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El poder de resolución del microscopio es la capacidad de los lentes de mantener separado dos puntos que a simple vista parece uno solo.
Cuando la distancia entre los puntos disminuye se llega a un límite a partir del cual ya no se ven los puntos en forma separada, sino unidos. En ese momento
se ha alcanzado el límite de resolución del microscopio.
Ponga una gota de agua en el centro del portaobjetos, y sobre ella, con una pinza, coloque una pequeña letra”e” cortada del periódico. Deje
que la letra e humedezca antes de colocar el cubreobjetos. Siguiendo las instrucciones del punto D proceda a enfocarla en bajo poder y
luego con el objetivo de mayor aumento.
Observe que la imagen consiste de un número regular de puntos. ¿Qué diferencias observa en cuanto al numero de puntos y su proximidad
entre si? A través del microscopio se observo varios puntos.
¿Que objetivo tiene mayor poder de resolución? 40x.
¿Por qué? Cuando se observa con el de 40 se observo más.
examinar objetos transparentes, o cortados en láminas tan finas que se transparentan. tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar
las imágenes de objetos y organismos no visibles a simple vista.
El microscopio sirve para localizar e identificar bacterias, virus que causan enfermedades, estudios de la sangre, de la orina, de exudado,
examina todo lo que se quiera y que el ojo humano no puede ver a simple vista.
Regula la cantidad de luz que ingresa hacia la preparación. Diafragma: el condensador está provisto de un diafragma-iris, que regula su
abertura para ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para aumentar el contraste, lo que se hace cerrándolo más de lo
que conviene si se quiere aprovechar la resolución del sistema óptico.
Diferencias
Existen varios tipos de microscopios electrónicos, que cada día se perfeccionan más.
El microscopio electrónico de transmisión que utiliza un haz de electrones acelerados por un alto voltaje (cien mil voltios). Este haz ilumina una sección
muy fina de la muestra, sean tejidos, células u otro material.
El microscopio electrónico de barrido se utiliza para el estudio de la morfología y la topografía de los elementos. Estos instrumentos utilizan voltajes
cercanos a los 20.000 voltios. Las lentes magnéticas utilizan un haz muy fino de electrones para penetrar repetidamente la muestra, y se produce una imagen
ampliada de la superficie observada en la pantalla de un monitor. El microscopio electrónico mixto tiene propiedades comunes con el de transmisión y con el
de barrido y resulta muy útil para ciertas investigaciones. Hay otros microscopios analíticos que detectan señales características de los elementos que
constituyen la muestra.
Con estos poderosos instrumentos, que utilizan el flujo de electrones y las radiaciones electromagnéticas así como la aplicación de técnicas histoquímicas y
bioquímicas, además del empleo de marcadores radiactivos, se han logrado grandes avances en la biología celular.
Ambos pueden utilizarse para el examen microscópico de microorganismos. Para la mayoría de los análisis de rutina se usa el microscopio óptico, mientras
que para el exámen de las estructuras intracelulares se utiliza el electrónico como un complemento.
Todos los microscopios utilizan lentes para aumentar la imágen del tamaño de las estructuras y poder ver los detalles, pero la resolución (ver dos puntos
adyacentes como unidades distintas) es 100 veces mayor en el microscopio eléctronico que en el óptico.
"Microscopios ópticos":
también llamado "microscopio liviano
*de campo claro: formado por dos series de lente (objetivo y ocular) que funcionan conjuntamente para producir la imágen, aquí la muestra se visualiza por
contraste entre ella y el medio que la rodea. Se utilizan tinciones para favorecer el contraste. Se utilizan colorantes con cargados positivamente porque se
combinan con los componentes celulares que están cargados negativamente.
*de contraste de fases: aumenta el contraste, no hace falta teñir la célula porque se basa en los distintos índices de refracción entre la célula y el medio
desviando los rayos de luz; formándose una imágen oscura con un fondo brillante.
*campo oscuro:en este la luz incide sobre la muestra sólo desde los lados, la luz al ser dispersada por la muestra entra en el objetivo, observándose la
muestra brillante sobre el fondo oscuro.
"Microscopio electrónico":
*de transmición: se utilizan electrones en lugar de rayos de luz, y la función de las lentes la realizan electromagnetos, operándose al vacío. Tiene alta
resolución, pero los haces electrolitos poseen bajo poder de penetración por eso se utilizan técnicas de cortes ultrafinos. Para aumentar el contraste se
preparan las muestras con compuestos como el ácido ósmico, permanganato, uranio, lantano o plomo porque desvían adecuadamente los electrones.
*de barrido: la muestra se recubre con una fina capa de un metal pesado, como el oro. el haz de electrones barre la superficie de la muestra, los electrones
desviados por la capa de metal son recogidos y proyectados sobre una pantalla para producir una imágen.
"Todos los microscopios electrónicos incorporan cámaras que permiten fotografiar las muestras".
MICROSCOPIO MICROSCOPIO
DE LUZ ELECTRONICO
Iluminación Haz de luz Haz de electrones
Longitud de onda 2000 Å - 7500 Å 0.037 Å - 0.086 Å
L1.- a coloraciòn o tinciones en microbiologia, consiste en cubrir las preparaciones con uno o varios colorantes de forma secuencial durante un tiempo
determinado. Existen las tinciones simples que se usan para observar la morfologìa y el agrupamiento bacteriano, entre los colorantes tenemos el azul de
metileno, cristal violeta y fuscina.
las tinciones dobles o diferidos; se usan para poner de manifiesto diferencias entre microorganismos o parte de ellos, la tinciòn de gram, es la màs
utilizada en Microbiologìa, ya que diferencia a las bacterias en gram positivas y gram negtivas, segùn retengan el cristal violeta utilizado en la tinciòn, las
gram negativas no retienen el cristal violeta cuando son decoloradas por una mezcla de alcohol y acetona.
Un colorante es una sustancia que es capaz de teñir las fibras vegetales y animales. Los colorantes se han usado desde los tiempos más remotos,
empleándose para ello diversas materias procedentes de vegetales (cúrcuma, índigo natural, etc.) y de animales (cochinilla, moluscos, etc.) así como
distintos minerales.
En química, se llama colorante a la sustancia capaz de absorber determinadas longitudes de onda de espectro visible.Los colorantes son sustancias que se
fijan en otras sustancias y las dotan de color de manera estable ante factores físicos/químicos como por ejemplo: luz, lavados, agentes oxidantes, etc
Carbón vegetal Grises
Anato y extracto pimentón
BetaninaLa Betanina, rojo remolacha ó colorante E-162 es una sustancia que consiste en el extracto
acuoso de la raíz de la remolacha roja Beta vulgaris. Se extrae generalmente tras la cocción en agua, y
presenta un color rosado.
Estos compuestos extraídos de la remolacha son utilizados generalmente en la industria de la
alimentación como colorante para ciertos postres, como las gelatinas o el yogur de frutas rojas.
Este colorante también se usa para pigmento de pinturas.
En microbiología, se denominan bacterias Gram positivas a aquellas bacterias que se tiñen de azul
oscuro o violeta por la tinción de Gram: de aquí el nombre de "Gram-positivas" o también
"grampositivas".1 Esta característica Química está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura
celular por lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. Son uno de los principales grupos
de bacterias, y cuando se tratan como taxón se utiliza también el nombre de Posibacteria.2 Las restantes
son las bacterias Gram negativas.
La envoltura celular de las bacterias Gram-positivas comprende la membrana citoplasmática y una pared
celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglucano, que rodea a la anterior. La pared celular se
une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico. La capa de peptidoglicano
confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tinción de
Gram. A diferencia de las Gram-negativas, las Gram-positivas no presentan una segunda membrana
lipídica externa a la pared celular y esta pared es mucho más gruesa.3
Incluyen especies tanto móviles (vía flagelos) como inmóviles con forma de bacilo (Bacillus,
Clostridium, Corynebacterium, Lactobacillus, Listeria) o coco (Staphylococcus, Streptococcus); con
gruesas paredes celulares o sin ellas (Mycoplasma). Algunas especies son fotosintéticas, pero la mayoría
son heterótrofas. Muchas de estas bacterias forman endosporas en condiciones desfavorables.4
Realmente, no todas las bacterias del grupo son Gram-positivas (no se tiñen por la aplicación de ese
método), pero se incluyen aquí por su similitud molecular con otras bacterias Gram-positivas.
Contenido
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1 Estructura
2 Filogenia de las bacterias Gram-positivas
3 Referencias
4 Véase también
[editar] Estructura
Bacterias Gram-positivas Bacillus anthracis (bastones púrpuras) en una muestra de fluido cerebroespinal. Las
otras células son leucocitos.
La célula bacteriana está rodeada por una envoltura que, observada al microscopio electrónico, se
presenta como una capa gruesa y homogénea, denominada pared celular. Luego en sección (corte) se
observa una estructura semejante a dos líneas paralelas separando una capa menos densa; esto
corresponde a la membrana plasmática. Entre la membrana plasmática y la pared celular se encuentra el
periplasma o espacio periplasmático. En el interior de la membrana plasmática se encuentra el
citoplasma que está constituido por una disolución acuosa, el citosol, en el cual se encuentran ribosomas
y otros agregados de macromoléculas, y en el centro se ubica la zona menos densa llamada nucleoide,
que contiene una madeja de hebras difícil de resolver (distinguir) y cuyo principal componente es el
ADN.
La pared externa de la envoltura celular de una bacteria Gram positiva tiene como base química
fundamental el peptidoglicano, que es un polímero de N-acetil-2-D-glucosamina, unido en orientación
ß-1,4 con N-acetil murámico, a éste se agregan por el grupo lactilo cuatro o más aminoácidos. Esta
molécula se polimeriza gran cantidad de veces, de modo que se forma una malla especial, llamada
sáculo de mureína. Dicho compuesto es de vital importancia para conservar la forma y darle rigidez a la
célula bacteriana (si este compuesto no existiese, la célula reventaría debido a su gran potencial
osmótico).
Las siguientes características están presentes generalmente en una bacteria Gram-positiva:5
Membrana citoplasmática.
Capa gruesa de peptidoglicano.
Ácidos teicoicos y lipoteicoicos, que sirven como agentes quelantes y en ciertos tipos de adherencia.
Polisacáridos de la cápsula.
Si algún flagelo está presente, este contiene dos anillos como soporte en oposición a los cuatro que
existen en bacterias Gram-negativas porque las bacterias Gram-positivas tienen solamente una capa
membranal.
Tanto las bacterias Gram-positivas como las Gram-negativas pueden presentar una capa superficial
cristalina denominada capa S. En las bacterias Gram-negativas, la capa S está unida directamente a la
membrana externa. En las bacterias Gram-positivas, la capa S está unida a la capa de péptidoglicano. Es
único a las bacterias Gram-positivas la presencia de ácidos teicoicos en la pared celular. Algunos ácidos
teicoicos particulares, los ácidos lipoteicoicos, tienen un componente lipídico y pueden asistir en el
anclaje del péptidoglicano, en tanto el componente lipídico sea integrado en la membrana.
Imagen microscópica de una bacteria Gram Negativa Pseudomonas aeruginosa (los puntos rosas-rojos).
Comparación de las envolturas celulares bacterianas. Arriba: Bacteria Gram-positiva. 1-membrana
citoplasmática, 2-peptidoglicano, 3-fosfolípidos, 4-proteínas, 5-ácido lipoteicoico.
Abajo: Bacteria Gram-negativa. 1-membrana citoplasmática (membrana interna), 2-espacio periplasmático, 3-
membrana externa, 4-fosfolípidos, 5-peptidoglicano, 6-lipoproteína, 7-proteínas, 8-lipopolisacáridos, 9-porinas.
1 Estructura
2 Patogenia y tratamiento
3 Filogenia de las bacterias Gram-negativas
4 Referencias
5 Véase también
[editar] Estructura
La envoltura celular de las bacterias Gram-negativas está compuesta por una membrana citoplasmática
(membrana interna), una pared celular delgada de peptidoglicano, que rodea a la anterior, y una
membrana externa que recubre la pared celular de estas bacterias.4 Entre la membrana citoplasmática
interna y la membrana externa se localiza el espacio periplásmico relleno de una sustancia denominada
periplasma, la cual contiene enzimas importantes para la nutrición en estas bacterias.
La membrana externa contiene diversas proteínas, siendo una de ellas las porinas o canales proteícos
que permiten el paso de ciertas sustancias. También presenta unas estructuras llamadas lipopolisacáridos
(LPS), formadas por tres regiones: el polisacárido O (antígeno O), una estructura polisacárida central
(KDO) y el lípido A (endotoxina).
Las bacterias Gram-negativas pueden presentar una capa S que se apoya directamente sobre la
membrana externa, en lugar de sobre la pared de peptidoglicano como sucede en las Gram-positivas. Si
presentan flagelos, estos tienen cuatro anillos de apoyo en lugar de los dos de las bacterias Gram-
positivas porque tienen dos membranas. No presentan ácidos teicoicos ni ácidos lipoteicoicos, típicos de
las bacterias Gram-positivas. Las lipoproteínas se unen al núcleo de polisacáridos, mientras que en las
bacterias Gram-positivas estos no presentan lipoproteínas. La mayoría no forma endosporas (Coxiella
burnetti, que produce estructuras similares a las endosporas, es una notable excepción).
Muchas especies de bacterias Gram-negativas causan enfermedades. Una de las varias características
únicas de las bacterias Gram-negativas es la estructura de la membrana externa. La parte exterior de la
membrana comprende un complejo de lipopolisacáridos cuya parte lípida actúa como una endotoxina y
es responsable de la capacidad patógena del microorganismo.1 Este componente desencadena una
respuesta inmune innata que se caracteriza por la producción de citocinas y la activación del sistema
inmunológico. La inflamación es una consecuencia común de la producción de citocinas, que también
pueden producir toxicidad. Si la endotoxina entra en el sistema circulatorio, provoca una reacción tóxica
con aumento de la temperatura y de la frecuencia respiratoria y bajada de la presión arterial. Esto puede
dar lugar a un shock endotóxico, que puede ser fatal.
Esta membrana externa protege a las bacterias de varios antibióticos, colorantes y detergentes que
normalmente dañarían la membrana interna o la pared celular de peptidoglicano. La membrana externa
proporciona a estas bacterias resistencia a la lisozima y a la penicilina. Afortunadamente, se han
desarrollado otros tratamientos alternativos para combatir la membrana externa de protección de estos
patógenos, tales como la lisozima con EDTA, y el antibiótico ampicilina. También pueden usarse otras
drogas, a saber, cloranfenicol, estreptomicina y ácido nalidíxico
Árbol filogenético de los seres vivos considerando que las bacterias Gram-positivas (Posibacteria) se han
originado a partir de las Gram-negativas (Negibacteria), de acuerdo con las ideas de Cavalier-Smith.5 2
Dentro del grupo de las bacterias Gram-negativas podemos distinguir dos subgrupos: Eobacteria y
Glycobacteria que se distinguen por la composición de la membrana externa. En los primeros, la
membrana externa presenta solo simples fosfolípidos, mientras que en los segundos además presenta la
inserción de moléculas complejas de lipopolisacáridos (la estructura típica descrita anteriormente). Por
ello se considera que Eobacteria son las bacterias más primitivas. Incluye a Chlorobi (bacterias
fotosintéticas anoxigénicas) y a Deinococcus-Thermus (quimiorganotrofos extremófilos); estos últimos,
aunque dan positivo en la tinción de Gram son estructuralmente similares a las bacterias Gram-
negativas.
El resto de las bacterias Gram-negativas se clasifican en Glycobacteria. Las proteobacterias son uno de
los grupos principales, incluyendo a Escherichia coli, Salmonella y otras enterobacterias, Pseudomonas,
Moraxella, Helicobacter, Stenotrophomonas, Bdellovibrio, bacterias del ácido acético, Legionella y las
proteobacterias alfa como Wolbachia y muchas otras. Otros grupos notables son las cianobacterias,
espiroquetas y las bacterias verdes del azufre y no del azufre.
No está claro que la segunda membrana sea una característica primitiva o derivada. Si fuese primitiva,
las bacterias Gram-negativas serían las primeras bacterias en originarse con las Gram-positivas
derivándose a partir de ellas. Cavalier-Smith5 2 considera que la doble membrana es una característica
primitiva y que la segunda membrana se perdió al crecer la pared de peptidoglicano que impide la
transferencia de lípidos para formar la membrana externa. La hipótesis del citoplasma fuera describe un
posible modelo para la aparición de la doble membrana de las bacterias Gram negativas.