Instituto Nacional de Medicina Genómica

Edición de genes CRISPR-cas9

CIBIOGEM Dr. Xavier Soberón
Junio 15 de 2017. Ciudad de México
 Contenido

1. Edición de genes como base de la biotecnología

moderna

2. La tecnología CRISPR-cas 9; adopción y

potenciales

3. Discusión sobre uso responsable: consenso

internacional

4. Conclusiones y perspectivas
 Contenido

1. Edición de genes como base de la biotecnología

moderna

2. La tecnología CRISPR-cas 9; adopción y potenciales

3. Discusión sobre uso responsable: consenso

internacional

4. Conclusiones y perspectivas
Perspectiva histórica

ADN Recombinante

En 1973, con los

primeros
experimentos, se
inicia la era de la
ingeniería
genética
Stanley Cohen, Herbert Boyer y Paul Berg
(Premio Nobel de Química 1980).
Demostraron que el gen para el ARN
ribosomal de la rana podía ser transferido y
expresado en una célula bacteriana.
Este puede considerarse como el primer
ejemplo de edición genética.
Llevamos 40 años de desarrollo para estas
técnicas
La hibridación de ácidos nucleicos

Proceso fundamental
en toda la tecnología
genética

Reconocimiento
molecular “predecible”
 Mutagenesis dirigida

El ADN sintético como

agente para modificar
genes

Desarrollada desde 1978

por Michael Smith
(Premio Nobel de propiedades diseñadas
Química 1993). Produce
mutaciones puntuales Procedimientos IN VITRO
Primeros productos: la industria de
los medicamentos biotecnológicos

Insulina: En 1978
Herbert Boyer y Keiichi
Itakura construyen un
plásmido que codifica la
insulina humana. Desde
1982 es aprobada para
uso en humanos
Antes de los 80’S
Grandes y nuevas herramientas de los
80’s
 La revolución de la biotecnología del siglo XXI: secuenciación
masiva (NGS)

SNPs por ensayo

1997 1

2004 1,000

2007 50,000

2008 500,000

2009 1,000,000

2010 5,000,000
Abaratamiento de 1 millón de veces
 CRISPR-Cas9

¿Revolucionario después de
40 años?
Clustered Regulatory Interspaced
Short Palindromic Repeats
(CRISPR). Sistema natural de
inmunidad adaptativa de algunas
bacterias
La secuencia de RNA reconoce
específicamente una secuencia
complementaria de DNA para que
actúe la nucleasa Cas9 y haga los
cortes en el genoma
¡Tecnología revolucionaria
después de 40 años de mejora
incremental!
Actualmente ….
Transgénicos
Primera etapa de
ingeniería genética en
organismos superiores

Se desarrollan métodos
para transformar,
establecer y expresar
genes exógenos en
plantas y animales

La inserción del transgene

ocurre en sitios no
predeterminados
La eficiencia es baja
Knockout / Knock-in

Experimentos
sumamente
laboriosos.
Tomaban meses;
imposibles en muchas
especies
Silenciamiento génico mediado por RNA

Se origina con la producción de

RNA antisentido en los 80’s
Tipos naturales : siRNA, small
interfering RN (ARN interferente
pequeño). miRNA, ( microARN
). piRNA, ARN asociados a Piwi
(Piwi-interacting RNAs).
Mecanismo de RNAi
(maquinaria protéica participa y
hace eficiente) en células
superiores: revoluciona la
técnica
Megha Ghildiyal & Phillip D. Zamore. 2009. Nature Reviews Genetics 10, 94-108
Tipos de pequeños RNA’s silenciadores

Megha Ghildiyal & Phillip D. Zamore. 2009. Nature Reviews Genetics 10, 94-108
Silenciamiento de genes mediado por ADN modificado
Uso de ácidos nucleicos para
modificar genes in vivo
 Contenido

1. Edición de genes como base de la biotecnología

moderna

2. La tecnología CRISPR-cas 9; adopción y

potenciales

3. Discusión sobre uso responsable: consenso

internacional

4. Conclusiones y perspectivas
Mecanismos de reparación de ADN

Existe una maquinaria endógena de reparación celular.

La edición de genes se apoya en esta maquinaria.
Técnicas de
edición de
genes antes
de CRISPR
Dedos de Zinc

Aparecen en el 2000
Cada dedo reconoce
un triplete
TALEN’s
Transcription Activator Like
Effector Nuclease. Proteinas
secretadas por Xantomonas
aparecen en 2010 y contiene
dominios de unión a ADN
compuesto por una serie de 33-35
aminoácidos repetidos que cada
uno reconoce a un par de bases
Diseñarla es mucho más fácil en
comparación con dedos de Zinc ,
sin embargo por ser de gran
tamaño suele ser complicado
trabajar con ellas.
 CRISPR-Cas9

¿Revolucionario después de
40 años?
Clustered Regulatory Interspaced
Short Palindromic Repeats
(CRISPR). Sistema natural de
inmunidad adaptativa de algunas
bacterias
La secuencia de RNA reconoce
específicamente una secuencia
complementaria de DNA para que
actúe la nucleasa Cas9 y haga los
cortes en el genoma
¡Tecnología revolucionaria
después de 40 años de mejora
incremental!
CRISPR-Cas9
 Momentum: Adopción de la tecnología
CRISPR

(El mas elocuente ejemplo

reciente de una tecnología
que surge de la investigación
básica)
La increíble eficiencia de CRISPR

Algunos expertos consideran que CRISPR/Cas9 es aprox. 100

veces más eficiente que los métodos anteriores
Aplicaciones de CRISPR-Cas9
 Aplicaciones clínicas CRISPR/Cas9
28 de octubre de 2016,
Un equipo liderado por el oncólogo Lu
You de la Universidad de Sichuan en
Chengdu, China, suministró a células
modificadas en un paciente que sufre
de un agresivo cáncer de pulmón.
21 de junio de 2016,
EE.UU. aprobó una propuesta para
utilizar CRISPR-Cas9 en la mejora de
terapias contra el cáncer; basadas en
reclutar células T.
 Cerdos resistentes a síndromes
respiratorios

En 2017, Investigadores de la
Universidad de Edinburgh, demostraron
que con CRISPR desactivaron el gen
CD163. Los cerdos no produce la
proteína CD163, encargada de
propagar el virus por el cuerpo del
animal.

Cuando los animales libres de CD163

han sido expuestos a los principales
subtipos de los SRRP, no se han
enfermado.

Hasta la fecha, ninguna vacuna ha

mostrado efectividad para esta
enfermedad que cuesta cada año más
de 660 millones de dólares
 Cerdos con doble musculatura

En 2015, científicos de
Corea del Sur y de China
utilizando TALEN
modificaron el gen de la
miostatina (MSTN) en
cerdos.

La MSTN inhibe el
crecimiento de las células
musculares, controlando el
tamaño del músculo, sí la
MSTN es interrumpida las
células musculares
proliferaran, creando un
volumen anormal de fibras
musculares.
Ganado vacuno con resistencia a la
tuberculosis

En 2017, Estudio en la Universidad Northwest en China

utilizaron una versión modificada de CRISPR/Cas9 para
insertar un gen de resistencia a la tuberculosis
(NRAMP1) en el genoma de la vaca. Hasta ahora sin
efectos no deseados.
Naranjos de Florida inmunes al enverdecimiento

Enfermedad de Huanglongbing
(HLB), destruye la producción,
apariencia y valor de los árboles
cítricos; produce frutos amargos no
comestibles y muerte progresiva del
árbol.

La enfermedad apareció en Florida

en 2005 y desde entonces la
producción ha caído hasta los 104,4
millones de cajas de naranjas en
2014, su nivel más bajo en los
últimos 30 años.

En las Universidades de Texas y

Florida se están desarrollando
árboles modificados que puedan
hacer frente al enverdecimiento.
 En busca del tomate perfecto

Un equipo del Cold Spring

Harbor Laboratory

Buscan diseñar plantas más

productivas, utilizando CRISPR
para desarrollar con ramas y
flores optimizados para el
tamaño del fruto, mejorando los
rendimientos.

Este enfoque se puede aplicar

a la mejora de cultivos en
general y no sólo en el tomate.
Champiñones resistentes al pardeamiento
En 2013, Yinong Yang, utilizó
CRISPR/Cas9

Deleciones (1 a 14 bp) en los

6 genes que codifican para la
enzima polifenol oxidasa en
Agaricus bisporus

El servicio de Inspección de
Salud Animal y Vegetal
(APHIS) declaró a los
champiñones blancos
modificados por
CRISPR/Cas9 como cultivos
exentos de regulación
aplicable a la importación, el
movimiento o la liberación de
organismos modificados
genéticamente en USA.
Modificación genética vs. Edición
genética

La edición precisa permite modificar atributos sin

introducir genes exógenos.

El desafortunado término OGM es, de alguna

manera, sinónimo de transgénico.

Muchas formas de edición genética precisa serían

no-transgénicos (e.g. eliminación de genes,
sustitución de alelos, modificación de genes sobre
diseños teóricos, etc..)
Clasificación de los productos por
edición genética
Gene Drive usando CRISPR

Ledford H., 2015. Nature, 522(4), 20:24

Gantz, V.M. & Bier, E. 2015. Science, 348: 442-444
 Contenido

1. Edición de genes como base de la biotecnología

moderna

2. La tecnología CRISPR-cas 9; adopción y potenciales

3. Discusión sobre uso responsable: consenso

internacional

4. Conclusiones y perspectivas
Regulaciones

Actualmente se debate sobre la manera como se

deben de regular el uso de este tipo de tecnologías
Preocupaciones
Debate internacional en la edición de genes

Diciembre 1-3 de 2015; Washington D.C., USA.

Expertos mundiales, convocados para discutir cuestiones científicas, legales y
bioéticas
Se elaboró un reporte al respecto durante el 2016
Pronunciamiento al final de la cumbre

1. Investigación básica y preclínica sujeta a una adecuada

supervisión legal y ética.

2. Uso clínico (somático); usar en células somáticas para

tratar enfermedades como el cáncer y la anemia de células
falciformes autorizada dentro de los marcos legales
existentes

3. Uso clínico (línea germinal); se deben de resolver de

seguridad y deberá de existir un amplio consenso social
sobre las aplicaciones propuestas

4. Necesidad de un foro continuo; a fin de establecer normas

de uso en humanos
Informe de la Academia Nacional de Ciencias
y la Academia Nacional de Medicina

14 de febrero de 2017

Se debe de actuar con: Responsabilidad,

seguridad y transparencia.

El empleo en terapia génica somática es muy

promisorio y debe regularse conforme a las
mismas normas ya bien establecidas

Las personas deben tener voz en la discusión

sobre la utilización de las técnicas de edición
genómica en humanos.

Únicamente en el caso de enfermedades graves

y bajo estricta vigilancia podrían permitirse los
ensayos clínicos en los que se incluya edición
del genoma en la línea germinal.
 Contenido

1. Edición de genes como base de la biotecnología

moderna

2. La tecnología CRISPR-cas 9; adopción y potenciales

3. Discusión sobre uso responsable: consenso

internacional

4. Conclusiones y perspectivas
Oportunidades de desarrollo

La habilidad para
modificar eficientemente
cualquier secuencia
genómica ha creado la
oportunidad de
revitalizar drásticamente
el mejoramiento de ……
Perspectivas

Oportunidades Riesgos/ precauciones

Abuso de la tecnología
Terapia genica
Aumento de las desigualdades

Zootecnia

Zoonosis

Alteración de las poblaciones

Control biológico
salvajes

Mejoramiento de cultivos Cambios no planeados

 Gracias
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Modificación genética vs. Edición
genética
Huang, S. et al. 2016. NATURE GENETICS, 48(2): 109-111
Nucleasas
 Nueva base tecnológica para la discusión

Khatodia, S. et al. 2016. Frontiers in Plant Science, 7: article 506.