UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA

CENTRO UNIVERSITARIO DE LOS LAGOS

DEPARTAMENTO DE CIENCIA DE LA TIERRA Y DE
LA VIDA

BIOQUIMICA2018-A

PROBLEMARIO: ENZIMAS

PRESENTADO POR: MARIA DE JESUS VILLALOBOS TAVARES

JOSE DONALDO CONTRERAS MARES
Naomi Patricia Gutierrez Cornejo

PRESENTADO A: DR.C LUIS ANTONIO PAEZ RIBEROS

LAGOS DE MORENO JAL

20/02/2018
ECUACIÓNDE MICHAELIS-MENTEN

Considera una enzima industrial importante, la cual cataliza la conversión de un sustrato

para formar un producto con un valor agregado mayor. La enzima sigue el siguiente
mecanismo:

1. Un análisis inicial de las tasas de reacción para la reacción en solución, con E0 = 0.10 µM
y varias concentraciones de sustrato S0, produce los siguientes parámetros de la ecuación
de Michaelis-Menten:
Vmax = 0.60 µM/s; KM = 80 µM.

Un tipo de experimento diferente indica que la constante de la tasa de asociación, k1, es

k1 = 2.0 x 106 M-1s-1 (2.0 µM-1s-1).

Estima el valor de k2 y k-1.

Solución:
De la definición de Vmax tenemos:
Vmax  k 2 E 0 


k
Vmax 0.6  µM/s
  6  s-1

E 
2 0
0.1 µM

De la definición de la constante de Michaelis-Menten, KM, tenemos:

k  k2
K M  1
k1

   
k1  K M k1  k 2  80  µM 2  µM 1s1  6  s1  154  s1
2. En experimentos de laboratorio, se utilizaron dos decarboxilasas (A y B) obtenidas
de diferente microorganismo (ver tabla). Decida cual enzima demuestra un mayor
coeficiente de especificidad, (V max/ K m), recuerde que entre mayor sea el valor del
coeficiente de especificidad más específica es la enzima por el substrato.

Enzima A Enzima B
[S] Velocidad [S] Velocidad
(mM) (M/min) (mM) (M/min)
0.0002 0.3373 0.005 0.3962
0.0002 0.3364 0.005 0.3857
0.0005 0.6945 0.01 0.6163
0.0005 0.6957 0.01 0.6413
0.001 1.0764 0.05 1.5606
0.001 1.1407 0.05 1.5689
0.005 1.9636 0.1 1.9862
0.005 1.7706 0.1 1.7909
0.01 2.0641 0.25 2.2011
0.01 2.0751 0.25 2.2047

Solución:
3.5000
y = 0.5081x + 0.4224
3.0000 R² = 0.999 Vmax =
KM =
2.5000

2.0000
-1
1.5000 Vmax/KM = 1.968 min

1.0000

0.5000

0.0000

3.0000

y = 10.814x + 0.4323
2.5000 R² = 0.9967 Vmax =
KM =
2.0000

1.5000 -1
Vmax/KM = 0.092 min
1.0000

0.5000

0.0000
0.05 0.1 0.15 0.2 0.25
 La Enzima A es más específica

3. Para un experimento de una reacción catalizada enzimáticamente, se utilizó una

concentración inicial de sustrato 20 M y una concentración de enzima 5 nM,
obteniéndose la siguiente curva de progreso:

Tiempo Sustrato
(min) (M)
0 20.00
2 18.32
4 16.64
6 14.97
8 13.30
10 11.63
12 9.96
14 8.31
16 6.66
18 5.02
20 3.40

Calcula la constante de especificidad, [=] (M min)-1 definida como:

k
  cat
KM
Solución:

Utilizando la ecuación 

S 0  S   K  V t
S  M max
S 
ln 0
ln 0
S S


y transformando los datos para obtener los ejes adecuados

ln(So/S) x y
0.087685 22.8089171 19.1482267
0.18369012 21.7758032 18.2705913
0.28974888 20.7075863 17.3632081
0.40819718 19.5983716 16.4210948
0.5422881 18.4403825 15.4376837
0.69674291 17.2229954 14.4040112
0.87878828 15.9310272 13.3072822
1.10030511 14.5414212 12.128099
1.38291271 13.0160059 10.8344243
1.77265446 11.2825147 9.36582479

25
(So-S)/[ln(So/S)]

20
15
10

25

Vmax = 0.8488 M/min

Km = 0.2134 M
Vmax 0.8488M  min 1
k    169.76 min 1
cat
Et 0.005M

kcat 169.76 min 1

    795.5M 1 min 1
KM 0.2134M

4. En un experimento se midió la tasa inicial de una reacción enzimática, v, a varias

concentraciones de substrato [S]. La concentración de la enzima es 3 nM. Se graficó
[S]/v versus [S] y se observó una línea recta en la cual el intercepto-y es 590.6 s y la
pendiente es 0.3684 s M-1. ¿Cuál es el valor de KM y el de Vmax para esta reacción
enzimática? ¿Cuál es el valor de kcat para esta enzima?

Solución:
Se observa que se utilizó la ecuación de Hanes-Woolf [S]/v
S   1 S  K M
v Vmax Vmax
Los datos del problema son: KM/Vmax 1/Vmax
m = 0.3684 s M-1

-KM
[S]
 b = 590.6 s 1

0.3684
Vmax  2.7144  M  s 1

K M  590.6 Vmax  590.6  2.7144  1,603.12  M

Sabemos que Vmax = kcat [E]t, por lo tanto
V 2.7144  M  s 1
k  max   904.8  s 1
cat
Et 0.003   M

5. Calcule la concentración de sustrato necesaria para observar un 75% de la

velocidad máxima de una reacción enzimática con una constante de afinidad, KM,
3 M.

Solución:
Re-arreglando la ecuación de Michaelis-Menten

v  S 
 


 Vmax K M S
despejando [S] tenemos
3  M
S  KM
  9  M
 1   1 
 1



 1  
 v /Vmax  0.75 
 6.Calcule vi y el grado de inhibición causado por un inhibidor competitivo
bajo las siguientes condiciones:
a). [S]=2x10-3 M y [I]=2x10-3 M
b). [S]=4x10-4 M y [I]=2x10-3 M
c). [S]=7.5x10-3 M y [I]=1x10-5 M
Asume que KM=2x10-3 M, KI=1.5x10-4 M y Vmax=270 nM/min.

Solución:
En cada inciso calculamos la velocidad sin (v0) y con (vi) efectos de inhibición
a).
V S   270nM / min  2x10 6 nM  135nM / min
v  max  
  

K M  S  2x106 nM  2x106 nM
0

V S 
v  max 
 270nM / min  2x10 6 nM   17.61nM / min  
  I
 
i
K 1    S 2x10 nM 1 2x106 nM 
6

  2x106nM 
   
 1.5x105 nM 
M
 K i  
 vi   17.61nM / min 
 


i%  1   100  1  135nM / min  100  86.96%

v
 0   
270nM / min4x10 nM 
b).
Vmax S 
v  5
 45nM / min

K M  S  2x106 nM  4x105 nM
0

V S 
v  max 
270nM / min 4x105 nM  
 3.72nM / min
i 
K 1    I  S 2x106 nM1 2x10 6
nM 
  4x105nM
   
M
 K i    1.5x105 nM 
 vi   3.72nM / min 
 


i%  1   100  1  45nM / min  100  91.74%

v
 0   
c).
V S  270nM / min 7.5x10 6 nM 


v0  K max S   2x10 nM  7.5x10 nM  213.16nM / min

M 6 6


V S 
v  max 
 270nM / min 7.5x10 6 nM   210.21nM / min
  I i
 
 K 1    S  2x10 nM1 1x10 nM
4

  7.5x106nM

  
6

 1.5x10 nM 
M 5
 Ki 
 vi   210.21nM / min 
 
 

i%  1   100  1  213.16nM / min  100  1.38%

v
 0   
7¿Qué concentración de inhibidor competitivo se requiere para producir 75% de
inhibición a una concentración de sustrato de 1.5x10-3 M si KM=2.9x10-4 M y KI=2x10-5 M?
(b) ¿A qué concentración debe incrementarse el sustrato para re-establecer la velocidad
al valor original sin inhibición?

Solución:
a). La fórmula del grado de inhibición para inhibición competitiva es:
100I
i%   S  

 K i 1    I 
  K M 
Despejando [I]

i K 1 S  752x10 5 M 11.5x103 M 




 2.9x104 M 
% I  K 
I    M      3.7 x104 M 

100  i% 100  75

b)
v Sin inhibición Con inhibición
(Ec. Michaelis) (Inhibidor Competitivo)




 v0 vi
 v0 = vi










[S]0 [S]i [S]

De la gráfica observamos que v0 = vi , igualando las ecuaciones de velocidad tenemos:

Vmax S 0 Vmax S i

K M  S 0  I  
 K M 1    S i
  K I 
Despejando [S]i tenemos
  I 
 
S   S  1   1.5x10 3 M 1  3.7x104 M   2.93x102 M
 
0   
2x105 M 
i
 K I 


8.Calcule KI para un inhibidor no-competitivo si una concentración de inhibidor

[I]=2x10-4 M produce 75% de inhibición de una reacción catalizada
enzimáticamente.

Solución:
Para un inhibidor no-competitivo el grado de inhibición está dado por
100I 
i% 
K i  I 
despejando KI  100    100  5
4
 


KI  I  1  2x10 M  1  6.67x10 M 
 i%   75 

9.Calcule (a) la velocidad y (b) el grado de inhibición de una reacción catalizada

enzimáticamente en presencia de 6x10-4 M de sustrato (KM=1x10-3 M) y 2.5x10-4 M
de un inhibidor no-competitivo (KI=3x10-5 M). La Vmax=515 nM/min.

Solución: 

 -7

v0  Vmax S   5.15x10 M / min 6x10 M  1.93x10-7 M / min
4
 

KM  S  1x10-3 M  6x104 M

Vmax S  5.15x107 M 6x10 4

M 
 I  


 2.5x104 M  

1  K  1  3x105 M 

v   I 
   2.07x108 M / min
KM  S  1x103 M  6x104 M
i

   -8

i%  1  i v 100  1  2.07x10 M / min  100  89.29%
 v   
1.93x10 M / min 
-7

 0   


10.Considere una reacción enzimática, en presencia de un inhibidor competitivo.

La constante de Michaelis (KM) es 3.5 x 10-4 M, la constante de inhibición (Ki) es
1.7 x 10-5 M y la concentración del inhibidor [I] es 7.5 x 10-5 M. Calcule la
concentración de sustrato a la cual la velocidad observada en presencia del
inhibidor es 3/4 de la velocidad observada sin inhibición, es decir, una actividad
relativa igual a 0.75

Solución:
Para un inhibidor competitivo la actividad relativa está dada por:
K M  S
a  I    ; despejando [S]
K M 1    S 
 K i 
  I  
a  KM 1    K M 
 Ki 
S   4.28x103  M
1  a

11.En un experimento se midió la tasa inicial de una reacción enzimática, v, a

varias concentraciones de substrato [S]. La concentración de la enzima es 10 nM.
Se graficó 1/v versus 1/[S] y se observó una línea recta en la cual el intercepto-y
es 0.005 nM-1 seg y la pendiente es 200 seg. ¿Cuál es el valor de KM y el de Vmax
para esta reacción enzimática? ¿Cuál es el valor de kcat para esta enzima?
¿Determine el coeficiente de especificidad? 30 M de un inhibidor, E, es
adicionado y se observó que el intercepto- y es 0.0065 nM-1 seg y la pendiente
es 260 seg. ¿Qué tipo de inhibición se observó?
¿Cuál es el valor de Ki para el inhibidor con esta enzima?

Solución:
Se observa que se utilizó la ecuación de Lineweaver-Burk
1 KM 1 1
 
v Vmax S  Vmax
1/v

1/Vmax KM /V max

Los datos del problema son:

m = 200 s -1/KM
1/[S]
b = 0.005 s nM-1
1
V   200  nM  s 1
max
0.005
K M  200 Vmax  200  200  40,000  nM
Sabemos que Vmax = kcat [E]t, por lo tanto
V 200  nM  s 1 1

E t
kcat  max
  20  s
 10  nM

El coeficiente de especificidad es:

20  s 1
  cat 
k
 0.0005  s 1 nM 1
K M 40,000  nM
En presencia del inhibidor tenemos
m = 260 s
b = 0.0065 s nM-1

1
app
V max   153.846  nM  s 1
0.0065
K Mapp  260 V max  260 153.846  40,000  nM
 Se observa que: K  K app , y V  V app
M M max max

Por lo tanto se trata de una Inhibición no competitiva, entonces

Vmax
 I  
app
Vmax

 1  
  K i 

Despejando Ki

 I  30,000
Ki    100,000  nM
V max 200
1 1
app
V max 153.846




12.Para una reacción enzimática en presencia de un inhibidor competitivo, la

velocidad de reacción observada a una concentración de sustrato [S]i = 1.5 x 10-3
M es igual a la velocidad de reacción sin el inhibidor a una concentración de
sustrato [S]0 = 7.69 x 10- 5 M. Calcule la constante de inhibición, Ki, del inhibidor
si su concentración [I] = 3.7 x10-4 M.

Solución:

Para un inhibidor competitivo la relación [S]0 a [S]i para observar una misma velocidad es:
 I  
 S i  S 0 1  
  K i 

Despejando Ki

 Ki  I   2x105 M
 4


3.7x10 M
3

S i 1.5x10 M
1 1
S 0 7.69x105 M
13. Utilice los siguientes datos experimentales para obtener la concentración de sustrato
[S] en la cual se obtiene un grado de inhibición del 60 % para una reacción enzimática
en presencia de un inhibidor [I].

[S] Velocidad (nM/min)

mM Control [I] = 6 M
0.200 16.67 6.25
0.250 20.00 7.69
0.333 24.98 10.00
0.500 33.33 14.29
1.000 50.00 25.00
2.000 66.67 40.00
2.500 71.40 45.45
3.330 76.92 52.63
4.000 80.00 57.14
5.000 83.33 62.50

Solución:
Primero se determina qué tipo de inhibición se tiene, por lo tanto

Analizando los datos cinéticos mediante Lineweaver-Burk se tiene que:

Vmax  Vmax
app
 100nM / min
M
K M  999,860  nM < K app  2,999,900  nM

Por lo tanto es una inhibición competitiva, y Ki se calcula como:

Ki 
 I  
 6,000  nM
 2,999.52  nM
app
K 2,999,900nM
M
1 1
KM 999,860nM
Despejando [S] de:

100I 
i%   S  

 K i 1    I 
  K M 
se tiene:

 I  100  


S   K M  K  i 1  1  333,500  nM

 i  %  


14.En un experimento se midió la tasa inicial de una reacción enzimática, v, a

varias concentraciones de substrato [S]. La concentración de la enzima es 3 nM.
Se graficó [S]/v versus [S] y se observó una línea recta en la cual el intercepto-y es
590.6 s y la pendiente es 0.3684 s M-1. ¿Cuál es el valor de KM y el de Vmax para
esta reacción enzimática? ¿Cuál es el valor de kcat para esta enzima?

Solución:
Se observa que se utilizó la ecuación de Hanes-Woolf
S   1 S   K M
v Vmax Vmax [S]/v

Los datos del problema son: 

m = 0.3684 s M-1  KM/Vmax 1/Vmax
b = 590.6 s 
-KM
[S]
1
V   2.7144  M  s 1
max
0.3684

K M  590.6 Vmax  590.6  2.7144  1,603.12  M

Sabemos que Vmax = kcat [E]t, por lo tanto

Vmax
k   904.8  s 1
cat
Et

2.7144  M  s 1

0.003  M

El coeficiente de especificidad es:   kcat

904.8  s1

1,603.12  M  0.564 K M

15.Un sustrato S se transforma por una enzima, y la velocidad de desaparición se mide

cada 30 seg. durante 3 min. Se preparó en tubos de ensayo una serie de seis tubos con
1.5 µg de enzima (peso mol 30,000) añadiéndose un mismo volumen de disolución de
sustrato a distintas concentraciones. Los resultados están resumidos en la tabla.
¿Cuáles son las velocidades iniciales para cada tubo con distinta concentración de
sustrato?
 Tiempo (min) Sustrato transformado (µmol)
0 1 2 3 4 5
S S S S S S
0.5 0.0 0.49 0.71 1.10 1.36 1.45
1 0.1 1.05 1.52 2.24 2.74 3.00
1.5 0.2 1.66 2.36 3.48 - -
2.0 0.3 2.23 3.18 - - -
2.5 0.4 2.81 4.00 - - -
3 0.5 3.40 - - - -
Conc. Inicial 0.0 2.32 4.55 12.66 38.50 200.00
(µmoles ml-1)

Solución: Paso 1. Corregir cada lectura sustrayendo el cambio aparente en la disolución testigo ( 0S) en el
tiempo correspondiente.
1 2 3 4 5
S S S S S
0.49 0.71 1.1 1.36 1.45
0.95 1.42 2.14 2.64 2.90
1.46 2.16 3.28 - -
1.93 2.88 - - -
2.41 3.6 - - -
2.9 - - - -

Paso 2. Representar moles de sustrato transformado para cada concentración frente al tiempo
(Figura). Trazar la mejor recta para cada serie de puntos.
 4
S
Sustrato transformado (µmol)

5
S
3
S

2
S

1
S

Tiempo (minutos)

De esta figura determinar la velocidad de sustrato transformado por minuto para cada concentración
de sustrato en el tramo lineal de cada curva. Estos valores serán las pendientes de las porciones lineales
y serán también las velocidades iniciales.

[1S] 2.32 x 10-3 M 1

V= 0.95 µmol min-1
[2S] 4.55 x 10-3 M 2
V= 1.44 µmol min-1
3
[ S] 12.66 x 10-3 M 3
V= 2.31 µmol min-1
[4S] 38.50 x 10-3 M 4
V= 2.64 µmol min-1
[5S] 200.00 x 10-3 M 5
V= 2.90 µmol min-1

Estos valores se representan unos frente a otros

Velocidad inicial (µmol min-1)

Conc. Sustrato (M x 103)

Problema 16:
Utilizando la ecuación de Micaelis-Menten, calcular el cambio en la [S] necesaria para aumentar la velocid
% de la velocidad máxima.

SOLUCIÓN
Poniendo v0 = 0,1 Vmáx

Entonces [S] = 0,1

Km + [S]

[S] = (Km + [S]) . 0,1

[S] = 0,1 Km + 0,1 [S]

[S] - 0,1 [S] = 0,1 Km

0,9 [S] = 0,1 Km

9 [S] = Km

Es decir, [S] = Km / 9

Poniendo v0 = 0,9 Vmax encontramos que [S] = 9 Km,

entonces [S]90% = 9 Km = 81
[S]10% Km/9

Es decir, se debe aumentar la [S] 81 veces.

Problema 17
Las velocidades iniciales a varias concentraciones de sustrato para una reacción catalizada por una enzima hipotétic
[S] (moles/l) V (µmoles/min)
5x10-2 0.25
-3
5x10 0.25
5x10-4 0.25
-5
5x10 0.20
5x10-6 0.071
5x10-7 0.0096

a) ¿Cuál es la velocidad máxima para esta reacción?

b) ¿Por qué la velocidad inicial permanece constante a una [S] mayor de 5x10 -4 M
c) ¿Cuál es la concentración de enzima libre para una [S] de 5x10 -4 M?
d) ¿Cuál es la Km de la enzima?
e) Calcular la velocidad inicial para [S]=1x10 -6
y [S]=1x10-1
f) Calcular la concentración de producto formado en los cinco primeros minutos de reacción utilizando 10 ml de una disoluci

SOLUCIÓN
a) Vmax = 0.25 µmol/min, ya que por encima de [S] de 5x10-4 no aumenta.
b) Porque todos los enzimas está ocupados transformando un sustrato.
c) Cero, todos los enzimas ocupados, a esa [S] se da la Vmax.
d) Empleando la ecuación de Michaelis, utilizando la velocidad 0.20, 0.070 ó 0.0096 y sus correspondientes [S], como sab
1,25 x 10-5 moles/l.
e) Sabiendo la Km y Vmax, aplicamos Michaelis utilizando esas [S], y
obtenemos: V = 0,018 µmol/min y V = 0,25 µmol/min.
f) A [2x10-3] la V = Vmax = 0,25 µmol/min. En 5 min 0,25 x 5 = 1,25 µmol. Tenemos 10 ml de sustrato, luego 1,25 µmol / 1

Problema 18:
Se estudió la actividad de la enzima ureasa, que cataliza la reacción:
CO(NH2)2+H2O  CO2+2NH2
en función de la concentración de urea, con los resultados siguientes:

Concentración de urea (mmoles dm-3) 30 60 100 150 250 400

V inicial (mmoles urea consumidos min-1 mg enzima-1) 3,37 5,53 7,42 8,94 10,70 12,04

¿Cuáles son los valores de Km y Vmáx para esta reacción?

SOLUCIÓN
Los datos se ordenan en la forma adecuada para una gráfica lineal (por ejemplo, 1/V inicial frente a 1/[S], aunque existen otras fo
de nuestro estudio). La gráfica de la doble inversa se indica en la Figura. De la gráfica se puede calcular que K m es 105 mm
urea consumidos mg -1 min-1. Observar la distribución de los puntos y tener presente cuando se eligen los valores adecuado
planificar un experimento.

0.30
)
-1

0.24
1/V inicial (mg min mmoles

0.18

0.12

0.06

0.00
0.00 0.01 0.02 0.03 0.04

Ejemplo resuelto de acuerdo con el método de doble

1/[urea] (dm inversa
mmoles o) de Lineweaver-Burk.
3 -1

Problema 19
Se investigó el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una reacción catalizada enzimáticamente sobre un solo
resultados

Concentración de sustrato Concentración del inhibidor

(mmol L -1) (mmol L -1)
0 0.5 1.0
Velocidad de reacción  (mol L -1 min-1)

0.05 0.33 0.20 0.14

0.10 0.50 0.33 0.25
0.20 0.67 0.50 0.40
0.40 0.80 0.67 0.57
0.50 0.83 0.71 0.63

A) ¿De que manera actúa el inhibidor? B) Obténgase los valores para Vmáx, y Km.
SOLUCIÓN
A) La manera más sencilla de deducir cómo actúa un inhibidor es graficar 1/ en función de 1/[S]0 para cada concentración

7 1
1/ 0 (mol L -1 min-1 )

5 0.5
[I ] 0 (mmol L-1)

4 [I ] 0,5 (mmol L-1)

Vmáx [I ] 1,0 (mmol L-1)

3 0

0
-15 -10 -5 0 5 10 15 20 25

1/[S] 0 [(mmol L-1) -1]

-1/Km

Gráfica de Lineweaver-Burk del efecto de un inhibidor

A partir de la gráfica se puede observar que la pendiente de las curvas se modifica con los cambios en la concentración del i
eje 1/Vmax). Por ello los datos anteriores indican que el inhibidor I está actuando como un inhibidor competitivo.

B) De la intersección en el eje 1/ se puede estimar Vmax= 1(mol L -1 min-1) y de la intersección con el eje 1/[S]0 los valores d
Km=0,2(mmol L -1) con 0.5(mmol L -1) de inhibidor y Km=0,3 (mmol L -1) con 1(mmol L-1)

Problema 20:
A partir de los siguientes datos de una reacción enzimática, determinar de que manera está actuando el inhibidor. De
máxima.
[S] mM µg producto/h µg producto/h
(sin inhibidor) (6 mM inhibidor)
2 139 88
3 179 121
4 213 149
10 313 257
15 370 313

SOLUCIÓN
Se calculan los inversos de [S] y de v, producto sin inhibidor y producto con inhibidor y se representa. Sin inhibidor: Vmax
inhibidor: Vmax es la misma y Km=9 mM.

Problema 21:
Calcular qué velocidad se obtendrá en una reacción enzimática si la velocidad de la concentración de sustrato es a) 10 Km b) Km/3.
Sol.: a) 91 %; b) 25%
Problema 22:
Una enzima cuya Km es 2,4 · 10-4 M se ensaya con una concentración de sustrato de 2·10-7 M. Si la velocidad media para esta reac
de 5·10-2 M fue 0.128 mmoles/min, calcular la velocidad inicial en el caso anterior.
Sol.: 0.107 µmol/min

Problema 23:

Se detectó actividad de una determinada enzima en extractos de hígado y cerebro. Para dilucidar si la actividad detectada era at
en ambos órganos, o a especies distintas de la enzima propias de cada órgano, se llevaron a cabo estudios cinéticos con distintos s
ensayado siempre bajo idénticas condiciones en 1 ml de volumen total incluyendo 0,1 ml de extractos de cada órgano, resultó ser
velocidades iniciales:
Concentración de sustrato Velocidad (moles/min)
(moles/ml) Hígado Cerebro
1 0,14 0,085
2 0,23 0,14
5 0,39 0,23
10 0,50 0,30
Den las características de la enzima que puedan ser determinadas a partir de estos datos, y muéstrese cuáles de ellas son de interés en rel
las dos enzimas.
Sol.: los valores de Km son los mismos

Problema 24:
La fructosa difosfatasa (que cataliza la hidrólisis de la fructosa difosfato a fructosa-6-fosfato y fosfato) es inhibida por AMP. Los
partir de un estudio de la enzima del hígado de rata:
FDP (moles ml-1)
4 6 10 20 40
AMP (moles ml-1) Velocidad inicial (moles ml-1 min-1)

0 0,059 0,076 0,101 0,125 0,150

8 0,034 0,043 0,056 0,071 0,083
Comentar estos resultados en relación a las constantes cinéticas en cada caso.
Sol.: Km 8 moles ml-1; Vmáx sin inhibidor 0.185 moles ml-1 min-1; Vmáx con inhibidor 0.102 moles ml-1 min-1

Problema 25:
Una determinada enzima cataliza la reacción A ↔ B. Se ha observado previamente que la Vmáx de esta reacción no
varía dentro de un rango de pH entre 5 y 9: Vmáx= 100 moles/min/g de enzima. Por otra parte, la Km varía según se
muestra en esta figura:
0,010

0,008
Km (M)

0,006

0,004

0,002

0,000
5 6 7 8 9
pH
El ensayo fue realizado en presencia de 0,01 M sustrato, y 1 g de enzima, en cada uno de los bufferes. ¿Qué velocidad inicial
se esperaría para pH 5.5 y 8? Explique.
Sol.: Para pH 5.5: 50 moles/min/g de enzima
Para pH 8: 100 moles/min/g de enzima
Problema 26:
Salmonella typhimurium una enzima (E) que cataliza la reacción A→P, se decidió hacer un estudio estructura cinético

[A] mM 1,00 0,55 0,25 0,20

V(mmol P/ min) 1,00 0,71 0,50 0,41
V (nmol P/min) con J 0,66 0,41 0,25 0,20
donde J es un inhibidor de E cuya influencia como tal se quiere estudiar. [J] = 0,25mM.
a) Calcular la Km de la enzima estudiada para A, y Vmax para la transformación A--P en presencia de E.
b) Que tipo de inhibidor es J?
c) Cuál sería el efecto sobre la Vmax de la enzima, un aumento de la concentración de J?

Solución: Se calcula siguiendo el mismo procedimiento que el problema 4

a) Vmax = Vmax’ = 1.66 mmol P/min
b) KM = 0.5 mM
c) KM’ = 1.25 mM (con inhibidor) (Inhibición Competitiva)

Problema 27
La cinética de una enzima viene determinada como función de la concentración de sustrato en presencia y ausencia de

[S], Mx10-5 0.3 0.5 1.0 3.0 9.0

V(µmol/min) sin inhibidor 10.4 14.5 22.5 33.8 40.5
V(µmol/min) con inhibidor 10-4 M 2.1 2.9 4.5 6.8 8.1
a) Calcular la Km y la Vmax en presencia y ausencia de inhibidor
b) Que tipo de inhibidor es?

Solución: Se calcula siguiendo el mismo procedimiento que el problema 4

a) Vmax = 50 µmol/min
b) Vmax’ = 9.5 µmol/min
c) KM = 1.1x10-5 M
d) Inh. No Competitiva