Técnicas para o

estudo dos micro-

organismos

Prof. Dr. Plínio Lázaro Faleiro Naves

Acadêmicas: Fernanda de Sousa Fernandes

Raquel Ferreira Naves
 Meios de cultura
• Meio de cultura - conjunto de
nutrientes necessários a
multiplicação ou manutenção dos
micro-organismos.

• O que é um inóculo?

• O que é uma cultura?

Classificação dos meios de cultura
Definida por alguns critérios:
• Estado físico

• Composição

• Utilização

Atendimento das exigências nutricionais

Os nutrientes devem ser fornecidos de forma
e proporção adequadas.
Classificação dos meios de cultura
De acordo com o seu estado físico:

a) Sólidos. São aqueles que contem um agente

solidificante (ágar). São preparados em placas
de Petri ou em tubos (superfície inclinada).

b) Líquidos. São denominados caldos e são

preparados em tubos ou frascos Erlenmeyers.

c) Semi-sólidos. Consistência intermediária.

Meios de cultura - consistência
Ágar 1,5% (sólido) – 0,8% (semi-sólido)
Classificação dos meios de cultura
De acordo com a sua composição:

• MEIO DEFINIDO: Composição química

conhecida
• MEIO COMPLEXO: Composição química
exata não conhecida (composto por
nutrientes como extrato de levedura, de
carne ou de plantas)
Classificação dos meios de cultura
 Classificação dos meios de cultura
Utilização:

a) Meios de uso geral. Permitem o desenvolvimento de uma

grande variedade de micro-organismos.
Ex: Meio PCA

b) Meios de enriquecimento. Favorecem o crescimento dos

micro-organismos presentes na amostra.
Ex: caldo BHI

c) Meios seletivos. Propiciam o crescimento de um tipo ou

grupos de micro-organismos, inibindo o desenvolvimento dos
demais.
Ex: Agar Sabouraud dextrose, pH 5,6, é utilizado no crescimento de fungos que são
favorecidos, em relação as bactérias, pelo baixo pH e pela presença de antibióticos
 Classificação dos meios de cultura
Utilização:

d) Meios diferenciais. Permitem a detecção de características

fenotípicas de determinados micro-organismos e auxiliam na
sua identificação bioquímica.
Ex: meio ágar-sangue, utilizado para a identificação de bactérias capazes de lisar
hemácias

e) Meios redutores: meios com reagentes, como o tioglicolato de

sódio, que é capaz de se combinar com o oxigênio dissolvido
eliminando este elemento do meio de cultura.
Ex: Caldo tioglicolato, específico para o desenvolvimento de micro-organismos
anaeróbios
 Preparo de meios de cultura

• Os meios de cultura devem ser preparados e

esterilizados seguindo procedimentos básicos.
 Técnicas de assepsia
As técnicas de assepsia impedem a contaminação
de instrumentos e meios de cultura antes e
durante o seu manuseio.
Métodos de
inoculação
Métodos de inoculação

• Meios sólidos podem ser

inoculados de muitas maneiras,
dependendo do objetivo
específico.
Métodos de inoculação em meios
sólidos
• Semeaduras para obtenção de
colônias isoladas ou semeadura
em estrias.
Métodos de inoculação em meios
sólidos
• Semeadura em profundidade e
superfície.
 Métodos de inoculação em meios
sólidos
• Semeadura com espalhamento em superfície.
Métodos de inoculação em meios
sólidos
• Semeadura em camada.
 Métodos de inoculação em meios sólidos
• Semeadura por derramamento técnica do Pour-Plate.
Culturas puras
• A partir de uma mistura de
organismos podemos preparar
culturas puras, desde que
utilizemos técnicas adequadas.
 Métodos utilizados para
quantificar os micro-organismos
• Existem vários métodos -
número de micro-organismos
em uma cultura ou suspensão.

– DIRETOS
– INDIRETOS
 Métodos utilizados para quantificar
os micro-organismos
 Estimar o número de células
 Quantificar componentes celulares ou atividade
metabólica
 Medir o peso seco

QUANTIFICAÇÃO DIRETA:
- CONTAGEM DE CÉLULAS TOTAIS
- CONTAGEM DE CÉLULAS VIÁVEIS

QUANTIFICAÇÃO INDIRETA:
- TURBIDIMETRIA
- ATIVIDADE METABÓLICA
- PESO SECO
 Contagem de células totais
CONTAGEM DIRETA AO MICROSCÓPIO - um volume conhecido de suspensão
bacteriana é colocado em uma área definida da lâmina de microscópio.

 Vantagens: método rápido e fácil

Não distingue as células vivas das
mortas
 Desvantagens Pode-se omitir células pequenas
Células móveis precisam ser
imobilizadas
Entre outras.
 Contagem de células viáveis
 CONTAGEM EM PLACAS
DE PETRI
 Vantagens: método fiável e
relativamente preciso

 Desvantagens: Laborioso

São empregadas várias diluições decimais

porque é difícil prever o número de
viáveis.
É contada a placa com 30 a 300
colônias
 Turbidimetria
As células dispersam a luz e quanto mais células mais turvo é o
meio
Pode ser medida com um espectrofotômetro

A quantidade de luz que chega ao detector é inversamente

proporcional ao nº. de bactérias

Quanto > o nº. de bactérias < a quantidade de luz que é transmitida

O uso da turbidimetria exige a construção de uma curva padrão

 Atividade metabólica
Indicadores metabólicos

Corantes que distinguem enzimas ou reações bioquímicas

próprias das células viáveis
Sua quantificação permite estimar indiretamente o número
de células
Leituras colorimétricas, de fluorescência, etc.
 Atividade metabólica

Bactérias planctônicas (CMI – AB)

Ec1
Ec9156 Resazurina
Ec9165 Indicador de viabilidade celular
Ec9176 por oxidação-redução do meio
Ec9180 de cultivo
Ec9182
EcATCC
branco
512 256 128 64 32 16 8 4 2 1 C+
Bactérias associadas a biofilme (CMIB – AB)

Ec1
Ec9156
Meio de cultivo oxidado = Ec9165
sem crescimento bacteriano Ec9176
Ec9180
Meio de cultivo reduzido = Ec9182
crescimento bacteriano EcATCC
branco
512 256 128 64 32 16 8 4 2 1 C+
 Peso seco

Peso seco total das próprias células – filtração, secagem e pesagem

Peso de algum componente celular – extração, secagem e pesagem

PESO SECO

- principalmente para fungos filamentosos

a) fungo é removido do meio por filtração

b) seco em dessecador
c) posterior pesado
Coloração de micro-organismos
Coloração de micro-organismos
Coloração de micro-organismos
Coloração de micro-organismos