INFORME DE PRÁCTICA

LABORATORIO TALLER SIMULACIÓN CAMPO

NOMBRES: Darwin Llumigusín – María Isabel Sánchez

CARRERA: Ingeniería Bioquímica

ASIGNATURA: Ingeniería genética

NIVEL: 8 PARALELO: A

ÁREA ACADÉMICA: Profesional DOCENTE: Ing. Yunis Pérez

CICLO ACADÉMICO: Marzo 2017 – Septiembre 2017
PRÁCTICA N: 1

TEMA: “Extracción de ADN genómico con un mini kit Invitrogen y electroforesis

en gel de agarosa”

I. OBJETIVOS:

1.1 OBJETIVO GENERAL

1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

II. RESULTADOS OBTENIDOS:

(Ver página siguiente)

 Tabla 1. Descripción de los materiales empleados
Mini Kit Invitrogen
Termobloque
Microcentrífuga
Tampón TBE
Equipo de electroforesis
Fotodocumentador de luz UV

Tabla 2. Expresión de ADN mediante electroforesis.

Electroforesis obtenida en el
foto-documentador

MARCADOR
DE PESO
MOLECULAR
MUESTRA DE ADN DE LOS GRUPOS 1, 2 y 3

La extracción de ADN genómico mediante el uso de un mini kit Invitrogen, un método

novedoso y comercial, que es más práctico que los tradicionales. “La extracción de ADN
se realiza para obtener las moléculas aisladas con alto grado de pureza y poderlas
utilizar en investigación científica, en medicina o para la ciencia forense” (Wako, 2017).
La mayor parte de los métodos que existen para extraer el ADN consisten en lograr
primero la lisis o ruptura de la célula, para luego separar las moléculas de ADN del resto
de los constituyentes de la célula. A la hora de escoger que método de extracción de
ADN utilizar se tienen en cuenta varios factores:
- La cantidad de muestra de la que se dispone para extraer el ADN.
- El tipo de muestra o fuente de la que se quiere obtener el ADN.
- La pureza con la que se quiere obtener el ADN extraído.
- El tiempo que consume cada método, su costo y el rendimiento esperado.
- Uso que se le va a dar al ADN extraído. (Fraga & Jinnay, 2004)
 En cuanto al kit usado, cumple con todas las condiciones ya mencionadas, por lo que
como resultado en un tubo de microcentrífuga se obtuvo un precipitado posterior al
procedimiento seguido por parte del kit, como lo fue la preparación de la muestra, el
enlazamiento, lavado y elución del ADN, éste se congeló a -20°C por una semana para
conservar la muestra de ADN aislada.
Para la electroforesis, se usó el ADN genómico almacenado, se lo realizó en gel de
agarosa al 1%, se usó un marcador de corrida de 1kp bases, con colorante primario al
bromuro de azul, una solución tampón TBE 1x y se corrió una tensión de 120 V por
alrededor de una hora. “Los geles para separar ADN suelen estar hechos de un
polisacárido llamado agarosa, que se consigue como hojuelas secas pulverizadas.
Cuando la agarosa se calienta en una solución amortiguadora (agua mezclada con
algunas sales) y deja enfriar, se forma un gel sólido ligeramente blando. A nivel
molecular, el gel es una matriz de moléculas de agarosa que se mantienen unidas por
puentes de hidrógeno y que forman pequeños poros” (Bettina, Horacio, & Gorodner,
2017).
Los resultados obtenidos se demuestran en la tabla 2. En figura se puede diferenciar
claramente los fragmentos de ADN migran a través del gel en el pozo del marcador de
corrida … , mientras en las muestras de ADN genómico extraído previamente con un
kit comercial, no corrió por gel como debería, es decir el ADN se degrado. Esto puede
ser debido a muchos factores. El principal es el error humano, ya que el pipeteo de para
preparar a la muestra estuvo propenso a errores. La conservación de la muestra,
también pudo influir en la muestra de ADN, ya que se pudo contaminar con cualquier
reactivo. Muchos errores son el resultado de problemas con el gel. En primer lugar, una
concentración de gel puede causar muestras incorrectas corriendo demasiado rápido o
no en absoluto. A nivel molecular, el ADN se degrada en fragmentos por la acción de
endonucleasas dependientes de Ca+2 y Mg+2. En primer lugar, se produce una
separación intranucleosomal de la que se forman oligonucleosomas de 180-200 pb. Si
se realiza un estudio de electroforesis en gel, el ADN celular fragmentado en
oligonucleosomas se distribuye en forma de bandas individuales.

III. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

3.1 CONCLUSIONES

3.2 RECOMENDACIONES

IV. CUESTIONARIO
V. BIBLIOGRAFÍA
VI.

Bettina, B., Horacio, A., & Gorodner, J. (2017). Comparación de técnicas de extracción de DNA
para la detección de Thypamosona cruzi mediante la técnica de PCR. Recuperado el 01
de Mayo de 2017, de https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-
technology/dna-sequencing-pcr-electrophoresis/a/gel-electrophoresis

Fraga, J., & Jinnay, R. (2004). Comparación entre 5 métodos para la extracción de ADN de
Triatomíneos: su utilización en la técnica de ADN polimórfico amplificado al azar
(RAPD). Recuperado el 01 de mayo de 2017, de
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0375-07602004000300010

Wako, C. (01 de Mayo de 2017). 10 métodos de extracción de ADN. Obtenido de

http://www.wakolatinamerica.com/blog-reactivos/post/10-metodos-de-extraccion-
de-adn/