La tetraciclina, antibiótico considerado como un contaminante recalcitrante, se eliminó con éxito del modelo

soluciones acuosas por lacasa inmovilizada de Trametes versicolor en un reactor de membrana enzimática.
Los resultados obtenidos muestran que la tetraciclina se agota de las soluciones de agua a temperatura
ambiente y
sin agregar productos químicos adicionales. La degradación de tetraciclina en soluciones acuosas a 20 mg L-1
durante 24 h, con cantidades equivalentes de biocatalizador libre o inmovilizado, permitió alcanzar una
tetraciclina
rendimiento de degradación del 56% con una membrana enzimática mientras que solo fue del 30% con lacasa
libre.
Este resultado destaca la buena reactividad y estabilidad de la enzima inmovilizada para la degradación de
tetraciclina. Además, el reactor de membrana enzimática fue capaz de alcanzar una tasa de degradación
constante
de 0.34 mg de tetraciclina por hora durante 10 días.

2.5)Los parámetros cinéticos aparentes de la ecuación de Michaelis-Menten (Km y

Vmax) (La cinética de Michaelis-Menten describe la velocidad de reacción de
muchas reacciones enzimáticas. Este modelo sólo es válido cuando la concentración
del sustrato es mayor que la concentración de la enzima, y para condiciones de estado
estacionario, es decir, cuando la concentración del complejo enzima-sustrato es
constante.) de lacasa libre e inmovilizada fueron estimados a partir de las
velocidades de reacción iniciales determinadas en experimentos por lotes usando
TC o ABTS(es un compuesto químico utilizado para observar
la cinética de reacción de enzimas específicas .) como sustrato. Todas las
reacciones se llevaron a cabo en 25 ◦C, con una concentración equivalente a 35 U
mL-1 de enzimas libres o a 20 U mL-1 de enzimas inmovilizadas. Se prepararon
soluciones TC en agua osmótica (pH 6) variando la concentración de 22.5 a 225
"M mientras que las soluciones ABTS se prepararon a 10, 15, 25, 50 y 100 μM en
un tampón citrato-fosfato 50 mM, pH 4.

 La estructura del soporte cerámico y la membrana activa era observado utilizando

microscopía electrónica de barrido (SEM) (Hitachi) S4500).
 La concentración de tetraciclina fue determinada por alto rendimiento
Cromatografía líquida acoplada a triple cuadrupolo espectrometría de masas
(HPLC-MS).
 Las muestras fueron inyectadas a través de una columna Onyx® C18 (25 mm ×
4.6 mm) con un Waters e2695 Módulo de separaciones, y el fragmento de 410 m /
z fue detectado con un micro API Micromass Quattro a 120 ◦C.
 La fase móvil utilizada fue hecha de agua de grado HPLC, 99% ácido fórmico y
acetonitrilo (74,9: 0,1: 25) a un caudal de 2 ml min-1.
 Las cantidad de TC se cuantificó con estándares de calibración preparados por
dilución de la solución madre de TC con 20% de etanol en ósmosis agua.
 La actividad de lacasa libre e inmovilizada se determinó a pH diferente conABTS como sustrato
 Una unidad de actividad (U) corresponde a la cantidad de enzimas necesarias para oxidar 1 "mol de
ABTS por minuto.

 El rendimiento de la inmovilización se determinó a partir de la diferenciaen actividad enzimática (U)

de la solución de lacasa antes y después del paso de inmovilización, teniendo en cuenta la actividad
 de la enzima medida en la solución después de la inmovilización y la totalidad de soluciones de
lavado (Ec. (2)).

 Fue calculado con los valores de masa inicial de enzimas en la solución de injerto y la masa de
enzimas inmovilizadas (Ec. (3)).

donde
 Agrafted: corresponde a la actividad de las enzimas inmovilizadasen la membrana,
 Ainitial: es la actividad de las enzimas en una lícuota de la solución inicial se dejó a temperatura
ambiente y se analizó con otras soluciones después del proceso de inmovilización,
 Aleft: es la actividad enzimática de la solución utilizada para el injerto después inmovilización de
enzimas.
 Arinsing es la actividad de las enzimas en el soluciones de enjuague
 Acondicionamiento de la actividad enzimática en el enjuaguesolución utilizada para la hidratación de
la membrana antes de usar el membrana enzimática para la degradación.
 P inmovilización corresponde al rendimiento de inmovilización de lacasa en la membrana cerámica
(%)

Las muestras de aguas residuales y ríos se filtraron a través de un vaso de 1 m

filtros de fibra seguidos de filtros de membrana de nailon de 0.45 m (Whatman,
U.K.),
Volumen apropiado de una solución de Na2EDTA, teniendo una concentración
de 0.1 M, se agregó a los diferentes tipos de agua para lograr una
concentración de 0.1% (g solución de soluto / g). Por otra parte, muestras de agua
se agregaron, con un volumen apropiado de una mezcla estándar
que contiene normas sustitutivas, a fin de tener una concentración de
200 ng / L en aguas residuales afluentes, 100 ng / L en aguas residuales efluentes,
50 ng / L y 25 ng / L en aguas de ríos y embalses, respectivamente, y
10 ng / L para mar y agua corriente.
Las muestras de agua fueron extraídas automáticamente por un GX-271
Sistema ASPECTM (Gilson, Villiers le Bel, Francia) utilizando Oasis HLB
cartuchos (200 mg, 6 ml) para aguas de mar y Oasis HLB (60 mg,
3 ml) para el otro tipo de matrices. Cartuchos SPE de 60 mg fueron
acondicionado con 5 ml de metanol seguido de 5 ml de HPLCgrade
agua a un caudal de 2 ml / min, mientras que cartuchos de 200 mg
se acondicionaron con 6 ml de metanol seguido de 6 ml de HPLCgrade
agua al mismo caudal. 25 ml de afluente y 50 ml de
aguas residuales efluentes se cargaron en el cartucho a un caudal
de 1 mL / min, mientras que 100 mL de agua de río y 200 mL de agua
se cargaron a 2 ml / min. Por otro lado, 500 ml de grifo y mar
el agua se cargó a 5 ml / min. Después de la preconcentración de la muestra,
los cartuchos se enjuagaron con 6 mL de agua de grado HPLC, a flujo
velocidad de 2 ml / min, y se secaron con aire durante 5 min, para eliminar
exceso de agua. Finalmente, los analitos se eluyeron con 6 ml de
metanol a una velocidad de flujo de 1 ml / min. Los extractos se evaporaron a
sequedad en un ambiente suave y regenerado y reconstituido con 1 mL
de metanol / agua (10:90, v / v). Finalmente, 10 L de un estándar de 1 ng / L
mezcla que contiene todos los estándares etiquetados isotópicamente se añadieron
en el extracto como estándar interno.