PRÁCTICA 3

BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE

PUEBLA
ALUMNA: Ana Fabiola Sánchez Santander

FECHA DE ENTREGA: 5/02

Reacciones colorimétricas de aminoácidos y proteínas

(Cisteína, Millon, Ninhidrina, Biuret y Xantoproteica)

OBJETIVO: El alumno realizara algunas reacciones coloridas

específicas para la identificación de los aminoácidos que constituyen a una proteína y
comprenderá la importancia de estas reacciones para distinguir las proteínas.

RESULTADOS
Las soluciones problema fueron elaborados por el equipo 1, esas soluciones son las siguientes
ALBUMINA, GELATINA, TIROSINA Y LA ARGININA la cantidad dada para cada equipo fue de un
mililitro de solución.

- Reacción del plomo para cisteína: se agregaron 2ml de NaOH en cada solución, después se
colocaron de 2 a 5 gotas de acetato de plomo, si se llegaba a preciar la coloración de un
precipitado NEGRO indica una prueba positiva, como se puede observar en la siguiente
imagen ya que solo en albumina se llegó a presentar esta coloración.

-
 PRÁCTICA 3

- Reacción de la Ninhidrina: Se colocaron de 2 a 3 gotas de ninhidrina de butanol si se

llegaba a presenciar una coloración de color azul o violeta la prueba es positiva, en debido
caso que la muestra no presentara coloración se metió en baño maría en un tiempo
aproximado de 1 a 2 minutos para acelerar la reacción. En esta reacción solo pudimos
observar coloración azul en la arginina y una coloración rosa (magenta) en la albumina que
podemos apreciar en la siguiente imagen.

- Reacción de Millon: se agregaron de 2 a 5 gotas de reactivo de millon a cada solución, la

aparición de color rojo indica que la prueba positiva, como se aprecia en la siguiente
imagen (Las soluciones están en orden de izquierda a derecha) coloración en la arginina

-
 PRÁCTICA 3

- Reacción de Biuret se agregaron 2ml de NaOH en cada solución, después se colocaron de

2 a 5 reactivo de biuret, si se llegaba a preciar la coloración de un precipitado violeta
indica una prueba positiva, como se puede observar en la siguiente imagen albumina y la
gelatina se llegó a presentar esta coloración.

Reacción de Xantoproteica: se le agrego un mililitro de ácido nítrico, donde se calentó y se dejó

enfriar por un momento después se estratifico un mililitro de hidróxido de amonio (NH4OH ) a lo
cual si se presentaba una coloración naranja es positivo y si se observaba amarillo era una prueba
negativa, en la siguiente imagen se observara las coloraciones que llegamos a obtener. La única
solución positiva que logramos obtener fue la de la albumina.
 PRÁCTICA 3

Muestra Cisteína Millon Ninhidrina Biuret Xantoproteica

Albumina + ( negro) + (rosa) + (rosa + violeta + (coloración
magenta) naranja)
Gelatina - +(rosa claro) - + violeta -
Tirosina - - - incoloro -
Arginina - + (rojo) +(azul) - incoloro -

Cada solución problema que se entregó a cada equipo fue de 1 ml así como cada equipo elaboro
otro reactivo que se le tenía que agregar dependiendo la reacción que se le fue asignada.
 PRÁCTICA 3

Cálculos

Estos fueron los cálculos del equipo uno ya que ellos fueron los encargados de ayudarnos con
las soluciones.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Las proteínas son polímeros de alto peso molecular, compuestos por aminoácidos unidos entre sí
por enlaces peptídicos, que cuando se solubilizan son de dimensiones coloidales. Existen varios
métodos para la identificación y cuantificación de las proteínas, pero la mayoría tiene como
principio alguna reacción química característica de los grupos R de los diferentes aminoácidos.
Puede decirse que las proteínas reflejan las propiedades químicas de los residuos de aminoácidos
que contienen, por lo que la mayoría de las reacciones coloridas de identificación dependen de la
existencia de un aminoácido específico en ellas.

Una reacción colorimétrica es aquella en que el producto de la reacción es una molécula que,
al modificar su estructura química durante la reacción, genera una molécula que presenta un
color. Se habla de reacción colorimétrica cuando se mide la intensidad del la coloración en
una reacción y se compara con un estándar o con una curva de calibración (medición de
absorbencia). Esto indirectamente permite medir concentraciones de un analito en particular.
 PRÁCTICA 3

Por ejemplo, el método de Biuret es colorimétrico pues se mide la absorbencia de una

solución y se compara con una curva de calibración. El valor de absorbencia permite calcular la
concentración de proteínas de la solución.( Hematologia clínica, 2007)
En esta práctica nosotros preparamos diferentes reacciones para observar su colorimetría en cada
aminoácido y en cada proteína que fue preparada por el equipo uno, cada solución problema fue
de un mililitro de sustancia más otro reactivo que fuera necesaria para la reacción asignada

Como podemos observar en la tabla cada reacción tuvo diferentes datos, así como diferente
coloración si era una reacción positiva o negativa

Como se muestra el autor Bohinski en su libro Bioquímica. 5 ed que el carácter único de cada α
aminoácido se debe a la estructura del grupo R. En los polipéptidos los grupos R de los
aminoácidos a menudo se denominan cadenas laterales y pueden variar desde un átomo de
hidrógeno, hasta estructuras complejas como el grupo guanidina, el propósito de esta práctica es
identificar algunos aminoácidos que presentan grupos característicos en las cadenas laterales
utilizando ensayos cualitativos y específicos para cada función.( BOHINSKI. 1991)

Cuestionario

1. ¿Cuáles son los aminoácidos esenciales y con qué pruebas específicas se podrían
identificar?

La Ninhidrina: La ninhidrina es un poderoso agente y reactivo común para visualizar las bandas de
separación de aminoácidos por cromatografía o electroforesis, también es utilizada con fines
cuantitativos para la determinación de aminoácidos. Esta prueba es positiva tanto para proteínas
como para aminoácidos. en aquellos casos donde no da positiva la prueba de biuret y da positiva
la de ninhidrina, indica que no hay proteínas, pero si hay aminoácidos libres.

La Reacción Xantoproteica Los aminoácidos, que contienen un núcleo aromático forman nitro
derivados de color amarillo cuando se calientan con ácido nítrico concentrado. Las sales de estos
derivados son de color naranja intenso en medio alcalino. Si una vez realizada la prueba se
neutraliza con un álcali, se torna color amarillo oscuro.

Reacciones para cisteína y cistina. Cuando los aminoácidos y las proteínas que contienen grupos
tiólicos se calientan en medio fuertemente alcalino. Los grupos tioles también reaccionan con el
nitroprusiato de sodio en presencia de un exceso de amoníaco para dar un complejo de color rojo.

Prueba para Arginina El aminoácido Arginina contiene un grupo guanidino en la cadena lateral,
este grupo reacciona con el reactivo de Sakaguchi (a-naftol/agua de Bromo) en medio alcalino
para dar un compuesto de color rojo.

Prueba de Biureth es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros
compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida. El
reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina
con polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio no participa en la reacción, pero
proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.
 PRÁCTICA 3

2. ¿A qué se le denomina zwitterion? es un compuesto químico eléctricamente neutro pero

que tiene cargas formales positivas y negativas sobre átomos diferentes.Los zwitteriones
son especies polares y usualmente presentan una elevada solubilidad en agua y bastante
baja en muchos disolventes orgánicos de carácter apolar.

3. ¿En qué consiste la técnica Bradford? El reactivo de Bradford reacciona con ciertos
residuos de aminoacidos en las proteinas. Cuando se une cambia de color (azul) y
la intensidad del color sera proporcional a la cantidad de reactivo fijado, luego la
concentracion de proteinas se determina espectrofotométricamente. La
cuantificación se hace midiendo la absorbancia en un espectrofotómetro,

4. ¿Cuál es la reacción para identificar la secuencia de aminoácidos en un polipeptido por

cloruro de Dansilo?

5. ¿Cuáles son los aminoácidos aromáticos?

En esta grupo se encuadran los aminoácidos cuya cadela lateral posee un anillo aromático. La
fenialalanina es una alanina que lleva unida un grupo fenílico. La tirosina es como la
fenilalanina con un hidroxila en su anillo aromático, lo que lo hace menos hidrofóbico y mas
reactivo. El triptófano tiene un grupo indol.

CONCLUSIÓN:

Gracias a esta práctica logramos observar la colorimetría que tuvieron las soluciones
problemas en cada diferente reacción así como si eran positivas logramos obtener y realizar
nuestro objetivo de esta práctica ya que era obtener de algunas reacciones coloridas
específicas para la identificación de los aminoácidos que constituyen a una proteína, así como
saber el procedimiento que llevaba cada una de las reacciones y su distinta coloración y su
forma de elaboración

CITAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. Jan Koolman, Klaus-Heinrich Röhm. (2003). bioquimica . madrid ,

españa: medica panamericana .
 PRÁCTICA 3

2. https://www.todoexpertos.com/categorias/ciencias-e-
ingenieria/biologia/respuestas/1618485/reaccion-colorimetrica-urge
3. https://books.google.com.mx/books?id=sj8arOGA3P0C&pg=PA112&dq=proteinas
+y+colorimetria&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwjZ67b8943ZAhVCzGMKHbxFDy4Q6AE
ILDAB#v=onepage&q=proteinas%20y%20colorimetria&f=false