Práctica 1

“AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE UNA CREPA”

Introducción.
Los microorganismos a diferencia de las plantas no son capaces de crear materia orgánica a partir de elementos
inorgánicos, por eso, han de nutrirse a expensa del medio en que se encuentren, y de ahí que en el interior de estos
ocurran una serie de reacciones de síntesis y de descomposición de sustancias orgánicas, las cuales reciben el
nombre de metabolismo. A partir de estas características metabólicas se realizan pruebas obtenidas para la
identificación de microorganismos y productos obtenidos de la relación microorganismo-medio. Otro de los
aspectos importantes de la realización de estas pruebas, es que a partir de estas ayudan a dar una respuesta ante la
posible contaminación de los alimentos por medio de microorganismos patógenos. Las técnicas de bioquímica han
proporcionado una herramienta útil para la detección directa de los microorganismos contaminantes. La
identificación bacteriana se puede realizar por medio de una serie de análisis que necesitan de diferentes cultivos y
procedimientos para llegar a identificar las especies bacterianas.

Teoría relacionada.
La identificación de una bacteria es su asignación a un taxón según una clasificación dada. Consiste en la
determinación de las características fenotípicas y/o genotípicas y la comparación de estas características con los
diferentes taxones de la clasificación considerada. Las características a determinar y su número depende
principalmente del tipo de bacteria y del fin que se persigue en la identificación. Los ensayos bioquímicos
tradicionalmente utilizados, llamadas pruebas bioquímicas convencionales, generalmente determinan la actividad de
una vía metabólica (conjunto de reacciones químicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo
y que la bacteria al crecer transforma o no.
Las pruebas o ensayos bioquímicos, son pruebas simples que se han desarrollado para demostrar en forma clara una
determinada característica bioquímica como presencia o ausencia de una determinada actividad enzimática, grupo
de enzimas o determinada vía metabólica, crecimiento a una determinada temperatura, crecimiento en presencia de
inhibidores, etc. No significan de ninguna manera un estudio profundo del metabolismo bacteriano. A los efectos de
realizar identificaciones más rápidas, o cuando las pruebas bioquímicas no son concluyentes, se recurre al uso de
antisueros específicos. Los antígenos bacterianos pueden ser capsulares, somáticos (O) que corresponden al
lipopolisacárido de la pared de los Gram negativos, flagelares (H), y los antisueros se identifican con esas letras y el
número o letra del antígeno correspondiente. También se pueden utilizar métodos de cromatografía gaseosa para
identificar productos metabólicos, en particular para la identificación de bacterias anaerobias no esporuladas.
La taxonomía bacteriana tiene como objetivo la construcción de sistemas que permitan clasificar a las bacterias
dentro de la clasificación taxonómica, las categorías y definiciones más utilizadas son familia (un grupo de géneros
relacionados entre sí), genero (un grupo de especies relacionados entre sí), especie (un grupo de cepas relacionadas
entre sí), tipo (un grupo de cepas interrelacionados dentro de las especies) y cepa (aislamiento concreto de una
especia en particular). La taxonomía convencional permite la identificación de géneros y especies mediante la
aplicación de diversos criterios.

Objetivo general.
Aislar una cepa bacteriana (bacillus aerius, micrococcus sp +) para su identificación en base a su fenotipo y
caracterizarla bioquímicas por pruebas preliminares (Gram, catalasa, citocromo oxidasa, coagulasa) y metabolismo
bioquímico (Phe, Cit, TSI, LIA, MIO, Urea).
 Metodología.

Medio de
cultivo:
-Soya
-EMB
-Nutritivo

Microscopio
óptico:
-Tinción de
Gram

Pruebas
bioquímicas:
-CIT
-TSI
-MIO
-LIA
-Urea

Resultado y observaciones.
Luego de colocar las bacterias en el agar, se dejó incubar por 24 hrs para dar tiempo a que la bacteria creciera y
lograra hacer colonias; lo mismo con las pruebas bioquímicas, se dejaron en la incubadora por 24 hrs para que la
bacteria creciera en los tubos con dichas pruebas bioquímicas, observar su comportamiento.
En la realización de la tinción de Gram se observaron dos colores los cuales diferenciabas si la bacteria era positiva o
negativa.
Características macroscópicas:
MEDIO
CARACTERÍSTICAS
CEPA DE SIEMBRA FORMA BORDE ELEVACIÓN SUPERFICIE CONSISTENCIA COLOR
ÓPTICAS
CULTIVO
Blanco
1 Soya Estría Puntiforme Entero Elevada Opaca gelatinosa Luz reflejada

2 EMB Estría Amiboidea Entero Plana Opaca gelatinosa Rosado Luz reflejada
Blanco
3 Nutritivo Estría Circular Entero Elevada Opaca gelatinosa Luz reflejada

Características bioquímicas:
T S I LIA MIO UREA NOMBRE
CEPA GRAM CATALASA OXIDASA CITRAT0 GLUCOSA LACTOSA DC DA UREASA
SACAROSA O2 H2S H2S
MIO SACAROSA
SUGERIDO
DC(+)
G(+) L(+) S(+) O2(-)
1 - + - - DA(-) M(+) I(+) O(-) U(-) S(+) E. Coli
H2s(-)
H2S(-)
Conclusiones.
Las pruebas bioquímicas convencionales, generalmente determinan la actividad de una vía metabólica (conjunto de
reacciones químicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer
transforma o no.
A partir de las pruebas bioquímicas de identificación bacteriana, mediante estándares establecidos, podemos
conocer que bacteria tenemos en una muestra problema basándonos en sus reacciones metabólicas las cuales son
características de cada microorganismo.
Son funciones específicas del metabolismo:
 Obtención de energía para los procesos celulares.
 Conversión de los compuestos nutritivos en precursores de los componentes celulares.
 Organización de esas macromoléculas en polímeros.
 Formación y degradación de las biomoléculas necesarias para las funciones especializadas de la célula.

Referencias bibliográficas.
Microbiología Aplicada al Paciente Crítico. Zaragoza CR. 2007. Panamericana. Pág. 28
Pruebas bioquímicas de identificación bacteriana. https://es.scribd.com/doc/50402732/PRUEBAS-BIOQUIMICAS-DE-
IDENTIFICACION-BACTERIANA-26-pp
Identificación de una cepa bacteriana. http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioPruebasBioquimicas.htm