RESUMEN

La norfloxacina es un agente antimicrobiano de amplio espectro, ampliamente utilizado en

humanos y animales para el tratamiento de infecciones del tracto urinario. Es una
fluoroquinolona de segunda generación. Varios métodos analíticos para analizar la
norfloxacina se han descrito en la literatura. Sin embargo, la mayoría de ellos son complejos y
requieren el uso de grandes cantidades de solventes orgánicos. Este artículo describe el
desarrollo y la validación de un método analítico verde para la determinación de norfloxacina
en materia prima mediante espectrofotometría FTIR. Este método no requiere el uso de
disolventes orgánicos, lo que minimiza la generación de residuos en el proceso y sus impactos
ambientales. El desarrollo de métodos que promuevan la reducción, prevención o eliminación
de la generación de residuos se ha vuelto muy atractivo para la industria farmacéutica debido
a la creciente demanda de la sociedad civil y las autoridades gubernamentales por productos y
servicios amigables con el medio ambiente. El método de espectrofotometría FTIR se validó de
acuerdo con las directrices de la Conferencia Internacional de Armonización, que muestra una
linealidad adecuada (r = 0,9936), precisión, precisión y robustez. Este método validado se
puede utilizar como una alternativa ecológica para la cuantificación de norfloxacina en materia
prima en el análisis de rutina de control de calidad.

INTRODUCCION

La norfloxacina (Figura 1) es una fluoroquinolona sintética utilizada en humanos y animales y

está indicada en casos de infección del tracto urinario. Es altamente efectivo contra muchas
bacterias gramnegativas y algunas gram positivas, como Escherichia coli, Staphylococcus
aureus, Citrobacter freundi, Shigella y Pseudomonas aeruginosa. Los efectos adversos más
comunes incluyen náuseas, mareos, dolores de cabeza y convulsiones (1, 2). Fue la primera
quinolona de segunda generación vendida en 1986, que posee un amplio espectro de acción
equivalente a muchos de los antibióticos derivados de la fermentación (3). Muchas otras
quinolonas de segunda, tercera y cuarta generación se han introducido en el mercado desde
entonces. En la literatura se han descrito varios métodos cuantitativos y cualitativos para
analizar la norfloxacina, como la espectrofotometría UV-Vis (4-6), los métodos
electroanalíticos (7), el análisis de inyección de flujo (8, 9), la titulación no acuosa (10),

titulación potenciométrica (11), LC micelar (12), electroforesis capilar (13, 14), HPLC, (15-19) y
ELISA (20). La espectrofotometría FTIR se ha utilizado con éxito en el desarrollo de análisis
cuantitativos y cualitativos de fármacos, como ceftazidima (21), ampicilina (22), cefuroxima
sódica (23), darunavir (24), doripenem (25), hidrocloruro de isoxsuprina (26). , roxitromicina
(27) e ibuprofeno (28). Sin embargo, un análisis cuantitativo de norfloxacina utilizando FTIR
aún no se ha publicado en la literatura.

Este método no requiere el uso de solventes orgánicos, lo que minimiza la generación de

desechos en el proceso y sus impactos ambientales. La preparación de la muestra es mínima o
no es necesaria, y los medicamentos con baja solubilidad pueden analizarse fácilmente.
Además, es un método relativamente rápido (21, 27). La sociedad civil y las autoridades
gubernamentales han dado más importancia a los problemas ambientales, y la demanda ha
aumentado para el desarrollo de procesos que son menos nocivos para el medio ambiente. Por
lo tanto, la reducción o prevención de la generación de residuos se ha vuelto cada vez más
atractiva para la industria farmacéutica.

industria (29, 30). Considerando la importancia del control de calidad de los medicamentos y el
creciente interés en el desarrollo de métodos analíticos que sean menos dañinos para el medio
ambiente, el objetivo de este trabajo fue desarrollar y validar un método analítico para el
análisis cuantitativo de norfloxacina en materia prima mediante espectrofotometría FTIR.

Experimental

Productos químicos

(a) Estándar de referencia de norfloxacina (NOR RS) .- Donado amablemente por União
Química (Pouso Alegre, Brasil).

(b) Materia prima de norfloxacina. Reclamo de etiqueta de 400 mg. Donado amablemente por
União Química.

(c) Bromuro de potasio.-Grado analítico, secado a 110 ° C antes de su uso en la preparación de

pellets (Synth, São Paulo, Brasil).

Equipo

(a) Horno.-Modelo 702 780 (Quimis, São Paulo, Brasil).

(b) Espectrofotómetro FTIR. Modelo IR Prestige-21 (Shimadzu, Kyoto, Japón).

Obteniendo la Curva Analítica

Se tomaron cantidades equivalentes de 1,0, 1,5, 2,0, 2,5 y 3,0 mg de NOR RS (previamente
diluido en bromuro de potasio, 1 + 10, p / p) y se mezclaron con cantidades suficientes de KBr
para obtener un peso de pellet de 150 mg. Los polvos se homogeneizaron y se comprimieron
en una prensa de matriz mecánica durante 10 minutos para formar gránulos translúcidos a
través de los cuales podría pasar el haz de luz del espectrofotómetro. Los valores de
absorbancia y espectros fueron

obtenido en el rango de 1770.000 a 1649.138 cm-1 con la ayuda del software IR Solution
(Shimadzu, Kyoto, Japón).

Determinación de norfloxacina en materia prima

Preparación de NOR RS y tabletas de materia prima. Se homogeneizaron cantidades de polvo

equivalentes a 2,0 mg de norfloxacina [20,0 mg de dilución 1 + 10 (p / p) en KBr] con 130 mg
de KBr, para formar un peso de pellet de 150 mg. Las determinaciones de absorbancia se
realizaron por triplicado. El mismo procedimiento se realizó con NOR RS y materia prima,
también por triplicado. Cálculo del contenido de norfloxacina en la muestra.-La concentración
de norfloxacina en la muestra se calculó con la ecuación 1, y el porcentaje de contenido de
concentración de norfloxacina se calculó con la ecuación 2.

C A C A s s RS rs = × (1)

C C s s Ct% = × 100 (2)

donde Cs es la concentración de la muestra (mg / gránulo), Cs% es la concentración porcentual

de la muestra, CRS es la concentración del estándar químico de referencia (mg / gránulo),
como es la absorbancia de la muestra, ARS es la absorbancia estándar de referencia y Ct

es la concentración teórica de norfloxacina en la muestra (mg / 150 mg).

Validación del método

El método se validó mediante la evaluación de los siguientes parámetros: linealidad, precisión,
exactitud, solidez, especificidad, LOD y LOQ, de acuerdo con las directrices de la Conferencia
Internacional de Armonización (31). Linealidad.-Se analizaron cinco concentraciones de NOR
RS (1.0, 1.5, 2.0, 2.5 y 3.0 mg / gránulo) en 3 días diferentes. La linealidad se evaluó calculando
la regresión lineal a través del método de mínimos cuadrados, y las concentraciones se
evaluaron estadísticamente mediante ANOVA.

Precisión.-La precisión se evaluó para dos criterios: repetibilidad y precisión intermedia. La

repetibilidad se estudió analizando siete gránulos de NOR RS en el

concentración de 2.0 mg / gránulo en el mismo día. RSD, se analizó el% entre las
determinaciones. La precisión intermedia se evaluó mediante el análisis de la absorbancia de
los gránulos NOR RS en 3 días diferentes y también por un segundo analista. Los análisis
estadísticos de los resultados obtenidos se realizaron posteriormente para determinar si había
una diferencia estadísticamente significativa entre ellos.

Exactitud.-La precisión del método se realizó utilizando un ensayo de recuperación en el que se

añadió una cantidad conocida de NOR RS a una cantidad conocida de muestra. La recuperación
se realizó a tres niveles: R1 (80%), R2 (100%) y R3 (120%), y los gránulos se prepararon de
acuerdo con la Tabla 1, por triplicado. El porcentaje de recuperación (R%) se calculó usando la
Ecuación 3, según lo determinado por AOAC INTERNATIONAL (32).

donde Cf es la concentración patrón de referencia más la concentración de la muestra (mg /

gránulo), Cu es la concentración de la muestra (mg / gránulo), y Cs es la concentración teórica
del

estándar de referencia agregado (mg / gránulo). Robustez. La robustez se evaluó analizando

los resultados de las variaciones individuales aplicadas a los siguientes parámetros: masa total
del gránulo (2,0 mg por encima y por debajo del peso total habitual del gránulo), tiempo de
compresión (2 min por encima y por debajo del valor normal) tiempo de compresión) y la
marca de

KBr (Shimadzu en lugar de Synth). LOD y LOQs.-LOD y LOQ se calcularon usando las ecuaciones
4 y 5, respectivamente, basadas en las curvas de calibración obtenidas en el estudio de
linealidad.

LOD = σ 3.3 IC (4)

LOQ 1 = σ0 IC (5)

donde σ es la SD de la intersección y IC es la pendiente de la curva de calibración.

Resultados y discusión

La espectrofotometría IR explota el hecho de que las moléculas absorben selectivamente

ciertas frecuencias de radiación IR. En general, esta radiación no tiene suficiente energía como
para causar transiciones electrónicas de cuantificación de norfloxacina, pero puede inducir
transiciones en estados vibratorios y rotacionales asociados con el estado fundamental de la
molécula, aumentando la amplitud de la vibración de los enlaces, por lo tanto presentando un
momento dipolar (33, 34). Dos moléculas diferentes nunca pueden tener un espectro de IR
idéntico porque cada enlace químico que compone la molécula tiene una frecuencia de
vibración natural diferente, y cada estructura
influye en estos enlaces de manera diferente. Por esta razón, los espectros IR se pueden usar
para identificar moléculas y grupos funcionales en función de la presencia de bandas de
absorción características en el espectro (33).

El análisis cuantitativo se realizó en la región espectral de 1770,000 a 1649,138 cm-1. El ancho

de banda elegido corresponde a la banda de carbonilo de la molécula de norfloxacina, que
tiene una forma e intensidad muy características. La figura 2 muestra el

la superposición de los espectros de absorción del estándar de referencia de norfloxacina y la

materia prima, donde se demarcó la región espectral analizada cuantitativamente.

Validación del método

Linealidad.-La curva analítica obtenida del valor promedio de absorbancia y su concentración

respectiva (en el rango de 1.0 a 3.0 mg / gránulo; Figura 3) mostró una linealidad apropiada,
evidenciada por su coeficiente de correlación (r = 0.9936). regresión lineal (Fcalc> Fcrit) y sin
desviación de linealidad significativa (Fcalc <Fcrit; Tabla 2). Todos los análisis estadísticos se
realizaron con un nivel de significación del 5%.

Precisión.-El valor de RSD,% calculado para la repetibilidad (3.16%) fue <5.0%, como se
recomienda en la literatura (31). La precisión intermedia (interdía y entre analistas) también se
confirmó mediante pruebas F y t, que demostraron que Fcalc <Fcrit y tcalc <tcrit, lo que indica
que no hay una diferencia significativa entre los valores evaluados (Tabla 2). Por lo tanto, el
método mostró una precisión adecuada.

Exactitud.-La precisión del método se determinó mediante un ensayo de recuperación, que se

evaluó en tres niveles de concentración. La precisión se consideró apropiada porque mostró
una recuperación del valor experimental promedio de 99.42% y DSR,% <5.0% (2.19%, Tabla 3).

Robustez. La solidez se demostró mediante pequeñas modificaciones individuales en los

siguientes parámetros: peso total del pellet, tiempo de compresión y marca de KBr. El método
se consideró robusto como lo demuestra el análisis estadístico de los resultados obtenidos
(Tabla 2). Se demostró que Fcalc <Fcrit para los primeros dos parámetros y tcalc <tcrit para el
último.

LOD y LOQs.-El valor calculado para el LOD fue de 0.18 mg / gránulo y el LOQ fue de 0.55 mg /
gránulo. Estos valores indican, respectivamente, la cantidad mínima necesaria para que el
método sea capaz de detectar y cuantificar la norfloxacina en la materia prima.

Ensayo de materia prima. Después de la evaluación de los parámetros de validación del

método utilizando gránulos NOR RS, se realizó un ensayo para comparar la absorbancia
obtenida de NOR RS y los gránulos de materia prima a una concentración de 2 mg / gránulo.El
contenido medio obtenido fue del 98% .

Conclusiones

Se desarrolló y validó un método analítico para cuantificar norfloxacina en materia prima

mediante espectrofotometría FTIR. El método propuesto ha cumplido todos los requisitos
recomendado en la literatura para la validación de métodos analíticos, y por lo tanto, puede
considerarse como un método alternativo para la cuantificación de norfloxacina en materia
prima en el análisis de CC de rutina. Además, este método es relativamente simple y de bajo
costo y no requiere el uso de disolventes orgánicos, lo que es ventajoso para las industrias
farmacéuticas y más respetuoso con el medio ambiente.