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La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis óptico más usado en el área de

investigación. Es la medida de la cantidad de energía radiante absorbida por las moléculas de una
muestra en función de las longitudes de onda específicas.
La espectrofotometría es un método científico utilizado para medir cuanta luz absorbe una
sustancia química, midiendo la intensidad de la luz cuando un haz luminoso pasa a través de
la solución muestra,

La radiación electromagnética es un tipo de campo electromagnético variable es decir

está formado por la combinación de campos eléctricos y magnéticos oscilantes, que se
propagan a través del espacio en forma de ondas portadoras de energía.

Las ondas electromagnéticas tienen las vibraciones perpendiculares a la dirección de

propagación de la onda. Por tal motivo, se las clasifica entre las ondas transversales.

Las ondas electromagnéticas viajan a través del espacio, y no necesitan de un medio

material para propagarse.

El campo eléctrico es perpendicular al campo magnético

El físico escocés, James Clerk Maxwell fue el primero en hacer la observación teórica de que un campo electromagnético v
admite una solución cuya ecuación de movimiento se corresponde a la de una onda
El espectro electromagnético(o simplemente espectro) es el rango de todas las
radiaciones electromagnéricas posibles. El espectro de un objeto es la
distribución característica de la radiación electromagnética de ese objeto.

El espectro electromagnético se extiende desde las bajas frecuencias usadas para

la radio moderna (extremo de la onda larga) hasta los rayos gamma (extremo de
la onda corta), que cubren longitudes de onda de entre miles de kilómetros y la
fracción del tamaño de un átomo. Se piensa que el límite de la longitud de onda
corta está en las cercanías de la longitud Planck, mientras que el límite de la
longitud de onda larga es el tamaño del universo mismo, aunque en principio el
espectro sea infinito y continuo.
El espectro electromagnético es el conjunto de longitudes de onda de todas las radiaciones
electromagnéticas. Incluye:
Los rayos gamma tienen las longitudes de onda más cortas y las frecuencias más altas conocidas. Son
ondas de alta energía capaces de viajar a larga distancia a través del aire y son las más penetrantes.
Los rayos X tienen longitudes de onda más largas que los rayos gamma, pero menores que la radiación
ultravioleta y por lo tanto su energía es mayor que la de estos últimos. Se utilizan en diversas aplicaciones
científicas e industriales, pero principalmente utilizan en la medicina como la radiografía. Consisten en una
forma de radiación ionizante y como tal pueden ser peligrosos. Los rayos X son emitidos por electrones del
exterior del núcleo, mientras que los rayos gamma son emitidos por el núcleo.
La radiación ultravioleta (UV) se define como la porción del espectro electromagnético que se encuentra
entre los rayos X y la luz visible. Para más información haga clic aquí.
La luz visible —también espectro visible— es la parte de espectro electromagnético que los ojos humanos
son capaces de detectar. Cubre todos los colores del azul a 400 nm al rojo a 700 nm. La luz azul contiene
más energía que la roja.
La radiación infrarroja (IR) —también radiación térmica— es la parte del espectro electromagnético que se
encuentra entre la luz visible y las microondas. La fuente natural más importante de radiación infrarroja es el
Sol.
Las ondas radioeléctricas tienen longitudes de onda largas que varían unos pocos centímetros a miles de
kilómetros de longitud. Sus principales usos son en la televisión, los teléfonos móviles y las comunicaciones
por radio.
Fuente: https://es.khanacademy.org/science/physics/light-waves/introduction-to-light-
waves/a/light-and-the-electromagnetic-spectrum
http://www.espectrometria.com

Clases de espectrofotometrías
La espectrometría de absorción es una técnica en la cual la energía de un haz de luz se
mide antes y después de la interacción con una muestra.
Las palabras transmisión y remisión se refieren a la dirección de viaje de los haces de luz
medidos antes y después de la absorción. Las descripciones experimentales por lo
general asumen que hay una única dirección de incidencia de la luz sobre la muestra, y
que un plano perpendicular a esta dirección pasa por la muestra.

En la transmisión, la luz es dispersada desde la muestra hacia un detector en el lado opuesto de la

muestra. En la remisión, la luz es dispersada desde la muestra hacia un detector en el mismo lado
de la muestra.
La espectrometría de fluorescencia (también llamada fluorometría o
espectrofluorimetría) es un tipo de espectroscopia electromagnética que analiza la
fluorescencia de una muestra. Se trata de utilizar un haz de luz, por lo general luz
ultravioleta, que excita los electrones de las moléculas de ciertos compuestos y provoca
que emitan luz de una menor energía, generalmente luz visible (aunque no
necesariamente). Una técnica complementaria es la espectrometría de absorción.

Los dispositivos que miden la fluorescencia se llaman fluorómetros o fluorímetros

En la espectrometría de fluorescencia se utilizan dos tipos generales de
instrumentos:
* Fluorómetros de filtro. Utilizan filtros para aislar la luz incidente y la luz
fluorescente.
* Espectrofluorómetros. Usan monocromadores de retículo de difracción para
aislar la luz incidente y la luz fluorescente.

Ambos tipos de instrumentos utilizan el siguiente esquema. La luz de una fuente

de excitación pasa a través de un filtro o monocromador, e incide sobre la
muestra. Una parte de la luz incidente es absorbida por la muestra, y algunas de
las moléculas de la muestra producen una fluorescencia. La luz fluorescente es
emitida en todas las direcciones.

la espectrometría de absorción atómica es una técnica para determinar la

concentración de un elemento metálico determinado en una muestra. Puede utilizarse
para analizar la concentración de más de 62 metales diferentes en una solución.
La técnica hace uso de la espectrometría de absorción para evaluar la concentración de
un analito en una muestra. Se basa en gran medida en la ley de Beer-Lambert. En
resumen, los electrones de los átomos en el atomizador pueden ser promovidos a
orbitales más altos por un instante mediante la absorción de una cantidad de energía (es
decir, luz de una determinada longitud de onda). Esta cantidad de energía (o longitud de
onda) se refiere específicamente a una transición de electrones en un elemento
particular, y en general, cada longitud de onda corresponde a un solo elemento.

Como la cantidad de energía que se pone en la llama es conocida, y la cantidad restante

en el otro lado (el detector) se puede medir, es posible, a partir de la ley de Beer-
Lambert, calcular cuántas de estas transiciones tienen lugar, y así obtener una señal que
es proporcional a la concentración del elemento que se mide.
Para analizar los constituyentes atómicos de una muestra es necesario atomizarla. La
muestra debe ser iluminada por la luz. Finalmente, la luz es transmitida y medida por un
detector. Con el fin de reducir el efecto de emisión del atomizador (por ejemplo, la
radiación de cuerpo negro) o del ambiente, normalmente se usa un espectrómetro entre
el atomizador y el detector.
La espectrometría ultravioleta-visible o espectrofotometría UV-Vis implica la
espectroscopia de fotones en la región de radiación ultravioleta-visible. Utiliza la luz en
los rangos visible y adyacentes (el ultravioleta (UV) cercano y el infrarrojo (IR) cercano.
En esta región del espectro electromagnético, las moléculas se someten a transiciones
electrónicas.

Esta técnica es complementaria de la espectrometría de fluorescencia, que trata con

transiciones desde el estado excitado al estado basal, mientras que la espectrometría de
absorción mide transiciones desde el estado basal al estado excitado.
La espectrometría UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinación cuantitativa de
soluciones de iones metálicos de transición y compuestos orgánicos muy conjugados.

ESPECTROFOTÓMETRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE
El instrumento utilizado en la espectrometría ultravioleta-visible se llama
espectrofotómetro UV-Vis. Mide la intensidad de luz que pasa a través de una
muestra (I), y la compara con la intensidad de luz antes de pasar a través de la
muestra (Io). La relación I / Io se llama transmitancia, y se expresa
habitualmente como un porcentaje (%T). La absorbancia (A) se basa en la
transmisión:

A = - log (%T) }Un espectrofotómetro puede ser único o de doble haz. En un

instrumento de un solo haz (como el Spectronic 20), toda la luz pasa a través de la
célula muestra. La Io debe medirse retirando la muestra. Este fue el primer diseño, y
todavía está en uso en la enseñanza y laboratorios industriales.

En un instrumento de doble haz, la luz se divide en dos haces antes de llegar a la

muestra.
La espectrometría de infrarrojos (espectroscopia IV) es un tipo de espectrometría de
absorción que utiliza la región infrarroja del espectro electromagnético. Como las demás
técnicas espectroscópicas, puede ser utilizada para identificar un compuesto o investigar
la composición de una muestra.

La espectrometría infrarroja se basa en el hecho de que los enlaces químicos de las

sustancias tienen frecuencias de vibración específicas, que corresponden a los niveles de
energía de la molécula. Estas frecuencias dependen de la forma de la superficie de
energía potencial de la molécula, la geometría molecular, las masas atómicas y,
posiblemente, el acoplamiento vibracional.

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Las muestras líquidas pueden ser prensadas entre dos planchas de una sal de alta
pureza (como el cloruro de sodio). Estas placas deben ser transparentes a la luz
infrarroja para no introducir ninguna línea en el espectro de la muestra. Las
placas obviamente son solubles en agua, por lo que la muestra, los reactivos de
lavado y el medio deben ser anhidros (es decir, sin agua).
La espectrometría infrarroja se utiliza ampliamente tanto en la industria como en la
investigación científica, porque es una técnica rápida y fiable para medidas, control de
calidad y análisis dinámicos. Los instrumentos actuales son pequeños y pueden ser
transportados, incluso para tomar medidas de campo.
La espectrometría de emisión es una técnica espectroscópica que analiza las longitudes
de onda de los fotones emitidos por los átomos o moléculas durante su transición desde
un estado excitado a un estado de inferior energía. Cada elemento emite un conjunto
característico de longitudes de onda discretas en función de su estructura electrónica.
Mediante la observación de estas longitudes de onda puede determinarse la composición
elemental de la muestra. La espectrometría de emisión se desarrolló a finales del siglo
19, y los esfuerzos teóricos para explicar los espectros de emisión atómica condujeron a
la mecánica cuántica.
La espectrometría de rayos X es un conjunto de técnicas espectroscópicas para la
determinación de la estructura electrónica de materiales mediante el uso de excitación
por rayos X.
En un material, los rayos X pueden sufrir una pérdida de energía en comparación con el
haz de luz que entra. Esta pérdida de energía del haz re-emergente refleja una
excitación interna del sistema atómico, de forma análoga a la conocida espectrometría
Raman que se utiliza ampliamente en la región óptica.

En la región de los rayos X hay suficiente energía para producir cambios en el estado
electrónico (transiciones entre orbitales, lo que contrasta con la región óptica, donde la
pérdida de energía es a menudo debida a los cambios en el estado de rotación o los
grados de libertad vibracionales).
La espectrometría de resonancia magnética nuclear (RMN), más comúnmente conocida
como espectrometría RMN, es una técnica que explota las propiedades magnéticas de
ciertos núcleos. Las aplicaciones más importantes para su uso en química orgánica son la
espectrometría RMN de protones y la de carbono-13. En principio, la RMN es aplicable a
cualquier núcleo que posea espín.

Pueden obtenerse muchos tipos de información mediante un espectro RMN. Al igual que
se utiliza la espectrometría de infrarrojos para identificar grupos funcionales, el análisis
de un espectro RMN unidimensional proporciona información sobre el número y tipo de
entidades químicas en una molécula.
Puede utilizarse para comprender efectos dinámicos como el cambio en la temperatura
y los mecanismos de reacción, y es una herramienta de valor incalculable para la
comprensión de la estructura y función de las proteínas y los ácidos nucleicos. Este tipo
de espectrometría se puede aplicar a una amplia variedad de muestras, tanto en
solución como en estado sólido.

Absorbancia

También conocida como Densidad öptica (OD) la Absorbancia se define como la relación
(logarítmica) entre la intensidad de la luz que incide sobre una muestra y la intensidad de esa
misma luz que es transmitida a través de esa muestra. Cuando una luz de una longitud de onda
determinada, seleccionada por un filtro, incide sobre una muestra, parte de esa luz es absorbida.
La luz no absorbida pasa a través de la muestra y es recogida por un detector colocado en el otro
lado del pocillo de la microplaca, frente a la fuente de luz.

Transmitancia (T) La transmitancia se define como la cantidad de energía que atraviesa un cuerpo
en determinada cantidad de tiempo.

Ley de Lambert-Beer[editar]
La ley de Lambert-Beer afirma que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende de
la concentración en la solución.
Por ejemplo, en un vaso de vidrio tenemos agua con azúcar disuelta y en otro vaso
tenemos la misma cantidad de agua pero con mayor cantidad de azúcar en solución. El
detector es una celda fotoeléctrica, y lo que se mide es la concentración de la solución de
azúcar.
Según la ley de Beer, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso, la
cantidad de luz que saldría del otro lado sería mayor que si repitiéramos esto en el
segundo, ya que en este último las ondas electromagnéticas chocan contra un mayor
número de átomos o/y moléculas y son absorbidos por estos.2

El gráfico de la cantidad de radiación absorbida respecto a la longitud de onda para un

compuesto particular se conoce como espectro de absorción. El espectro de absorción
normalizado es característico para cada compuesto particular, no cambia con la
concentración y es como la "huella digital" química del compuesto. En las longitudes de
onda correspondientes a los niveles de energía resonantes de la muestra, se absorben
algunos de los fotones incidentes, lo que provoca una caída en la intensidad de transmisión
medida y una pendiente en el espectro. El espectro de absorción puede medirse usando
un espectrómetro. Conociendo la forma del espectro, la longitud de ruta óptica y la
cantidad de radiación absorbida, se puede determinar la estructura y la concentración del
compuesto.