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Objetivo:
-Realizar pruebas bioquímicas para poner de manifiesto las actividades metabólicas que
llevan a cabo los microorganismos sobre algunas azucares y ácidos orgánicos, que son
útiles en la identificación.
Caldo Malonato
Medio usado para poner de manifiesto organismos capaces de utilizar Malonato como
única fuente de carbono.
El Malonato interfiere con la oxidación del acido succínico a acido fumárico mediante la
inhibición de la acción catalítica de la enzima succínico deshidrogenasa. El acido
malonico inactiva la enzima por un proceso denominado inhibición competitiva. La
succínico deshidrogenasa transfiere hidrogeno a un aceptor apropiado en la conversión
de acido succínico a fumárico, pero esta reacción puede ser inhibida por un compuesto
orgánico similar desde el punto de vista estructural al sustrato natural, el acido succínico.
El acido malonico presenta una estructura similar al acido succínico y compite por los
sitios de la enzima.
En consecuencia, la acumulación de acido succínico a causa de la inhibición de la
succínico deshidrogenasa interrumpe el ciclo de Krebs, lo que priva algunos
microorganismos de su fuente de energía y también interfiere con el ciclo del acido
glioxílico, lo que detiene la produccion de intermediarios requeridos para la biosíntesis de
nuevos compuestos necesarios para el metabolismo. El resultado final es que los
microorganismo no pueden crecer y reproducirse a menos que puedan fermentar o utilizar
el Malonato de sodio como única fuente de carbono.
Caldo Kligler
Medio usado para determinar la capacidad de un microorganismo para atacar un hidrato
de carbono especifico incorporado en un medio de desarrollo basal, con produccion de
gas o sin ella, junto con la determinación de la posible produccion de acido sulfhídrico.
Es un medio diferencial que determina la fermentación de hidratos de carbono y
determina la produccion de H2S.
La fermentación tiene lugar tanto en aerobiosis (en el pico de flauta) como en
anaerobiosis(en el fondo).
En el pico de flauta, el monosacárido glucosa es catabolizado inicialmente por vía
metabólica anaerobia de Embden-Meyerhof-Parnas, usada por aerobios y anaerobios
para producir el intermediario clave acido pirúvico.
En el fondo existen condiciones anaerobias, de forma que la glucosa se metaboliza por la
vía de Embden-Meyerhof-Parnas a ATP y acido pirúvico, que luego se convierten en los
diversos productos final estables: Acido láctico y /u otros ácidos orgánicos, aldehídos,
alcoholes, CO2, H2 y energía.
Voges Proskauer
Kligler Citrato de Simmons
Caldo Malonato
Rojo de metilo
Análisis de resultados
En la prueba de Durham, Klebsiella pneumoniae fue positivo a las 3 pruebas esto lo
observamos ya que en relación a la producción de gas, las campanas que tenían la
burbuja de aire se desplazó y saco el liquido que tenia dentro lo que significa que
fermento glucosa, sacarosa y manitol lo que tuvo como producto final la producción de
gas.
Bacillus subtilis y Shigella flexneri no produjeron gas y Proteus vulgaris sólo produjo gas
en el tubo de glucosa, entonces solo fermentó ese carbohidrato.
En la misma prueba Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli y Shigella flexneri
fermentaron los tres carbohidratos pues el medio viró a amarillo, y Proteus vulgaris solo
fermento glucosa y sacarosa, el manitol no viró.
En el medio de Kligler Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Bacillus subtilis y Proteus
vulgaris fermentarón la glucosa pues el medio viró en el pico de flauta a rojo y el fondo
amarillo.
Klebsiella pneumoniae también fermentó lactosa pues todo el tubo viro a amarillo, B.
Subtilis, P. vulgaris y S. flexneri no fermentaron la lactosa y el medio se quedo de color
rojo.
Klebsiella pneumoniae produjo gas ya que en el medio se veían burbujas debido a la
fermentación de los carbohidratos y B. Subtilis, P. vulgaris y S. flexneri no produjeron
burbujas ya que utilizaron las peptonas y alcalinizaron el medio.
En la produccion de acido sulfhídrico solo Proteus vulgaris lo produjo, el H2S es incoloro
pero al reaccionar con el citrato de amonio férrico produce un precipitado negro insoluble
de sulfuro ferroso.
Klebsiella pneumoniae y Proteus vulgaris dieron positivo a la prueba de citrato y malonato
ya que viro a azul lo que indica que estas dos bacterias pueden utilizar el citrato y/o
malonato como fuente de carbono. B. subtilis y S. flexneri dieron resultado negativo ya
que el medio no viró, entonces son incapaces de usar como fuente de carbono el
malonato y citrato.
En la prueba de rojo de metilo Shigella flexneri y Proteus vulgaris dieron positivo ya que
se formo un anillo rojo lo que indica que el cultivo es lo suficientemente acido para permitir
que el reactivo rojo de metilo permanezca estable en la superficie del medio, los
microorganismo producen mas ácidos y vencen el sistema buffer fosfato y mantienen la
acidez. Bacillus subtilis dio un color naranja rojizo lo que indica que produjo menos acido.
En la prueba de Vogues Proskauer Klebsiella pneumoniae, Bacillus subtilis, Proteus
vulgaris dieron positivo al pintarse de rojo el tubo lo que indica que al final de la
fermentación de la glucosa produjeron el compuesto estable acetoína.
La reacción de VP es la siguiente:
Conclusión:
En esta practica podemos concluir que por medio de la identificación de la fermentación
de diversos nutrientes que utilizamos en los medios, podemos saber parte de su actividad
enzimática.
Bibliografía: