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LABORATORIO 1.
BIOMOLÉCULAS-CARBOHIDRATOS
Una célula viva está constituida básicamente por cuatro elementos (C, H, O y N) los cuales
combinados entre sí, dan origen a un gran número de compuestos. La sustancia más
abundante en la célula viva es el agua y llega a representar más del 70% de su peso. La
química de la célula está basada en los compuestos de carbono, los cuales están divididos
en cuatro grandes grupos de macromoléculas: carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos
nucleicos, los cuales están formados por el encadenamiento de moléculas pequeñas tales
como aminoácidos, azúcares, ácidos grasos y nucleótidos. Las macromoléculas son
distintas en sus propiedades físicas y químicas, pero los tres primeros son similares
metabólicamente, al menos, en el hecho de que son fuentes de energía para los
organismos. El rompimiento de estas moléculas orgánicas complejas da como resultado la
liberación de energía. Por ejemplo, una cadena de seis átomos de carbono puede originar
residuos de tres átomos de carbono, los cuales a su vez se pueden utilizar en la síntesis de
nuevas moléculas de seis átomos de carbono o aún en moléculas más largas. De esta
manera los componentes de las moléculas orgánicas se pueden usar en una gran variedad
de combinaciones en los organismos vivos.
1. Fundamentación
Carbohidratos
Son compuestos orgánicos que contienen carbono, hidrógeno y oxígeno, y muchos
de ellos contienen elementos en la relación de Cn(H2O)n. Estos compuestos se
pueden clasificar de acuerdo al grupo funcional que posee (aldosas y cetosas), al
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número de átomos de carbono (3C: triosas, 4C: tretrosas, 5C: pentosas, 6C:
hexosas, etc), y de acuerdo al número de monosacáridos que lo conforme
(azúcares simples o monosacáridos, si se unen dos monosacáridos forman un
disacárido; si se unen de 3-20 monosacáridos resulta un oligosacárido y cuando se
unen numerosas unidades de monosacáridos, constituyen un polisacárido como
por ejemplo los almidones, celulosas, pectinas, quitinas, etc).
Monosacáridos
Es la molécula más simple de azúcar que se puede encontrar en la naturaleza. Está
conformada por una sola unidad monomérica. Se pueden clasificar de acuerdo al número
de carbonos que lo conforman. Entre sus funciones principales está servir de fuente de
energía de las células y participar en la síntesis de ácidos nucleicos.
Disacáridos
Son azúcares que están conformados por la unión de dos unidades monosacáridos iguales
o distintos. Los disacáridos más comunes son la sacarosa, lactosa y la maltosa. En la Tabla
Nº2 se pueden observar algunos de los disacáridos más comunes y los monosacáridos que
los conforman.
Sacarosa Glucosa
Fructosa
Polisacáridos
Son compuestos que tienen más de 3 monosacáridos iguales o diferentes en su unidad
estructural. Entre sus funciones principales es servir de reserva energética y ser parte
estructural.
a) Amilosa
b) Amilopectina
2. Objetivos:
General
Aplicar métodos cualitativos y cuantitativos para la identificación de carbohidratos.
Específicos
o Determinar mediante el método de Benedict la presencia de azúcares
reductores.
o Determinar mediante el método de Lugol la presencia de almidón.
o Desarrollar destrezas en la preparación de muestras y curvas de calibración
en la aplicación del método DNS para la cuantificación de azúcares
reductores.
3. Materiales y Reactivos
Materiales
15 Tubos de ensayo sin tapa
Estufa
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1 Beaker de 250 ml
Placa de calentamiento con agitación
Gradilla
Recipiente con hielo
Cubeta espectrofotométrica
Espectofotométro
Pipetas 1,2 y 5ml.
Pipeteador
Reactivos
Reactivo de Benedict
Glucosa 4g/L
Almidón 10%
Lugol 1%
Reactivo DNS
Muestra problema: Los estudiantes deben traer un banano verde y un banano maduro
para analizar en el laboratorio.
4. Procedimiento
4.1. Identificación cualitativa de azúcares reductores
Patrón teórico negativo: Tome un tubo de ensayo (Tubo 1) y agregue 2 mL de H 2O
destilada más 1 mL de reactivo de Benedict.
Patrón teórico positivo: Tome otro tubo de ensayo (Tubo 2) y agregue 2 mL de
glucosa 0.4% (más 1 mL de reactivo de Benedict.
Muestra: Tome un tercer tubo de ensayo (Tubo 3) y agregue 2 mL de la muestra
problema y 1 mL de reactivo de Benedict.
Caliente los tres tubos al baño maría durante 5 minutos, observe los cambios de color
y compárelos, analice lo sucedido.
Figura Nº3. Preparación de patrones para la curva de calibración del método DNS
2ml 2ml 2ml
2 ml de H2O
Tanto para los patrones de la curva, como para la muestra problema y el blanco
(agua) se procede de la siguiente forma:
A 0.5 mL de cada muestra a analizar adicionar 0.5 mL de reactivo DNS. Agitar todas
las muestras.
Colocar a ebullir las muestras en baño maría por 5 minutos y enfriar rápidamente
con hielo.
Adicionar 5 mL de H2O destilada y agitar y dejar en reposo durante 15 min.
Concentración Absorbancia
Tubo
(g/L) a 540 nm
1 0 (blanco)
2 0.25
3 0.5
4 1
5 2
6 4
7 Muestra 1
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Preguntas de consulta
1. ¿Qué es un azúcar reductor? Cite ejemplos de azucares reductores y no reductores.
2. Consulte las diferentes reacciones químicas o interacciones moleculares que ocurren
en los métodos de Benedict, Lugol y DNS, que provocan un cambio de color cuando
hay presencia de carbohidratos.
ANEXO
Curvas de calibración
La absorbancia tiene una dependencia lineal con respecto a la concentración, lo que hace
que se puedan obtener relaciones de manera experimental, utilizando muestras de
concentraciones conocidas y obteniendo con ayuda del espectrofotómetro la absorbancia.
Luego mediante un ajuste a una línea recta se puede obtener una curva de calibración
BIBLIOGRAFÍA
Roca, Pilar; Oliver, Jordi; Rodríguez, Ana. BIOQUÍMICA. Técnicas y Métodos. Universidad
Islas Baleares, 2003
Proyecto ARCANO; Osorio, H.J.; Cardona, C.A., Montes, L.M.; Gobernación de Caldas,
Programa de las Naciones Unidad para el Desarrollo PNUD, Universidad Nacional de
Colombia; SENA; Cartilla 16: Manual de prácticas de laboratorio en ciencias biológicas.
2007.