purificación nos guiamos conforme a sus cambios físicos del ADN y
ya que se presentaron los mismos cambios en el experimento conforme a lo que la
teoría describe se puede decir que el experimento se llevó a cabo con éxito lo cual
se podrá rectificar con las siguientes prácticas de cuantificación y electroforesis del
ADN.

REFERENCIAS
1.- http://www.microbial-systems.com/web/docs/Newsletter_Microbial_03.pdf
2.- https://www.quiminet.com/articulos/conozca-el-proceso-de-purificacion-del-adn-
2678216.htm
 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

B.C.T - I - Laboratorio

Cuantificación y electroforesis de ADN humano

GRUPO: 2451

Brígido Mazas Zurisadaí

Carreón García Moisés Antonio
De la Cruz Castañeda Ernesto
Equipo: 7

Fecha de entrega 03/05/2017

 OBJETIVOS

 Cuantificar el ADN de una muestra problema por el método

espectrofotométrico, utilizando un biofotómetro
 Determinar la pureza del ADN extraído de la practica anterior
 Realizar la electroforesis de ADN extraído, purificado y cuantificado.
 Analizar las bandas obtenidas en el gel.

RESULTADOS

Concentración de ADN

ųg
Concentración de ADN ( mL )= Absorbanciade la muestra a 260 nm∗FD∗50ųg /mL
ųg
Concentración de ADN (
mL )
=84.5 ųg/mL

Pureza del ADN

Pureza ADN =absorbancia 260nm/absorbancia 280 nm
Pureza ADN =1.09
Electroforesis

Equipo 7

ANALISIS DE RESULTADOS
Cuantificación de ADN

La concentración de ADN resultante fue de 84.5µg/mol y nos indica que hay

presencia de doble cadena ya que esta tiene una concentración aproximada de
50µg/mol, en cuanto a las lecturas que arrojó el biofotometro se puede decir que
no se purifico totalmente el ADN ya que está por debajo del rango establecido (1.7
- 2) esto se debe a que el valor a 280 nm es alto, esto se puede dar por que están
presentes varias sustancias como lo puede ser proteínas ya que estas absorben a
esta longitud de onda más específico el grupo r de la proteína ( fenilalanina,
triptófano, tirosina).
Electroforesis de ADN

En este caso no se puede tener una buena explicación de la electroforesis ya que

el marcador de peso molecular no es el adecuado y las bandas de las muestras
quedan fuera del rango, lo que podemos apreciar es que hay varias muestras que
contienen bastante ADN ya que se nota una mancha grande y en general la
aplicación de estas fue buena.

CONCLUSIONES