LB-P-002

PROCEDIMIENTO PARA LA Rev. 001.

DETERMINACION DE DBO5 Fecha:
Ministerio de Educación

1. Objetivo: Conocer la cantidad de oxígeno disponible (en mg/l) que se requiere para degradar la
materia orgánica de una muestra de efluentes porcinos por la acción bioquímica aeróbica de
microorganismos en condiciones determinadas: 5 días a 20°C.

2. Alcance :La prueba mide el oxígeno utilizado, mediante el periodo de incubación especificado,
para la degradación bioquímica de la materia orgánica y para oxidación de la materia
inorgánica, como sulfuros, ión ferroso y formas reducidas de compuestos nitrogenados (que
pueden eliminarse agregando un inhibidor)

3. Acrónimos, abreviaciones y definiciones: El término Demanda Biológica de Oxígeno se

abrevia como D.B.O., en Francia la correspondiente abreviación es DBO (Demande
Biochimique en Oxygène), en Alemania BSB (Biologischer Sauerstoff Bedarf).

4. Responsable: Alejandra Verdugo (grupo porcinos)

5. Desarrollo:

a. Introducción:

La Demanda Bioquímica de Oxígeno está relacionada con la cantidad de material

orgánico biodegradable que contiene una muestra de agua. Durante la degradación
oxidativa de la materia orgánica, los microorganismos aeróbicos actúan consumiendo el
oxígeno presente en el agua como gas disuelto. La Demanda Bioquímica de Oxígeno se
expresa como el peso del oxígeno consumido por unidad de volumen de agua durante un
periodo definido de tiempo en una temperatura establecida, e. j. mg/L O2 (o ppm =
partes por millón) durante 5 días a 20 ºC. Para completar la oxidación biológica a 20 ºC
se necesita un periodo de tiempo de entre 21 y 28 días (B.O.D.última, BOD21, BOD28).
Considerando que estos periodos son muy largos en comparación con los requerimientos
prácticos, convencionalmente la medición se efectúa después de 5 días de incubación,
tiempo durante el cual, a 20 ºC, se consume una cantidad de oxígeno correspondiente a
aproximadamente el 70% del total consumido de esos 21-28 días. En comparación al
método químico de medida para la Demanda Química de Oxígeno (COD = Chemical
Oxygen Demand) la relación entre la DQO = DBO21 se produce solamente para
sustancias completamente biodegradables, por ejemplo la glucosa. De cualquier manera,
muchas sustancias orgánicas tanto naturales como sintéticas presentes en el agua no son
biodegradables (lignina) o pueden ser degradadas solamente muy despacio en las
condiciones adoptadas para el ensayo químico (celulosa) mientras que por el contrario

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son rápidamente oxidables en las condiciones adoptadas para el ensayo químico

(solución caliente de ácido dicromato). Como consecuencia, en la mayoría de los casos
la DQO de una muestra dada de agua es más alta que el valor de la DBO, pero sin
ninguna relación definible salvo las características de las aguas residuales. Como
proceso desarrollado por un microorganismo vivo, la Demanda de Oxígeno está
relacionada a la temperatura y puede ser medible aproximadamente entre 0 °C y 50 °C
de acuerdo al ritmo de aclimatación de la flora bacteriana. La cantidad consumida
incrementa con la temperatura. Los métodos estándares oficiales requieren que la
incubación se desarrolle a 20 ºC, como referencia evidente para asegurar las condiciones
en un ambiente natural. De cualquier manera las necesidades prácticas particulares
(áreas de calor o frío ó estacionales) permiten adoptar temperaturas de incubación
distintas a los 20 ºC. Las determinaciones de D.B.O. son utilizadas principalmente para
la evaluación de la cantidad de materia orgánica entrante en una planta de tratamiento
biológico de aguas residuales o la eficiencia de ésta, pero también se utiliza en el estudio
de cuerpos de la superficie acuosa (ríos, lagos océanos). La incubación se desarrolla en
la oscuridad para prevenir las interferencias producidas por el oxígeno de la fotosíntesis
de las algas.

b. Fundamentos:

Los microorganismos ya presentes o inoculados deliberadamente en una muestra de

efluentes porcinos que contiene materia orgánica biodegradable, usan oxígeno para sus
procesos bioquímicos y producen un volumen equivalente de dióxido de carbono. Si el
proceso se desarrolla en un sistema cerrado y el dióxido de carbono es absorbido por un
fuerte álcali, por ejemplo cal sodada (una mezcla de óxido de calcio e hidróxido de
sodio, con una capacidad de absorción de dióxido de carbono de un 20%) o potasa
cáustica, puede medirse un descenso progresivo de la presión interna.
Para residuos no tratados de empresas porcinas, los valores de DBO (en mg/L) se
encuentran comprendidos entre 7000ppm-9000ppm. Estos valores corresponden a una
incubación de 5 días a una temperatura de 20°C.

c. Interferencias:

Existen numerosos factores que afectan la prueba de DBO entre ellos se encuentra:
Relación de la materia orgánica soluble y de la materia orgánica suspendida, los sólidos
sedimentables, los flotables, la presencia de hierro en su forma oxidada o reducida, la
presencia de compuestos azufrados y las aguas no bien mezcladas.

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DBO carbonácea contra nitrogenácea: La oxidación de la forma reducidas del

nitrógeno como amoniaco y nitrógeno orgánico, mediada por los microorganismos,
ejercen una demanda nitrogenácea, que ha sido considerada como una interferencia en la
prueba; sin embargo, esta puede ser eliminada con la adición de inhibidores químicos.
Cuando se inhiba la demanda nitrogenácea de oxígeno, reportar los resultados como
demanda bioquímica de oxigeno carbonácea (DBOC5); cuando no se inhiba reportar los
resultados como DBO5.

Requerimientos de dilución: Si el agua de dilución es de baja calidad, su DBO aparecerá

como DBO de la muestra; efecto que será amplificado por el factor de dilución, y el
resultado tendrá una desviación positiva. El método de análisis debe incluir agua de
dilución de verificación y agua de dilución de blanco para establecer su calidad,
mediante la medición del consumo de oxigeno con una mezcla orgánica conocida. La
fuente del agua de dilución puede ser destilada.

d. Selección de escala:

El equipo determina valores de D.B.O. menores a 90-250-600-1000 ppm

respectivamente. La misma se determina de acuerdo al volumen de muestra a utilizar:

Se seleccionará una escala apropiada para poder realizar una lectura correcta de los
resultados. La misma será de 1000ppm (mg O2/l), con un volumen de muestra de purín
de cerdo correspondiente a 100ml.

e. Pretratamiento de las muestras:

En muchos casos una muestra de efluentes porcinos debe ser sometida a tratamientos
apropiados antes de la medición de su D.B.O. Deberán ser corregidos los siguientes
casos:

A) Cuando el valor del pH no está en el rango de 6.5-7.5.

B) Si la muestra está desinfectada con Cloro, Dióxido de Cloro, ozono, etc.

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C) Si están presentes substancias tóxicas para las bacterias.

D) Si el agua es rica en bacterias nitrificantes.
E) Cuando la flora bacteriana es pobre.
F) Cuando el contenido en nutrientes (Nitrógeno, fósforo, micro elementos) es
demasiado bajo. La mayoría de estos problemas se producen en las aguas residuales
industriales.

f. Materiales y equipos:

 Botellas de Incubación color caramelo de 500ml.

 Varillas de agitación.
 Equipo de agitación de 6 piezas.
 Embudo de vidrio.
 Micro pipetas.
 Vasos de precipitado.

g. Reactivos Requeridos:

A) Para la absorción de Carbono Dióxido.

• Solución de Hidróxido Potásico (KOH), de grado comercial (No se necesita particularmente

puro) ó Cal Sodada no deslicuada, gránulos de 1.0-1.7 mm.

B) Si las muestras van a ser neutralizadas ántes de la incubación:

• Acido Sulfúrico (H2SO4) solución 1N.

•Hidróxido Sódico (NaOH) solución 1N.

C) Si las muestras van a ser complementadas con nutrientes:

• Agua destilada, alta calidad, libre de cobre y materia orgánica.

• Cloruro de Hierro, férrico, hexahidratado (FeCl3 • 6 H2O).
• Cloruro de Calcio, anhídrido (CaCl2).
• Sulfato Magnésico, heptahidratado (MgSO4 • 7 H2O).
• Orto-Fosfato Potásico, bi-acido, (KH2PO4 ).
• Orto-Fosfato Potásico, monoácido (K2HPO4).
• Orto-Fosfato Sódico, monoácido, (Na2HPO4). • Cloruro Amónico (NH4Cl).

D) Si las muestras contienen Cloro:

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• Sulfito Sódico (Na2SO3).

E) Si la nitrificación en las muestras va a ser inhibida:

• Allyl thiourea (Thiosinamina), C4H8N2S. ó • 2-Cloro-6 (Triclorometil) piridina, C6H3Cl4N

(CTCMP, Servida N-). Aditivo para fertilizantes minerales punteado para bajar las pérdidas de
nitrógeno en suelos.

h. Procedimiento:

Pre tratamiento de la muestra:

A cada uno de los frascos de DBO con muestras y blanco, agregar las siguientes reactivos:

a) Se agrega H2SO4 1N o NaOH 1N para neutralizar el pH de la muestra; con ayuda de un

pHimetro se corrobora la neutralización.

b) Para la absorción de Carbono Dióxido.

Para la absorción de CO2 agregar lentejas de NaOH en los tapones de goma de los frascos para
DBO. Llenar los tapones hasta la altura de las perforaciones de los mismos.

c) Se procede al agregado de Nutrientes. Añadir 100µ (con ayuda de micropipeta), de las

siguientes soluciones:

• Agua destilada.
• Cloruro de Hierro, férrico, hexahidratado (FeCl3 • 6 H2O).
• Cloruro de Calcio, anhídrido (CaCl2).
• Sulfato Magnésico, heptahidratado (MgSO4 • 7 H2O).
• Orto-Fosfato Potásico, bi-acido, (KH2PO4 ).
• Orto-Fosfato Potásico, monoácido (K2HPO4).
• Orto-Fosfato Sódico, monoácido, (Na2HPO4).
• Cloruro Amónico (NH4Cl).

d) Para la inhibición de la nitrificación, agregar N-Allyltiourea y/o TCMP (2-cloro-6

(triclorometil) piridina. La cantidad necesaria para la escala elegida, será de 0,3ml de
solución inhibidora.

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Puesta en marcha de equipo:

-Ajustar los parámetros de DBO, estos son 5 días a 20°C. La temperatura se fijara en la la estufa
que contendrá al equipo de DBO5.

-Una vez que se agregaron los reactivos a los frascos que contienen las muestras y el blanco,
agregar los buzos a cada uno de los recipientes y luego se procederá colocar los tapones de goma
con las lentejas de NaOH a cada uno de los recipientes de DBO.
-Llevar a equipo de medición. Colocar cada uno de los frascos con los reactivos y blanco en el
equipo, enroscar muy bien las tapas. Cerrar la estufa y se procede a la determinación. El equipo
determinará DBO, es decir, medirá la diferencia de presión y calculará DBO5, y finalmente se
determinará el valor real de la DBO5 utilizando la fórmula que se detalla en apartado i.

i. Criterios de evaluación:

El equipo otorga datos de valores de DBO5 en mg Oxígeno (consumido) /l para la muestra y

blanco; con ayuda de la siguiente fórmula, se calcula los valores reales de DBO en mg Oxígeno
(consumido) /l de la muestra para la escala de dilución elegida.

𝐷𝐵𝑂𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 − 𝐷𝐵𝑂𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜
𝐷𝐵𝑂 =
𝑚𝑙𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝑚𝑙𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙

6. Normas para buenas prácticas de manejo y utilización de efluentes porcinos:

a. ISO 14000: establecen herramientas y sistemas enfocados a los procesos de producción de

una empresa u otra organización, y de las externalidades que de ellos deriven al medio
ambiente.

b. ISO 14020-14024: proveen información a los consumidores acerca de los productos, en

términos de su carácter ambiental. Intentan alentar la demanda de bienes que no afectan o
por lo menos no perjudican al medio ambiente y estimular así el potencial para una mejora
ambiental continua.

c. ISO a ISO 14001 apoya a las organizaciones que la utilizan para: Identificar
sistemáticamente y gestionar todos sus impactos ambientales en el sentido más amplio.

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d. La Norma ISO 50001 se enfoca principalmente al desarrollo e implantación de sistemas de

gestión de la Energía.

7. Aspectos de la seguridad e higiene:

Acondicionamiento especial de la zona:

- Lugar con buena ventilación debido a fuertes olores.

- Mantener orden de mesadas para evitar accidentes.

8. Aspectos de resguardo ambiental asociados:

a. Identificación de residuos generados: Residuos Patógenos

b. Manejo de residuos generados: Con elementos de seguridad, esto incluye guantes,
delantal, gafas protectoras y barbijo. Higiene de manos con alcohol.
c. Disposición final de residuos generados: Abundante agua, lavado de equipo
utilizado con lavandina y soluciones de lavado acidas y básicas.

9. Elementos consumibles y su uso racional:

a. Agua: evitar uso inadecuado de la misma debido a escases.

b. Electricidad: Una vez finalizada la experiencia, desconectar el equipo. Apagar la luz
si la habitación donde se encuentra el mismo, no se está utilizando.
c. Reactivos: Hacer uso razonable de los mismos, debido a escases de reactivos.

10. Registros:

a. Sistema de modificación: informar sobre modificaciones a coordinador de equipo de

efluentes porcinos Marcos Astorga.

b. Lista de distribución: Informar a coordinador de efluentes porcinos Marcos Astorga, quien

le informara al autor del procedimiento.

c. Ubicación del documento: el respectivo procedimiento se encontrara en la carpeta de

PROCEDIMIENTOS correspondiente a Laboratorio de Bioprocesos.

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