Tema 8.

Biología de la Diferenciación Celular

Envejecimiento y muerte celular. Tipos de muerte

celular: Necrosis y apoptosis. Funciones de la
muerte celular programada. Modelos y regulación
de la muerte celular programada
 Tema 8. Biología de la Diferenciación Celular

1. Introducción

2. Senescencia celular. La telomerasa

3. Muerte celular. Tipos de muerte celular: Necrosis y

apoptosis

4. Regulación de la apoptosis. Caspasas

5. Receptores implicados en la muerte celular y activación

de caspasas

6. Señalización de la supervivencia celular

1. Introducción
Nacimiento, linaje y muerte celular
2. Senescencia celular. La telomerasa
 Senescencia

Figure 18.34. Children with progeria. Although less than 8 years old, the child on
the right has a phenotype similar to that of an aged person. The hair loss, fat
distribution, and transparency of the skin are characteristic of the normal human
aging pattern seen in elderly adults. (Gilbert, 2003).
 Envejecimiento: Criterios

1. Es universal:
Afecta por igual a todas las células diferenciadas,
tejidos, órganos y organismos

2. Es progresivo:
Ocurre en pequeños cambios continuos

3. Es intrínseco a la célula:
No hay causa externa aparente

4. Es degenerativo
Tipos de células de los animales pluricelulares

1. Células post-mitóticas (no se dividen)

Ejemplos: neuronas, células musculares estriadas

2. Células capaces de dividirse toda la vida pero que normalmente

lo hacen muy lentamente ya que viven mucho tiempo
Ejemplos: Hepatocitos, células renales, células del cartílago

3. Células que se dividen rápidamente pero que viven poco tiempo

y deben ser reemplazadas continuamente a partir de células
madre
Ejemplos: Linfocitos, hematíes, células epiteliales
 Manifestaciones del envejecimiento

1. Alteraciones en la morfología celular

Ejemplo: acumulación de cuerpos de lipofuscina

2. Alteraciones en diversas funciones celulares

3. Finalmente, la muerte celular

Características morfológicas del envejecimiento

- Cuerpos de lipofuscina

- Fragmentación del retículo

endoplásmico

- Degeneración del citoesqueleto

- Daños en mitocondrias

- Acumulación de lípidos

- Etc.
Teoría actualizada de la “catástrofe por errores”

Desgaste de moléculas celulares

- Utilización
- Incremento de temperatura
- Radicales libres
- Etc.
 Teoría actualizada de la “catástrofe por errores”

1. La redundancia
Normalmente hay un exceso de moléculas que realizan la misma
función, por lo que pérdidas limitadas pueden ser solventadas por la
célula

2. La reparación
En las células existen diversos sistemas que permiten reparar lesiones
en el DNA

3. El recambio
Continuamente las proteínas celulares están siendo eliminadas
(mecanismos de degradación de proteínas) y vueltas a sintetizar en
los ribosomas
Los telómeros y la telomerasa
Cromosomas humanos en metafase

Cromátidas

Centrómero

Cinetócoro

Telómeros
TTAGGG

Histonas
11.3-21.0 kDa
Figure 17-26. Scanning electron micrograph of
human mitotic chromosome. (Alberts et al., 2008).
Envejecimiento celular: la telomerasa
 Telomeres: high order complexes of DNA-binding
proteins and telomeric DNA repeats
Telomerase

Protect chromosome ends from fusions and

from being recognized as damaged DNA

Telomere capping requires:

- telomere binding proteins UNCAPPED
- minimal length of telomeric repeats CAPPED

Rap 1
telomerase Tin 2

RNA component: TTAGGG

TRF 1
Catalytic subunit: reverse transcriptase
nucleosomes TRF 2
 - telomerase activity
somatic cells

telomeric loss

critically short + telomerase activity

telomeres

senescence
NHEJ-mediated
telomere fusions elongation/capping

cancer
of short telomeres

activation of p53

Proliferation stop and/or apoptosis immortality

+ telomerase activity

germinal cells stem cells

proliferation
Q-FISH in metaphases

(Cy-3-(AATCCC)3) + DAPI
 Are differences in cell behavior due to differential
telomere length in adult vs. embryonic NSCs?

wild-type G4 Terc-/-

L5178Y L5178Y-S

Q-FISH on fixed interphase cells (Cy-3-(AATCCC)3) + DAPI

3. Muerte celular. Tipos de muerte celular:

Necrosis y apoptosis
 APOPTOSIS

NECROSIS

NECROSIS APOPTOSIS
 Tipos de muerte celular

Apoptosis Necrosis

Figure 18-1. Two distinct forms of cell death. (Alberts et al., 2008).
 Apoptosis en la diferenciación durante el desarrollo
Metamorfosis de anfibios
Figure 18-3. Apoptosis during the
metamorphosis of a tadpole into a
frog. As a tadpole changes into a frog,
the cells in the tadpole tail are induced
to undergo apoptosis; as a
consequence, the tail is lost. All the
changes that occur during
metamorphosis, including the
induction of apoptosis in the tail, are
stimulated by an increase in thyroid
hormone in the blood. (Alberts et al.,
2008).

Desaparición de las membranas interdigitales

Figure 18-2. Sculpting the digits in

the developing mouse paw by
apoptosis. (A) The paw in this mouse
embryo has been stained with a dye
that specifically labels cells that have
undergone apoptosis. The apoptotic
cells appear as bright green dots
between the developing digits. (B)
This interdigital cell death eliminates
the tissue between the developing
digits, as seen one day later, when
few, if any, apoptotic cells can be
seen. (Alberts et al., 2008).
 Apoptosis durante el desarrollo

During the seventh and the eighth weeks of human

development the digits of the hand become apparent
 Apoptosis durante el desarrollo

Development of the feet is like that of the hands, but in

the human it starts approximately 3-4 days later
Unión de las neurotrofinas a los receptores Trk
Apoptosis en el desarrollo del sistema nervioso

Hipótesis neurotrófica
 Apoptosis

Ratón mutante en caspasa-9

Bloqueo de la apoptosis

Figure 6.28. Disruption of normal brain development

by blocking apoptosis. In mice in which caspase-9 or
Apaf-1 has been knocked out, normal neural apoptosis
fails to occur. In caspase 9-deficient mice, the
overproliferation of brain neurons is obvious on a
morphological level. (A) 16-day embryonic wild-type
mouse. (B) Caspase 9-knockout mouse of the same
age. The enlarged brain protrudes above the face, and
the limbs are still webbed. This effect is confirmed by
cross-sections through the forebrain at day 13.5 in (C)
a normal mouse and (D) a caspase 9-knockout mouse.
The knockout exhibits thickened ventricle walls and
the near-obliteration of the ventricles. (From Kuida et
al. 1998.) (Gilbert, 2003).
4. Regulación de la apoptosis. Caspasas
Características ultraestructurales de la apoptosis
 Muerte celular por apoptosis

Célula normal Célula apoptótica

 Neuronas granulares del cerebelo
microglia células epiteliales
astrocitos

* sanas
Parnaik et al., 2000 apoptóticas
 Marcadores de apoptosis

TUNEL

Figure 18-4. Markers of apoptosis. (Alberts et al., 2008). Tdt-mediated dUDP nick end labeling
 “Death ladder”
Hidrólisis internucleosómica del DNA

Endonucleasa
 Compactación del núcleo: hidrólisis de laminas

DAPI

PICNOSIS
Zeiosis (blebbing)
Eliminación de las células muertas por apoptosis
- células fagocitarias “profesionales”: macrófagos
- células adyacentes
Nervio óptico:
lectina de Griffonia + ioduro de propidio

Cerebelo:
marcador glía de Bergmann + DAPI
Caenorhabditis elegans: el modelo genético

Sidney Brenner
Robert Horvitz
John Sulston
Premios Nobel de Medicina o Fisiología, 2002
 Caenorhabditis elegans: el modelo genético
• Reconocimiento del proceso de muerte celular: 131 de las 1090
células somáticas del nemátodo están destinadas a morir durante
el desarrollo (1976)
• Generación del primer mutante cell death abnormal (ced) (1983)

MUERTE CELULAR PROGRAMADA

Cribado genético en C. elegans para mutantes
defectivos en muerte celular
131 células mueren en el desarrollo normal

genes pérdida de función ganancia de función

egl-1 131 sobreviven

ced-3 131 sobreviven

ced-4 131 sobreviven

ced-9 apoptosis masiva 131 sobreviven

- especificidad del proceso

- egl-1, ced-3 y ced-4 son genes pro-apoptóticos
- ced-9 es un supresor de la muerte celular
Mutaciones en ced-3 bloquean la apoptosis en C. elegans

Mutaciones en el gen ced-1 de

C. elegans y acumulación de
células muertas que aparecen
como cuerpos altamente
refráctiles (flechas)

Mutaciones en los genes ced-1

y ced-3 de C. elegans que
muestran la ausencia de
apoptosis (no aparición de
cuerpos refráctiles)

La proteína CED-3 es
requerida para la apoptosis
 Elementos reguladores y efectores de la apoptosis

Regulador Adaptador Efector

caspasa 3

Apaf-1: apoptotic protease activating factor 1

 Activación de caspasas

Tetrámero constituido por

dos subunidades grandes
Figure 18-5a. Procaspase activation during apoptosis. (Alberts et al., 2008).
y dos pequeñas
 Activación de
caspasas

Figure 18-5b. Procaspase activation during

apoptosis. (Alberts et al., 2008).
 Caspasas humanas

Caspasas implicadas en inflamación Caspasas 1, 4, 5

Caspasas implicadas en apoptosis

Æ Caspasas iniciadoras Caspasas 2, 8, 9, 10

Æ Caspasas ejecutoras Caspasas 3, 6, 7

Expresión de caspasa-3 en el epitelio intestinal
Apoptosoma

Apaf-1

cit c

procaspasa-9
Mitocondrias y citocromo c

Ultraestructura de las mitocondrias

 Apoptosis
Liberación del citocromo
c de la mitocondria

Figure 18-7. Release of cytochrome c from

mitochondria during apoptosis. (Alberts et al.,
2008).
 Familia Bcl-2

Anti-apoptóticos
Bcl-2

Bcl-XL

Pro-apoptóticos
Bad

Bax

Bak

Bid
 Niveles de control en apoptosis
CASCADA DE AMPLIFICACIÓN ANTÍDOTOS NATURALES
(ASEGURA EL PROCESO) (REFUERZAN EL PROCESO)

Familia Bcl-2: pro-apoptóticos Familia Bcl-2: anti-apoptóticos

Salida de citocromo c
Activación de caspasas
(potenciación)
IAPs (inhibitors-of-apoptosis)
celulares y víricas
Protegen de activaciones
Inhibidores de IAP: Smac o DIABLO APOPTOSIS de caspasas espúreas
Interaccionan físicamente con IAPs
Salen de la mitocondria
5. Receptores implicados en la muerte celular y

activación de caspasas
 Receptores
implicados en la
muerte celular

Figure 13.50. Cell death receptors Binding of

ligand to the Fas receptor induces apoptosis by
direct activation of caspase-8. Fas ligand consists
of three polypeptide chains, so its binding
induces receptor trimerization. Caspase-8 bound
to the receptor via adaptor molecules is then
Bid
activated by autocleavage, leading to activation
of downstream caspases and cell death. (Cooper,
2004).
6. Señalización de la supervivencia celular
Privación de señales tróficas
(trophic deprivation o withdrawal)
 La vía PI3-K y la supervivencia celular

Figure 13.51. The PI 3-kinase pathway and cell survival Survival factors such as NGF activate
receptor protein-tyrosine kinases, leading to activation of PI 3-kinase and formation of PIP3. PIP3
recruits the protein kinase Akt to the plasma membrane where it is activated as a result of
phosphorylation by PDK. Akt then appears to phosphorylate a number of proteins that contribute
to cell survival. The targets of Akt that have been implicated in suppression of apoptosis include
the Bcl-2 family member Bad, caspase-9, several transcription factors, and the protein kinase
GSK-3, which affects cell metabolism and protein synthesis. (Cooper, 2004).
Modelos de las vías intracelulares que llevan a la apoptosis o a la
supervivencia celular por factores tróficos en mamíferos (I)

Figure 21-41. Current models of the intracellular

pathways leading to cell death by apoptosis or to trophic
factor mediated cell survival in mammalian cells. The
details of these pathways in any given cell type are not yet
known. (a) In the absence of a trophic factor. Bad, a soluble
pro-apoptotic protein, binds to the anti-apoptotic proteins
Bcl-2 and Bcl-xl, which are inserted into the mitochondrial
membrane. Bad binding prevents the anti-apoptotic proteins
from interacting with Bax, a membrane-bound pro-apoptotic
protein. As a consequence, Bax forms homo-oligomeric
channels in the membrane that mediate ion flux. Through an
as-yet unknown mechanism, this leads to the release of
cytochrome c from the space between the inner and outer
mitochondrial membrane. Cytochrome c then binds to the
adapter protein Apaf-1, which in turn promotes a caspase
cascade leading to cell death. (b) In the presence of a trophic
factor such as NGF. In some cells, binding of trophic factors
stimulates PI-3 kinase activity, leading to activation of the
downstream kinase Akt, which phosphorylates Bad.
Phosphorylated Bad then forms a complex with the 14 - 3 - 3
protein. With Bad sequestered in the cytosol, the
antiapoptotic Bcl-2/Bcl-xl proteins can inhibit the activity of
Bax, thereby preventing the release of cytochrome c and
activation of the caspase cascade. (Lodish et al., 2007).
Modelos de las vías intracelulares que llevan a la apoptosis o a la
supervivencia celular por factores tróficos en mamíferos (II)

Figure 21-41. Current models of the intracellular

pathways leading to cell death by apoptosis or to trophic
factor mediated cell survival in mammalian cells. The
details of these pathways in any given cell type are not yet
known. (a) In the absence of a trophic factor. Bad, a soluble
pro-apoptotic protein, binds to the anti-apoptotic proteins
Bcl-2 and Bcl-xl, which are inserted into the mitochondrial
membrane. Bad binding prevents the anti-apoptotic proteins
from interacting with Bax, a membrane-bound pro-apoptotic
protein. As a consequence, Bax forms homo-oligomeric
channels in the membrane that mediate ion flux. Through an
as-yet unknown mechanism, this leads to the release of
cytochrome c from the space between the inner and outer
mitochondrial membrane. Cytochrome c then binds to the
adapter protein Apaf-1, which in turn promotes a caspase
cascade leading to cell death. (b) In the presence of a trophic
factor such as NGF. In some cells, binding of trophic factors
stimulates PI-3 kinase activity, leading to activation of the
downstream kinase Akt, which phosphorylates Bad.
Phosphorylated Bad then forms a complex with the 14 - 3 - 3
protein. With Bad sequestered in the cytosol, the
antiapoptotic Bcl-2/Bcl-xl proteins can inhibit the activity of
Bax, thereby preventing the release of cytochrome c and
activation of the caspase cascade. (Lodish et al., 2007).