In Silico Toxicologia - Não métodos de ensaio

Resumo

Em toxicologia silico no seu sentido mais amplo significa " qualquer coisa que podemos
fazer com um computador em toxicologia . " Muitos tipos diferentes de nos métodos in silico
foram desenvolvidos para caracterizar e prever resultados tóxicos em humanos e meio
ambiente. Os métodos sem ensaios prazo denotam abordagens de agrupamento, relação
estrutura-actividade e sistemas especialistas . Estes métodos já são utilizados para efeitos
regulamentares e prevê-se que o seu papel será muito mais proeminente no futuro próximo.
Esta perspectiva vai delinear os princípios básicos de métodos não- teste e avaliar o seu papel
na avaliação de risco atual e futura de compostos químicos .

Introdução

Vivemos em um mundo de produtos químicos. Mais de 60 milhões de compostos

químicos eram conhecidos de existir em 26 de Maio de 2011 (CAS1). Felizmente, estamos
expostos a apenas uma fração deles durante a nossa vida. Estes incluem exposições
inadvertidas, por exemplo, resíduos de pesticidas e produtos de indústrias químicas e
exposições deliberadas, por exemplo, cosméticos e medicamentos. Toxicologia como uma
ferramenta regulamentar ciência e tem o objetivo de garantir a segurança dos seres humanos,
animais e meio ambiente. Avaliação ou riscos de todas as categorias de produtos químicos
estranhos ao corpo (xenobióticos) ainda se baseia principalmente na experimentação animal. No
entanto, a evolução dos conhecimentos da fisiopatologia geral, caminhos celulares, genética e
modelagem assistida por computador, resultaram em uma melhor compreensão dos
mecanismos moleculares de ação de xenobióticos e toxicidade. elementos-chave na abordagem
de avaliação integrada de risco são a avaliação das funcionalidades químicas que representam
alertas estruturais para as ações tóxicas de 2002, a construção de modelos cinéticos, com base
em dados não-animais e testes mais específicos para avaliar a toxicidade celular (Boobis et al. ;
Nigsch et al, 2009)..
Nesta perspectiva vou apresentar o conceito de in silico toxicologia e ter um olhar mais
detalhado para os chamados métodos não-teste e sua aplicação na previsão biocinéticos e alvo
propriedades de toxicidade de órgão de compostos. Além disso, vou tentar prever como esses
métodos serão implementadas no futuro próximo e mais distante na avaliação de segurança
química. jargão técnico é evitado, pois isso Perspectiva é voltado para o leitor não familiarizado
com o campo.

O que é Toxicologia silico?

In silico, uma frase cunhada como uma analogia para as frases familiares in vivo e in
vitro, é uma expressão usada para designar "realizada no computador ou através de simulação
em computador." In silico ou toxicologia computacional é uma área de desenvolvimento muito
ativo e um grande potencial . In silico toxicologia é difícil definir exatamente, como hoje
praticamente todas as pesquisas e avaliação de risco toxicológico tem especialização em
componentes silico. A Agência dos Estados Unidos Proteção Ambiental (US EPA) define em
toxicologia silico como a "integração da moderna tecnologia de computação e informação com a
biologia molecular para melhorar a priorização agência dos requisitos de dados e avaliação de
riscos dos produtos químicos" (US EPA, 2003).
Hartung e Hoffmann (2009) definido em metodologias de silico mais liberal como
"qualquer coisa que podemos fazer com um computador em toxicologia, e há poucos testes que
não se enquadram nessa categoria, como a maioria fazer uso de planejamento e / ou análise
baseada em computador . "Eles identificaram nove tipos diferentes de abordagens em silico, dos
quais vou me concentrar no que são chamados métodos sem ensaios no vocabulário da União
Europeia (UE) e da aplicação desses métodos em testes de toxicidade e regulamentação de
produtos químicos.
Em silico toxicologia difere de toxicologia tradicional em vários aspectos, mas talvez o
mais importante é o da escala. Escala do número de produtos químicos que são estudadas,
amplitude de endpoints e caminhos cobertos, os níveis de organização biológica examinados, ea
gama de condições de exposição consideradas simultaneamente (Kavlock et al., 2008).

Drivers de em Toxicologia silico

Existem vários motoristas científicas, econômicas e sociais que envolvem governos,

universidades e indústria, que promovam o desenvolvimento e utilização de métodos em silico
em toxicologia.
 Uma parte importante da in silico tecnologia foi desenvolvida pela indústria farmacêutica
para uso na descoberta de medicamentos. produtos químicos ambientais diferem de droga
candidatos, em muitos aspectos cruciais. Os fármacos são desenvolvidos para alvos específicos
no corpo humano (ou animal), são concebidos para possuir propriedades físico-químicas que
aumentam a absorção, distribuição, metabolismo e excreção, e têm padrões de utilização que
são conhecidos e quantificáveis. Em contraste, produtos químicos ambientais geralmente não
são concebidos com actividade biológica em mente, cobrir o espaço químico extremamente
diversificada, têm pouco compreendida perfis biocinéticos, e são geralmente avaliados em níveis
de exposição bem em excesso de situações reais prováveis.
Vários tipos diferentes de nos métodos in silico foram desenvolvidos e aplicados na
indústria de academia e farmacêutica para modelar farmacodinâmica, farmacocinética, e
desenvolvimento hipótese toxicológicos e testes. Estes, por métodos in silico incluem bancos de
dados, diferentes tipos de métodos quantitativos SAR (QSAR), farmac�oros, modelos de
homologia e outras abordagens de modelagem molecular, aprendizagem de máquina,
mineração de dados, ferramentas de análise de rede e ferramentas de análise de dados usando
computadores. Diferentes tipos de farmacocinética com base fisiologicamente (PBPK) modelos
requerem também extensa de computação. Também deve-se fazer uma distinção entre os
métodos fundamentalmente estatística e modelagem abordagens que tentam descrever a
química subjacente ou sistema biológico e usar essa abordagem para obter previsões de
comportamento em nível de sistema. Uma vasta literatura e em rápido crescimento e uma
variedade de ferramentas em silico estão agora disponíveis. Excelentes comentários recentes
sobre o uso de em métodos in silico no desenvolvimento de medicamentos incluem (Ekins et al,
2007a, 2007b;.. Muster et al, 2008; Koratagere et al, 2009;. Valerio, 2009; Cook, 2010; Merlot,
2010) .
Um dos objetivos da iniciativa público-privada europeia Iniciativa sobre Medicamentos
Inovadores (IMI) é desenvolver nos métodos in silico para prever tipos convencionais e
recentemente reconhecidos de toxicidade (IMI, 2010). O projeto IMI Etox (Integração
bioinformática e quimioinformática abordagens para o desenvolvimento de sistemas inteligentes
que permitam a previsão in silico de toxicidade) visa desenvolver uma base de dados de
segurança de medicamentos a partir dos relatórios da Indústria Farmacêutica de toxicologia e
dados toxicológicos públicas, estratégias metodológicas inovadoras e novas ferramentas de
software para prever melhor os perfis toxicológicos de pequenas moléculas nas fases iniciais do
processo de desenvolvimento de drogas.
 Actualmente, não há nenhuma orientação específica US Food and Drug Administration
(FDA) dedicados para a utilização dessas ferramentas para o desenvolvimento de drogas. dados
toxicológicos computacionais são apresentados numa base voluntária e não são necessários
(Valerio, 2009). A situação é muito semelhante com a Agência Europeia de Medicamentos
(EMA).
Em 2006, a UE revisto completamente o seu quadro regulamentar para os produtos
químicos com o passar do Regulamento (CE, 2006.EuropeanComm: 2006), relativa ao registo,
avaliação, autorização e restrição de substâncias químicas (REACH). métodos de ensaio
alternativos são urgentemente necessários para cumprir a meta de reduzir a experimentação
animal no REACH. O regulamento REACH menciona métodos sem ensaios para "toxicologia
preditiva" na avaliação dos riscos de produtos químicos comerciais na UE. O Regulamento (CE,
2008.EuropeanComm: 2008) sobre os métodos de ensaio a aplicar para efeitos do REACH
abrange um conjunto muito limitado de nos métodos in silico, mas de Orientação sobre
requisitos de informação e avaliação da segurança química emitidos pela Agência Europeia dos
Produtos Químicos (ECHA ) dá informação de fundo muito detalhado e recomendações para o
uso de métodos não-teste e agrupamento de Produtos químicos (ECHA, 2008).
A sétima alteração ao Cosméticos da UE Directiva (CE, 1976.EuropeanComm: 1976)
prevê um quadro regulamentar com o objectivo de eliminação progressiva dos ensaios em
animais. A proibição de comercialização está em vigor desde Março de 2009 para todos os
ingredientes cosméticos investigados por estudos em animais destinados a prever efeitos na
saúde humana, com excepção da toxicidade de dose repetida (incluindo sensibilização cutânea
e carcinogenicidade), reprodutiva e toxicidade para o desenvolvimento e à toxicocinética para
que o prazo seja estendido para 2013.
Nos Estados Unidos, o US National Research Council (NRC, 2007) relatório propõe
uma abordagem para avaliar substâncias químicas ambientais com base na identificação de vias
de toxicidade em humanos, modelagem e interpretação destas vias utilizando sistemas celulares
e computacionais, e prever os níveis de exposição humana que não são susceptível de ser
associada a efeitos adversos. Uma questão-chave no relatório é o uso de biologia de sistemas e
os "ômicas" abordagens na identificação de vias de toxicidade como base para novas
metodologias em testes de toxicidade e modelagem de dose-resposta, juntamente com a
aplicação de modelagem computacional de toxicocinética e toxicodinâmica (Blaauboer, 2008;
Andersen e Krewski, 2009; Valerio, 2009).
Métodos sem ensaios
De acordo com a Orientação ECHA sobre requisitos de informação e avaliação da
segurança química (ECHA, 2008), os dados não-teste pode ser gerado por três abordagens
principais: abordagens (1) agrupamento, que incluem comparativos e formação categoria
química; (2) relação estrutura-actividade (SAR) e quantitativa SAR (QSAR, um termo utilizado no
texto a seguir implicar ambos); e (3) sistemas de peritos. O desenvolvimento e aplicação de
todos os tipos de métodos não-teste é baseado no princípio da semelhança, isto é, a hipótese de
que compostos similares devem ter actividades biológicas semelhantes.
Em termos mais gerais, os métodos não-teste pode ser dividido em duas classes
principais, isto é, abrangentes (globais) e específicos (locais) queridos. métodos abrangentes,
também chamados sistemas especialistas, imitar o raciocínio humano e formalizar o
conhecimento existente. sistemas especialistas preditivos retratar propriedades de um composto
à base de regras de conhecimento. Os sistemas especialistas têm uma vantagem sobre os
métodos QSAR em que a predição está relacionado com mecanismos específicos. sistemas
específicos geralmente se aplicam a uma estreita faixa de metas, por exemplo, receptores
específicos ou enzimas.
Os métodos específicos podem ser divididos para técnicas baseadas-alvo com base
ligando-e. modelagem baseada ligando tal como QSAR envolve ligandos activos sem considerar
a estrutura 3-dimensional (3D) da proteína e os possíveis locais de interacção. QSAR é um
modelo matemático que correlaciona-se uma medida quantitativa da estrutura química, quer
uma propriedade física ou um efeito biológico (por exemplo, resultado tóxico). O termo
quantitativo em QSAR se refere à natureza dos parâmetros (também chamados de descritores)
utilizados para fazer a previsão. Um descritor molecular fornece um meio de representar
estruturas moleculares em forma numérica. O número pode ser um atributo teórica (por exemplo
relativos ao tamanho ou forma) ou uma propriedade mensurável. A análise de regressão linear é
frequentemente utilizada, mas uma variedade de outras técnicas de estatística multivariada
também são utilizados métodos baseados em interacções Estrutura calcular atómica entre
ligandos e as suas macromoléculas alvo. Eles exigem estruturas 3D de ambos os ligantes e
macromoléculas e precisam de mais poder computacional. Algoritmos de abordagens-Alvo e
baseados em ligantes podem ser integrados para obter insights estruturais adicionais e para
validar ainda mais os modelos individuais. Hoje métodos ligando- e baseada alvo são muitas
vezes combinados (Höltje et al, 2003;. Van de Waterbeemd e Gifford, 2003; Johnson e Rodgers,
2006; Lewis e Ito, 2008).
 Registo, avaliação, autorização e restrição de substâncias químicas abre a possibilidade
de avaliar os produtos químicos não só na base de um-por-um, mas pelo agrupamento de
produtos químicos em categorias. No ECHA Orientação (ECHA, 2008), a abordagem termos de
categoria e abordagem analógica são usados para descrever as técnicas para produtos
químicos de agrupamento, enquanto que o termo método comparativo é reservado para uma
técnica de preencher lacunas de dados em qualquer abordagem. Estas abordagens envolvem
categorizar análogos químicos potenciais com base em seu grau de estrutural, reactividade,
metabólica, e a similaridade físico-química para o produto químico com dados toxicológicos em
falta. Ele se estende para além semelhança estrutural, incluindo a diferenciação com base na
reatividade química e abordar o potencial que uma molécula analógico e alvo poderia mostrar
convergência metabólica toxicologicamente significativa ou divergência. Além disso, identifica as
diferenças em propriedades físico-químicas, que pode afectar as respostas biológicas de
biodisponibilidade e, por conseguinte, observada in vitro ou in vivo. A abordagem fornece uma
árvore de decisão passo a passo para categorizar a adequação dos análogos, o que caracteriza
qualitativamente a força das provas que suportam a hipótese de similaridade e nível de incerteza
associado à sua utilização para a leitura de diâmetro. Os conceitos categoria química e QSAR
são fortemente ligados. O conceito de formação de categorias químicas e, em seguida,
utilizando dados medidos em alguns membros da categoria para estimar os valores em falta
para os membros não testados é uma aplicação do senso comum de QSAR. A razão pela qual
este conceito é tão compatível com QSAR é que esta descrição ampla do conceito de categorias
e a descrição histórica de QSAR são uma ea mesma coisa (ECHA, 2008; Wu et al., 2010).

Toxicocinética, xenobióticos Metabolismo e alertas estruturais

O termo ADME refere-se a absorção, distribuição, metabolismo e excreção, os quatro

processos relacionados com o perfil farmacocinético de substâncias que interagem com os
organismos vivos. Em toxicologia, ADME é muitas vezes chamado toxicocinética ou biocinética.
Colectivamente, estes processos determinam o destino da substância dentro do corpo. O termo
ADMET é usado para expressar o perfil global de propriedades ADME e efeitos tóxicos de uma
substância. As propriedades ADME de compostos são importantes para discriminar entre os
perfis toxicológicos dos compostos parentais e seus metabolitos ou produtos de degradação.
Metabolismo desempenha um papel crucial em efeitos farmacológicos e toxicológicos causadas
por xenobióticos. Há duas facetas para o metabolismo. Em primeiro lugar, o metabolismo leva à
cessação da acção de um composto e torna excretable do corpo. Em segundo lugar, o mesmo
sistema, por vezes, produz metabolitos que são tóxicos. Nestes casos, os compostos parentais
são frequentemente transformada em electrófilos reactivos que se ligam covalentemente com
proteínas e ADN. A formação de metabolitos reactivos é o principal mecanismo inicial de
carcinogénese química e também explica uma grande parte das reacções adversas da droga
chamada idiossincrática (Liebler e Guengerich, 2005; Walker et al., 2009).
As enzimas do citocromo P450 (CYP) constituem uma grande superfamília de proteínas
heme capazes de metabolizar um vasto número de compostos exógenos e endógenos. Cerca
de 10 formas de CYP são responsáveis pelo metabolismo de xenobióticos em seres humanos.
Os CYP metabolizar, por exemplo, hidrocarbonetos aromáticos policíclicos (ar ambiente), aminas
aromáticas (exposição ocupacional), aminas heterocíclicas (o alimento), pesticidas e herbicidas,
e praticamente todas as drogas. Os ligandos para enzimas CYP são ou substratos, isto é, são
metabolizados pela enzima, ou actuarem como inibidores e, portanto, bloquear o volume de
substrato (Pelkonen et al., 2008). Os progressos recentes na modelagem molecular de enzimas
CYP demonstrar que é possível gerar modelos realistas para o xenobióticos metabolizando CYP
humanos que comparam favoravelmente com estruturas cristalinas, e, portanto, pode ser
utilizado para obter energias de ligação de substrato que concordam estreitamente com valores
cinéticos experimentais (Stjernschantz et al, 2008;.. Pelkonen et al, 2009). Uma oficina
patrocinada pelo Centro Europeu para a Validação de Métodos Alternativos (ECVAM;. Coecke et
al, 2006) identificaram a falta de conhecimento em aspectos do metabolismo como um gargalo
fundamental no desenvolvimento de ensaios in vitro de toxicidade.
Muitos grupos funcionais nas estruturas químicas são conhecidas por serem associadas
com a formação de metabolitos reactivos, muitas vezes catalisadas pelas enzimas CYP. No
entanto, nem todos os compostos com esses grupos funcionais são tóxicos, uma vez que a
formação de intermediários reactivos é limitada pela capacidade de CYP para activar. Neste
processo, a orientação do composto no local activo da enzima é crítica, uma vez que apenas os
compostos com estérica específica e propriedades electrostáticas vai orientar átomos crítico em
relação ao ferro do heme (Hollenberg e colab., 2008). As estruturas cristalinas estão agora
disponíveis para várias enzimas CYP mamíferos. Estas estruturas permitem visualizar o
acoplamento de ligandos de proteínas CYP. No entanto, esses instantâneos não fornecem um
quadro completo. Com base em comparações entre as estruturas de CYP substrato-livres e
ligados à do substrato, pode-se concluir que a ligação do substrato provoca alterações
conformacionais na enzima, a extensão da qual é dependente da natureza do substrato e a CYP
envolvidas (ISIN e Guengerich, 2008 ).
 A necessidade de avaliar a capacidade de um produto químico para funcionar como um
agente mutagénico ou um carcinogéneo genotóxico (genotoxicidade colectivamente
denominados) é um dos principais requisitos em toxicologia reguladora. Um passo importante no
desenvolvimento de categorias químicas de genotoxicidade é a definição da química orgânica
associada com a formação de uma ligação covalente entre o ADN e um químico exógeno. Esta
química orgânica é tipicamente definido como alertas estrutural. Em um artigo recente, Enoque e
Cronin (2010) identificou 57 alertas estruturais associados à mutagenicidade e
carcinogenicidade genotóxica. Importante, a identificação de novas 22 alertas estruturais
identificados a partir de dados de toxicidade da droga idiossincrática melhorou significativamente
a cobertura do universo químico a que estas indicações podem ser aplicadas. Em contraste com
as compilações de alerta históricos, esse trabalho tem um passo adicional, e compilado a
reacção química mecanicista detalhada associada com cada um dos alertas em uma única
fonte.
Vários comerciais e públicos em métodos in silico estão disponíveis para avaliar
propriedades ADMET. Estes métodos de previsão de propriedades compostos físico-químicas, a
permeabilidade gastrointestinal e sangue-cérebro barreira de permeabilidade, se ligar a
proteínas do plasma, a afinidade para proteínas transportadoras, depuração metabólica,
potencial para inibir ou induzir enzimas que metabolizam drogas (especialmente CYPs), e
geração de metabolitos reactivos. Um relatório sobre métodos alternativos para testes
cosméticos (Adler et al., 2011) concluiu que toda uma série de in vitro / in métodos in silico em
vários níveis de desenvolvimento está disponível para a maioria das etapas e mecanismos que
regem as toxicocinética das substâncias cosméticas. Uma excepção é a excreção renal para o
qual até agora não in vitro / in silico métodos estão disponíveis; portanto, há uma necessidade
urgente de novos desenvolvimentos nesta área. As mesmas limitações se aplicam a testar todos
os outros compostos químicos a que estamos expostos.

Biocinéticos Modelagem e Integração de Dados

No desenvolvimento de medicamentos e toxicologia ambiental, modelagem PBPK

tornou-se uma abordagem pedra angular para organizar e integrar a entrada de in vivo, in vitro, e
em estudos in silico. PBPK modelos podem ser utilizados para prever perfis de concentração-
tempo se os seus valores de parâmetros podem ser determinados a partir de dados in vitro, ou
in vivo em seres humanos, a partir de modelos QSAR, ou a partir da literatura científica. modelos
PBPK são evoluídos modelos compartimentados que tentam usar as descrições biológicas
realistas dos determinantes da disposição de um composto químico no corpo (Loizou et al.,
2008).
Analogamente, os avanços feitos na biocinéticos base fisiologicamente modelagem
(PBBK) aumentaram substancialmente as possibilidades de dar uma melhor interpretação dos in
vitro e in silico dados de toxicidade para a sua relevância em termos de uma dose tóxica na
situação in vivo. Estes modelos são geralmente utilizados para estimar a concentração de um
tecido particular, dada uma certa dose (ou padrão de exposição externa). E vice-versa, uma
concentração tóxica eficaz determinada num relevante no sistema in vitro (isto é, relevantes para
o efeito tóxico no tecido alvo) pode ser usado como entrada no modelo PBBK para estimar a
dose externo que resultaria na concentração eficaz em o tecido objectivo (Blaauboer, 2008;
Pelkonen, 2010).
O conceito de ensaio integrado, tal como definido por Blaauboer et ai. (1999) aplica-se
também hoje: "Uma estratégia de teste integrado é qualquer abordagem para a avaliação da
toxicidade, que é baseado no uso de duas ou mais das seguintes características: físico, in vitro,
humano (por exemplo, epidemiológicos, relatos de casos clínicos), dados de animais (como
disponível ou se inevitável), métodos computacionais, alertas estruturais e modelos cinéticos. "
Na prática, in silico previsões não são usados isoladamente. Eles constituem já uma
parte do peso da abordagem provas, ou uma estratégia de ensaio integrada. Uma abordagem
baseada em evidências envolve uma avaliação dos relativos valores / pesos de diferentes peças
de informações disponíveis que foram recuperadas e se reuniram. Estes pesos / valores podem
ser atribuídos quer de forma objetiva, utilizando um procedimento formal ou usando os
pareceres de peritos. O peso dado à evidência disponível será influenciada por factores como a
qualidade dos dados, a consistência dos resultados, a natureza e gravidade dos efeitos, a
relevância das informações para o determinado parâmetro de regulamentação (ECHA, 2010).

Validação de Métodos
Modelos e simulações sem dados experimentais são exercícios vazios, de modo que os
dados experimentais devem ser correctas e reprodutível (Pelkonen, 2010). Há um consenso
generalizado de que in silico modelos devem ser cientificamente válido ou validado se forem
para ser usados na avaliação regulamentar dos produtos químicos. Na UE, o conceito de
modelo cientificamente válido é incorporada no texto REACH. Como o conceito de validação é
incorporado em textos legais e diretrizes regulamentares, é importante definir claramente o que
significa, e para descrever o que o processo de validação pode acarretar. Para efeitos do
REACH, uma avaliação dos QSAR validade do modelo deve ser realizada com base nos
princípios acordados internacionalmente para a validação de QSAR. O próprio processo de
validação pode ser efectuada por qualquer pessoa ou organização, mas será o registando a
indústria da química que precisa discutir o caso para a utilização dos dados de QSAR no
contexto do processo de registro. Isto é consistente com um princípio fundamental do REACH
que a responsabilidade de demonstrar a utilização segura das substâncias químicas é da
indústria (ECHA, 2008). Deve-se ressaltar que o ECVAM não está mandatado para realizar a
validação de métodos em silico.
Os princípios de validação QSAR pela Organização para a Cooperação e
Desenvolvimento Económico (OCDE, 2004.OECDPrinci: 2004) afirmam que no fim: "a fim de
facilitar a consideração de um modelo (Q) SAR para fins regulamentares, deve ser associados
com a informação a seguir:

1 - um ponto final definido;

2 - um algoritmo inequívoco;
3 - um domínio de aplicabilidade definido;
4 - medidas adequadas de bondade-of-fit, robustez e previsibilidade;
5 - uma interpretação mecanicista, se possível ".

Um documento de orientação foi produzido para fornecer orientações práticas sobre a

interpretação destes princípios da OCDE (OCDE, 2007).
Uma questão importante na validação do modelo é a definição de seu domínio de
aplicabilidade. O domínio de aplicabilidade de um QSAR é o físico-químico, espaço estrutural ou
biológico, conhecimento ou informação sobre a qual o conjunto de treinamento do modelo foi
desenvolvido, e para o qual é aplicável a fazer previsões para novos compostos. Por
conseguinte, modelos QSAR estão associados a limitações quanto ao que eles podem ser
utilizada com segurança (Jaworska et al., 2005). Um QSAR válida será associado com pelo
menos um domínio de aplicabilidade definida, na qual o modelo faz estimativas com um
determinado nível de precisão (confiabilidade). Quando aplicado a produtos químicos dentro do
seu domínio de aplicabilidade, o modelo é considerado para dar resultados fiáveis (ECHA,
2008). O caso final de cair fora do domínio de aplicabilidade é afirmado no velho ditado em
ciências da computação: ". Garbage in, garbage out" Em outras palavras, a entrada de
inadequado (ou má qualidade) de dados vai dar resultados falsos.
Apesar dos avanços significativos de vários estudos de validação independentes, a
utilização de em ferramentas silico deve ser tomado cuidado no contexto da sua capacidade de
corrente devido à qualidade dos dados do bioensaio disponíveis, falta de compreensão
generalizada de construção do modelo (o dilema caixa preta), espaço limitado química dos
conjuntos de dados de formação (isto é, domínio de aplicabilidade limitada), e elevado potencial
de vários mecanismos de toxicidade do composto que não pode actualmente ser modelados.
Estas incertezas na tecnologia não tornam as abordagens inútil, mas apontam que deve ser
cuidadosamente levado em consideração. Pode haver um equilíbrio viável em termos de
plataformas computacionais customizadas propícia para a identificação de perigos e processos
de caracterização de risco para a obtenção de desempenho desejado de um modelo (por
exemplo, sensibilidade versus especificidade; Valerio, 2009).

Implementação

Embora o progresso técnico foi rápido, a aceitação regulamentar de abordagens QSAR

tem sido lento. A situação está mudando, como há agora uma necessidade regulamentar claro
para o uso de QSAR. A melhoria nas tecnologias silico em toxicologia reguladora apresenta uma
oportunidade para colmatar o défice de comunicação entre toxicologistas e especialistas QSAR.
O extenso trabalho que está em curso para desenvolver ainda mais a compreensão mecanicista
de efeitos toxicológicos observados in vivo e in vitro é uma razão para otimismo.
Atualmente não há internacionalmente aceites em alternativa silico no sentido de uma
substituição completa para todos os testes de um perigo específico. Utilização regulamentar até
agora tem sido limitado principalmente para priorização de demandas de teste ou preencher
lacunas de dados em alguns casos, especialmente para baixos de produtos químicos de risco
(Hartung e Hoffmann, 2009). Sublinhe-se que as estimativas QSAR já são utilizados
rotineiramente para prever alguns parâmetros destino-chave ambientais de substâncias
orgânicas, em parte porque a determinação experimental destes parâmetros pode ser difícil e /
ou caro, e em parte porque a informação não é normalmente exigido na regulamentação
submissões (ECHA, 2008).
O regulamento REACH deixa muito espaço para implementação prática de em
ferramentas in silico (CE, 2006.EuropeanComm: 2006; Schaafsma et al., 2009). Classificação
das substâncias, especialmente para substâncias existentes de volume de alta produção,
baseadas somente na toxicologia computacional é nesta fase altamente improvável,
especialmente desde a implementação de regulamentação é um processo de consenso renúncia
ampla de testes para o REACH por causa da negativa no resultado silico também é bastante
improvável, uma vez que os sistemas celulares nem validados são geralmente aceites para este.
O uso mais provável no médio prazo será a combinação inteligente de in vitro, in silico, e em
informações vivo (Hartung e Hoffmann, 2009).
O processo de aceitação QSAR no âmbito do REACH implicará aceitação inicial por parte
da indústria e de uma avaliação posterior por parte das autoridades, numa base caso-a-caso.
não está previsto que haverá um processo de adoção formal, da mesma forma que os métodos
de ensaio são actualmente adoptadas na União Europeia e da OCDE. Em outras palavras, não é
de esperar que haverá uma lista oficial e juridicamente vinculativo de métodos QSAR (ECHA,
2008).
Os princípios REACH induziu o surgimento de um programa comparável do ToxCast US
EPA chamado (US EPA2). ToxCast promove "a aplicação de Computacional Toxicologia para
avaliar os produtos químicos de risco representa para a saúde humana eo ambiente." A ênfase
atual no programa ToxCast, que usa uma variedade de testes de alto rendimento e em métodos
in silico, é sobre a priorização de compostos para o alvo testes em animais.
Assim, as autoridades reguladoras da UE e EUA concordam sobre a necessidade de
modernizar testes toxicológicos, mas eles tomaram um tanto diferentes abordagens. Vários
esforços de cooperação trans-atlântica já estão no local para ajudar a preencher a lacuna. a
colaboração na investigação foi entre a Agência de Proteção Ambiental (EPA) e do Instituto do
Centro Comum de Investigação da Comissão Europeia para a Saúde e Defesa do Consumidor
(IHCP). O tema comum desta colaboração, com base na partilha de dados perfil toxicológico de
alto rendimento e dados de estratégias de ensaio integradas baseadas em computacional e
métodos in vitro, é a mudança em direção a uma "avaliação de perigos, com base pathway
toxicológico" (IHCP, 2010.Institutef: 2010 ).
Uma grande variedade de ferramentas computacionais disponíveis publicamente e
comerciais tem sido desenvolvida que são adequados para o desenvolvimento e aplicação de
QSAR. Essas ferramentas incluem métodos para uma série de tarefas relacionadas com a
QSAR, incluindo a gestão de dados e mineração de dados, geração de descritor, análise de
similaridade molecular, a busca analógico e avaliação dos perigos. Devido à disponibilidade
limitada de livre acesso no software silico, há uma necessidade de desenvolver uma gama de
ferramentas transparentes e de código aberto, que deve, eventualmente, estar disponíveis para
todos os intervenientes no processo de regulamentação (especialmente a indústria e as
autoridades). Um bom exemplo de tal ferramenta de acesso aberto é a caixa de ferramentas (Q)
Aplicação SAR desenvolvido pela OCDE.
Tabela 11 lista exemplos de projetos, organizações e software de acesso aberto a
promoção do uso de métodos em silico em toxicologia. listas mais completas estão disponíveis
em artigos de revisão (Hou e Wang, 2008; Pelkonen et al, 2009;. Valerio, 2009; Wang, 2009;
Mostrag-Szlichtyng e Worth, 2010) e a orientação ECHA (ECHA, 2008). Uma extensa lista de
ferramentas em silico pode ser encontrada no Instituto Suíço de Bioinformática Click2Drug
homepage3.
Prós e contras de em abordagens in silico
Tal como acontece com quaisquer abordagens de teste, métodos sem ensaios têm os
seus prós e contras. De acordo com Valerio (2009), as vantagens destes métodos em
comparação com in vitro e in vivo, especialmente em abordagens incluem o seguinte:

um maior rendimento
menos caro
menos demorado
otimização constante possível
têm maior reprodutibilidade se o mesmo modelo é usado
têm requisitos de síntese de compostos de baixa
tem potencial para reduzir a utilização de animais
As limitações incluem (Weaver e Gleeson, 2008; Valerio, 2009):
dados experimentais qualidade e transparência da formação definida
transparência do programa (o que está sendo modelada?)
descritores por vezes confusa
domínio de aplicabilidade às vezes não é clara
características ADME, especialmente o metabolismo, não tidos em conta
previsão de carcinogenicidade não funciona em compostos não genotóxicos

Até à data, experiências positivas com abordagens QSAR (> 70% previsões corretas,
nomeadamente na sua maioria não validados com conjuntos de dados externos) foram relatados
principalmente para mutagenicidade, sensibilização e toxicidade em meio aquático, ou seja,
áreas com mecanismos relativamente bem compreendido, não para complexo / múltipla
endpoints. Hepatotoxicidade, neurotoxicidade e toxicidade para o desenvolvimento não pode ser
previsto com precisão com nos métodos in silico. Aqui, a perspectiva reside na quebra de
parâmetros complexos em diferentes etapas ou caminhos com o problema comum de como
validar estes e colocá-los juntos para fazer uma previsão (Hartung e Hoffmann, 2009; Merlot,
2010).
 Conclusão
"In silico ferramentas têm um futuro brilhante em toxicologia. Eles acrescentam a
objectividade e as ferramentas para avaliar nossa caixa de ferramentas. Eles ajudam a combinar
várias abordagens de maneiras mais inteligentes do que uma bateria de testes "(Hartung e
Hoffmann, 2009).

É evidente que os requisitos para reduzir a experimentação animal no REACH e leis

semelhantes em outras partes do mundo, juntamente com o rápido progresso tecnológico e
incentivos económicos, são os principais motores de promover o uso de métodos em silico.
Atualmente eles desempenham um papel no fornecimento de informações mecanicista e, assim,
explicando sistemas subjacentes, mas também na identificação de necessidades de testes e
definição de prioridades de teste. Todo o processo de execução, nos métodos in silico em uso
regulatório está evoluindo rapidamente. Num futuro próximo, vamos ver mais e mais resultados
em métodos in silico sejam incluídas nos documentos de avaliação de risco como suporte de
dados.
As metodologias de avaliação de riscos atuais para produtos químicos sobre endpoints
toxicidade humanos são muitas vezes derivados daqueles para os estudos pré-clínicos de
produtos farmacêuticos. Obviamente, os métodos de avaliação dos perigos são praticamente os
mesmos para produtos químicos industriais, pesticidas e drogas candidatos. É provável que, em
métodos in silico irá ser cada vez mais utilizada para a substituição directa dos dados de ensaio,
como modelos relevantes e fiáveis se tornam disponíveis, e como a experiência na sua
utilização torna-se mais generalizada. Em um futuro mais distante, bem podemos testemunhar
uma substituição gradual de algumas clássica em testes in vivo por in vitro e in silico métodos.
Alguns em ferramentas in silico de ser útil, mas não amplamente disponíveis, devido à sua
natureza proprietária. Outras ferramentas são actualmente em desenvolvimento, ou terá de ser
desenvolvido no futuro próximo.
Idealmente, no resultado de silico pode ser usado como prova stand-alone para efeitos
regulamentares se forem considerados pertinentes, fiáveis e adequados para o efeito, e se eles
são documentados corretamente. Na prática, pode haver incerteza em um ou mais destes
aspectos, mas isso não exclui a utilização da estimativa in silico no contexto de uma abordagem
de provas, em que a informação adicional compensa as incertezas resultantes de uma falta de
informação no método in silico.
 o método não-teste prazo, embora provavelmente politicamente correto, é enganosa, no
sentido de que um monte de in vivo e in vitro de testes tem ido para gerar esses métodos, e terá
de fazê-lo no futuro também.
Declaração de conflito de interesse
O autor declara que a pesquisa foi conduzida na ausência de quaisquer relações
comerciais ou financeiras que possam ser interpretadas como um potencial conflito de
interesses.