Fecha:15/02/2018.

Práctica No. 2 Identificación de Carbohidratos y Cuantificación de

Carbohidratos.

Resumen
En esta practica se realizó la identificación de carbohidratos utilizando distintos
métodos colorimétricos cualitativos y semicuantitativos. Las reacciones que nos
permiten identificarlos son de acuerdo a si los azúcares son o no reductores,
además del grupo funcional que poseen y el tamaño del anillo. Además, se realizó
la cuantificación de carbohidratos utilizando el método DNS en una muestra
problema utilizando distintas concentraciones de glucosa estándar y una muestra
problema mediante una curva utilizando espectrofotometría visible.

Materiales y Métodos

 Vasos de precipitados de 250 mL  Micropipetas

 Parrilla Eléctrica  Puntas para Micropipeta
 Gradilla  Espátula
 Tubos de ensaye  Vórtex
 Papel filtro  Agitadores o varilla de vidrio
 Probeta de 10 y 100 mL  Embudo de vidrio
 Vidrio de reloj  Papel aluminio
 20 tubos Eppendorf  Pipetas Pasteur
 Placa de 96 pozos  Bulbos de goma

Reactivos
 Lactosa obtenida de la práctica anterior (2mL al 2%)
 Soluciones al 1% de glucosa, fructosa, galactosa, lactosa, sacarosa, D-
ribulosa, almidón y miel.
 Reactivo de Benedict
 Solución patrón de glucosa 1 mg/mL
 Papel aluminio
 Reactivo DNS
 Lugol
 Reactivo de Selivanoff
 Reactivo de Molish (α-naftol)
  Ácido sulfúrico concentrado
 Ácido clorhídrico diluido

Metodología
 Tabla 1. Valores de reactivos para la Curva.

Vol. De sol. Volumen

Estándar H2O Volumen Promedio
Tubo Concentración
de glucosa destilada DNS (μL) Absorbancia
(μL) (μL)
1 0 100 120 0 0.000
2 3 97 120 0.1 0.416
3 5 95 120 0.2 0.350
4 10 90 120 0.4 0.359
5 20 80 120 0.6 0.415
6 40 60 120 0.8 -0.025
7 60 40 120 1 -0.028
8 80 20 120 1.2 -0.029
9 5 80 120 x -0.019

Resultados
Tabla 2. Identificación de azúcares.

Azúcar Azúcar reductor Azúcar no reductor Identificación de Almidón

Glucosa + - -----
Fructosa + - -----
Galactosa + - -----
Lactosa + - -----
Sacarosa - + -----

Miel + - -----

Almidón ----- + +
 0.500

y = -0.2701x + 0.3273
0.400 R² = 0.2939
Absorbancia (540 nm)

0.300

0.200

0.100

0.000
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4
-0.100
Concentración (mg/mL)

Cálculo de la concentración de la muestra problema:

y = -0.2701x + 0.3273
x= (y-0.3273) / (-0.2701)
x= (-0.019-0.03273) / (-0.2701)
x= 0.1915 mg/mL

Discusión
En tanto que las reacciones de identificación de carbohidratos se llevaron a cabo
con éxito, la cuantificación de carbohidratos no fue así debido a los resultados
anómalos con absorbancias negativas, aun así, se determinó un valor positivo de la
concentración de la muestra, aunque menor que el esperado.
Los errores existentes en la determinación de la absorbancia por espectrofotometría
podrían deberse a que la concentración de la muestra es demasiado alta, en cuyo
caso la luz no podría incidir correctamente en el detector o demasiado baja, en cuyo
caso habría muy poca absorbancia.
Conclusiones
Las reacciones de identificación de carbohidratos por métodos colorimétricos nos
permiten determinar cualitativamente y semi-cuantitativamente la presencia o
ausencia y la concentración de azúcares en muestras problema, además de la
existencia de métodos instrumentales utilizando espectrofotometría para la
determinación de las concentraciones exactas de azúcares.

Bibliografía
 Harris, D. Análisis Químico Cuantitativo. 3ra. Edición. Reverté.
 Nelson, D. Cox, M. Principles of Biochemistry. Fourth edition. Freeman.