Informe Laboratorio #1

Maria Camila Parra Santos 1015445313

Universidad Central. Facultad de Ingeniería, Ingeniería Ambiental, Biogeoquímica
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Columna de Winogradsky

Winogradsky column

Resumen

El propósito de este experimento es la

caracterización y seguimiento de la columna
de Winogradsky elaborada en el laboratorio Palabras clave
con diferentes materiales orgánicos e
inorgánicos fundamentales para el óptimo Ecosistema, Aeróbia, Microaerófila,
desarrollo durante el tiempo determinado. Anaeróbia, reductor, fermentador,
Los desechos orgánicos e inorgánicos fueron metabolismo, microorganismos, fotosíntesis,
recolectados en el Rio Soacha. Luego de sulfuros.
realizar el montaje, se hicieron diferentes
determinaciones del a partir de los factores Keywords
de sedimentación, aspecto, colores y olores
presentes acorde a la evolución semanal de Ecosystem, Aerobic, Microaerophilic,
la columna, donde se encontraron diferencias Anaerobic, reducer, fermentor, metabolism,
significativas debido a la actividad microbiana microorganisms, photosynthesis, sulfides.
y a las condiciones ambientales generadas
en este sistema. Introducción

Abstract Todas las formas de vida existentes en la

The purpose of this experiment is the
characterization and monitoring of the
Winogradsky column elaborated in the
laboratory with different organic and inorganic
materials fundamental for the optimum
development during the determined time. The
organic and inorganic wastes were collected
in the Rio Soacha. After the assembly,
different determinations of the sedimentation
factors, appearance, colors and odors were
carried out according to the weekly evolution
of the column, where significant differences
were found due to the microbial activity and
the environmental conditions generated in
this system.
Tierra dependen de reacciones de oxidación
y reducción
que operan mediante transferencia de
electrones (Fernández M, 2017). En los
sistemas vivos, las reacciones redox
aparecieron originalmente en
microorganismos procariotas y forman en la
actualidad un sistema complejo dentro de la
biosfera. Para mantener este sistema vital a
nivel planetario se necesita que las
sustancias oxidantes y las reductoras estén
de algún modo conectadas, permitiendo la
continuidad del metabolismo global
(Fernández M, 2017).
La oxidación de la superficie terrestre es
análoga a la ordenada formación de capas
microbianas que se forma en una columna de
Winogradsky de abajo hacia arriba. En ella
se desarrollan estructuras espacialmente
organizadas que representan la evolución
secuencial del metabolismo microbiano y que
parecen recapitular los estados de oxidación
biogeoquímica. En este sistema, los
microorganismos de las capas microbianas
se auto-organizan y cada grupo se sitúa en la
columna acuosa a lo largo del potencial
redox y de productos generados, como el
oxígeno, dióxido de carbono, gases
nitrogenados y azufrados o el hidrógeno.
Mientras que en una columna de
Winogradsky el fenómeno ocurre a escala
local y en poco tiempo, lo mismo ha sucedido
a escala global a lo largo de los tiempos.
En el metabolismo microbiano se realizan
una serie de procesos fisicoquímicos al
interior de los microorganismos y con su
entorno, permitiendo una regulación de las
necesidades biológicas, obteniendo así la
energía suficiente para sobrevivir (Álvarez S,
2016).
La columna de Winogradsky es un sistema
acuático en el que los microorganismos se
establecen en regiones diferenciadas según
su metabolismo y constituye un modelo de
ecosistema, similar a los tapetes microbianos
que se hallan en aguas dulces
o saladas, donde proliferan microorganismos
del medio acuático y de los sedimentos
(Prada J, 2011). Es un instrumento que sirve
para estudiar las relaciones entre
microorganismos, comunidades mixtas y
metabolismos energéticos variables.
La columna de Winogradsky presenta
diferentes estratificaciones. En la zona
inferior, en ausencia de oxígeno, se
desarrollan microorganismos anaeróbios de
actividades fermentativas produciendo como
subproductos de su metabolismo alcohol,
ácidos orgánicos, ácido sulfhídrico, metano,
hidrógeno y ácidos grasos que sirven como
sustrato para el desarrollo de bacterias
reductoras de sulfato. Los subproductos
liberan productos sulfurados que se
expanden a la capa superior creando
intercambios de sulfuro de hidrógeno en
diferentes concentraciones en cada capa;
luego las bacterias rojas (bacterias rojas del
azufre), púrpuras y verdes (bacterias verdes
del azufre), se estratifican de acuerdo a su
tolerancia al sulfuro de hidrógeno, en el
medio de esta zona se ubican bacterias rojas
y verdes no del azufre. En la zona media,
Microaerófila, se hallan bacterias oxidado-
reductoras aerobias y bacterias fotosintéticas
que usan los compuestos químicos para su
metabolismo. Una capa superior, pueden
hallarse organismos aeróbicos como algas
verdes eucariotas y cianobacterias que
liberan oxígeno y mantienen esta zona de la
columna aeróbica, dichos organismos crecen
rápidamente en esta capa de la columna
(Moreno,2012) (Santos, 2009)
La columna de Winogradsky presenta un
enfoque sobretodo, al ciclo del azufre, pero
se podría desarrollar igualmente a la
reproducción de otros ciclos biogeoquímicos
equivalentes para carbono, hidrogeno y otros
elementos. Es un sistema complejo, y
autónomo mantenido por energía lumínica.
Materiales y Métodos
Este experimento se ha realizado en
diferentes etapas que consisten en:
Primer etapa, montaje: Se recolecto una
cantidad de suelo determinada (500g)
provenientes del Rio Soacha, calculando una
capacidad 1/3 de volumen total para ocupar
un envase plástico, se trituró 1g de cascaras
de huevo, que fueron adicionados a la
cantidad de suelo junto con dos tipos de
sales determinadas por el docente (CaSO 4,
KHPO4), papel finamente cortado y yema de
huevo desmenuzada para luego generar una
mezcla homogénea ocupando la capacidad
de 1/3 del envase plástico. Luego, dentro del
sustrato homogenizado se enterraron dos
tornillos de hierro y se añadió agua hasta
llegar a una altura de 10 cm por debajo del
borde del envase marcando el limite sobre el
envase para luego sellarlo con papel vinipel.
Es importante agitar levemente la solución
con una varilla de vidrio para eliminar las
burbujas de aire (Gómez R, 2017).
Segunda etapa, recuento de poblaciones
microbianas:
Se Marcaron diferentes cajas Petri y tubos de
ensayo de NaCl con marcador, indicado las
diluciones a cultivar y los demás datos del
montaje. Se extrajeron 10 mL de la columna
de Winogradsky y fueron diluidos en 90 ml
de NaCl (0,85%) en el Erlenmeyer esto fue
mezclado. Esta suspensión representa la
dilución 10-1, posteriormente se tomó 1 ml de
la suspensión anterior con el pipeteador y se
agregó a uno de los tubos de 9 ml de NaCl.
Se agitaron los tubos de cada dilución una
vez realizada. Posteriormente se realizó el
mismo procedimiento hasta llegar a la
dilución 10-4 . De las últimas dos diluciones
se tomaron de cada una 100 µl
sembrándolos de forma masiva en una caja
Petri agar SPC que se utiliza para el
crecimiento de bacterias y se repitió el
procedimiento sembrando de forma masiva
en agar PDA utilizado para el crecimiento de
hongos y levaduras es importante resaltar
que el tiempo transcurrido entre la realización
de las diluciones y la siembra de las
muestras no excedió los 15 minutos para
evitar la contaminación de las muestras,
luego se dejó que la muestra se absorbiera
con las cajas tapadas durante
aproximadamente 15 minutos a temperatura
ambiente antes de invertir, finalmente se
Invirtieron las cajas e incubaron a 37 ± 2 ºC
durante 48 h para las bacterias en el agar
SPC y durante siete días para los hongos en
el agar PDA. (Gómez R, 2017).
Resultados y Análisis

Tabla 1. Seguimiento de los cambios presentados semanalmente en la columna de

Winogradsky

Semana Columna Observaciones

1 Durante la primera semana se realizó el montaje

con todos los materiales y el orden indicado por la
docente.
Las características principales que se pueden
describir son:

En este montaje inicial se observa que la muestra

de suelo se sedimento, que al agregar el agua una
parte del agua se mezcló con el suelo y por este
motivo se veía turbia de lo que estaba
principalmente debido a que el agua fue tomada del
Rio Soacha, cabe resaltar que ya viene con una
carga de microorganismos.
Al finalizar el montaje se marcó y almaceno la
columna en el laboratorio a temperatura ambiente, y
con presencia de luz solar.
 2 En la segunda semana, se puede evidenciar poca
turbidez en el agua, debido al estado de reposo en
este periodo de tiempo. También podemos
evidenciar que el nivel del agua supero el límite
marcado anteriormente, debido a la actividad de
microorganismos fototróficos diferentes procedentes
del agua o del barro utilizado. La superficie del barro
puede presentar en esta zona un ligero color
castaño. Esta es la parte de la columna más rica en
oxígeno y más pobre en azufre (UNAM, 2010).

Semana Columna Observaciones

3 Durante la tercer semana de evolución, pudimos

observar el cambio del color del agua debido a que
se torna de un color amarillento, también se
evidencia actividad biológica activa. Según la UNAM
(2011) la actividad biológica se da debido a la
degradación de la celulosa contenida en las tiras de
papel, este proceso de fermentación se debe a
bacterias del tipo Clostridium, bacterias
estrictamente anaerobias.
 4 Durante la cuarta semana de evolución se evidencia
un cambio muy notorio en la coloración del agua, ya
que pasa de un color amarillo claro a color negro
intenso, esto se debe a que las bacterias reductoras
del azufre utilizan los productos de la fermentación
generando grandes cantidades de H2S que
reaccionara con el hierro presente en la zona
anaerobia para producir sulfuro ferroso (UNAM,
2011).

También es importante resaltar que en el borde

superior en la columna se presenta una formación
colonial de color rojo- naranja, este tipo de
característica se atribuye a las bacterias reductoras
no del azufre.

Semana Columna Observaciones

5 Durante la quinta semana de evolución se evidencia
claramente el crecimiento abundante de una capa
de color verde, esto se genera debido a la presencia
de cianobacterias (organismos fotosintéticos). El
olor característico durante esta semana es muy
fuerte característico de la presencia de azufre.

6 En la semana 6 de evolución, se puede evidenciar

un cambio de la capa aerobia en relación a la
estructura que se evidenciada anteriormente en la
semana 5, al borde del envase se puede observar la
presencia de un color purpura, según Pérez, J
(2008) la pigmentación naranja se debe a la
presencia de bacterias del genero Rhodospirillum y
Rhodopseudonomas que no se desarrollan
completamente en presencia de H2S. El olor
caracteristico en esta semana no es muy fuerte.
 8 Se presenta un mayor desarrollo referente a la
composición de la capa verde característica de la
actividad biológica de organismos fotosintéticos
(cianobacterias) presentes en la zona aerobia de la
Columna. Debido al movimiento generado durante
la manipulación de la columna para el debido
seguimiento, se notó la presencia de un olor fuerte
característico del azufre. La presencia de burbujas
en la imagen se debe a la presencia de H 2S
necesario para las bacterias del genero
Amoemobacter (Salazar A, 2014)

9- 10 Durante las semanas 9 y 10, no se presenta un

cambio notorio referente a la semana anterior con
respecto a la actividad biológica presente en la capa
orgánica característica de la zona aerobia.

El olor característico del azufre desaparece

considerablemente, este fenómeno se debe a la
baja concentración de H2S elemental para el
metabolismo de las bacterias de genero beggiotoa y
Thiobacillus(Salazar A, 2014).
 11 En esta semana, se presenta una capa orgánica
más sólida y de mayor grosor la actividad biológica
presente en la zona Microaerofila y anaerobia es
muy escasa debido a la ausencia de colores
característicos de los géneros bacterianos
presentes en cada una de las fases presentes en
las zonas mencionadas, el olor presente en la
columna es característico del agua estancada. La
presencia de olores fuertes es nula.

12- 14 Durante estas semanas de finalización

experimental, se pueden presenciar un cambio
drástico en la capa orgánica de la columna, esta
condición puede ser factor de movimiento generado
por la manipulación del experimento. Aunque, se
puede resaltar que este sistema tiende a estabilizar
su actividad biológica en presencia de los elementos
químicos esenciales para el metabolismo de los
microorganismos, en este caso a la presencia de O 2
para organismos fotosintéticos presentes en la zona
aerobia.

No se percibieron olores al retirar el plástico

protector del envase y el nivel del agua permanece
en su punto de origen sin presentar cambios en su
coloración y en la sedimentación de la columna.
Evidencia de microorganismos

Tabla 2. Cultivo y seguimiento de poblaciones microbianas presentes en la columna de

Winogradsky

SPC CONCENTRACION 10^-4 OBSERVACIONES

Forma circular, puntiforme

Borde elevado

Presenta elevación plana

SPC CONCENTRACION 10^-3 OBSERVACIONES

Se presenta crecimiento abundante (forma de la

colonia).

Borde ondulado

Elevación plana
PDA CONCENTRACION 10^-3
PDA CONCENTRACION 10^-4
Conclusiones
 La ausencia de luz es un factor
indispensable en la evolución
durante la fase de experimentación,
por este motivo los procesos
presentes en cada una de las zonas
de la columna eran más lentos y la
por ende, la actividad de
microorganismos fotosintéticos no
fue de gran desarrollo.
 La manipulación generada en el
proceso de experimentación pudo
alterar algunas fases durante la
evolución, pero el sistema demostró
que a lo largo del tiempo puede
llegar a estabilizarse nuevamente.
 La estratificación en la columna de
Winogradsky es un factor que
OBSERVACIONES
Forma circular, puntiforme
Borde filamentoso
Colonias aterciopeladas, color verde, blanco(hongos)
Colonias color crema y color rojo en menor cantidad
OBSERVACIONES
Forma puntiforme
No presenta borde
Presencia de hongos aterciopelados( verde, blanco)
Colonias de color rojo( organismos unicelulares
ggggggggg
depende directamente de las
condiciones ambientales presentes
en cada una de las zonas, estas
condiciones son fundamentales en el
metabolismo y desarrollo de cada
uno de los géneros bacterianos
existentes en el sistema, ya que el
ciclaje de los elementos presentes
serán el producto para la aparición
de nuevas especies de
microorganismos y por consiguiente,
el sistema seguirá evolucionando.
 La columna de Winogradsky es una
demostración que explica la
adaptación de microorganismos en
espacios altamente específicos de
 acuerdo con interacción con el medio
ambiente y sus necesidades para la
supervivencia de las diferentes
especies.

Bibliografia

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Winogradsky-
http://www.um.es/acc/la-columna-de-
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 Prada J (2011), informe columna de

Winogradsky-
https://es.scribd.com/doc/211319139/
COLUMNA-DE-WINOGRADSKY-
INFORME-docx
 Alvares R (2016), análisis del
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microorganismos de la columna de
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http://www.colmayor.edu.co/archivos/
110anlisis_del_metabolismo_de__pe
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 UNAM, Practica 9. Estudio de la
diversidad microbiana en un
ambiente-
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/arc
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 Mecias N (2011), Columna de
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https://es.slideshare.net/nelson1704/
columna-de-winogradsky?
next_slideshow=1
 Salazar A ( 2014), Columna de
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http://www.academia.edu/8201405/C
OLUMNA_DE_WINOGRADSKY_1
 Malajovich A (2009), Analisis de la
columna de Winogradsky-
https://bteduc.com/guias_es/28_Anali
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.pdf