Práctica 2. Determinar K´, , Rs y N para 3 columnas.

RT (min) Wb (min) K´ N   Rs

 
Uracilo (U)* 1.475 0.41166667 205.40576 1.6783608 U-F
Fenol (F) 2.075 0.30331667 0.40677966 748.796206
C18 4-cloroanilina (A) 2.39 0.4383 0.62033898 475.743478 1.525 F-A 0.84949547 F-A
Naftaleno (N) 8.759 0.68015 4.93830508 2653.50329 7.96065574 A-N 11.3889758 A-N

Uracilo (U)* 1.527 0.28166667 470.248207 2.10797971 U-F

C8 Fenol (F) 2.126 0.28665 0.39227243 880.121461
4-cloroanilina (A) 2.414 0.41496667 0.58087754 541.462133 1.48080134 F-A 0.82096111 F-A
Naftaleno (N) 5.821 0.5033 2.81204977 2140.2343 4.8410372 A-N 7.4205024 A-N

Uracilo (U)* 1.635 0.32666667 400.816743 1.52454999 U-F

Fenilo Fenol (F) 2.086 0.26498333 0.27584098 991.542817
4-cloroanilina (A) 2.366 0.37163333 0.4470948 648.515173 1.62084257 F-A 0.87965023 F-A
Naftaleno (N) 4.315 0.4183 1.63914373 1702.57344 3.66621067 A-N 4.93459364 A-N

El Uracilo fue considerado como "C. no retenido" para la determinación del Tm.

En esta práctica se comparó la influencia de 3 columnas (C18, C8 y Fenilo) evaluando: los parámetros (K´, N y ), tiempos de
retención (RT) y anchura de los picos (Wb) en modo isocrático (MeOH:H2O 70:30). Se concluye que la columna de fenilo es la mejor
(bajo estas condiciones) por dos puntos, el primero es que presenta una mayor resolución del par crítico F-A y el segundo es el pequeño
valor de K´ para el naftaleno, lo cual permite un análisis rápido.
 Práctica 3. Determinar K´ cuando se modifica la proporción de la Fase Móvil.

columna C18

80/20 metanol/agua
RT (min) K´
Uracilo 1.47
Fenol 1.809 0.23061224
anilina 1.941 0.07296849
naftaleno 4.512 1.32457496

70/30 metanol/agua
Uracilo 1.475
Fenol 2.075 0.40677966
anilina 2.39 0.15180723
naftaleno 8.759 2.66485356

En esta práctica se analizó la influencia de la fase móvil en una columna C18, evaluando: el parámetro K´ y los tiempos de
retención (RT) en modo isocrático (MeOH:H2O 80:20 y 70:30). Se concluye que al disminuir la fuerza eluente de la fase móvil, es decir,
disminuir la proporción del componente orgánico (MeOH).

 El tiempo de retención del Uracilo permanece “invariable”

 El tiempo de retención para el resto de componentes aumenta
 Aumenta la retención, es decir, la afinidad por la fase estacionaria (K´).
 Práctica 4. Extracción y cuantificación de cafeína en Pepsi Kick.
y = 15643x - 5280.7
Estandar Externo Curva Estandar R² = 0.9999
Concentración (g/mL) Área 3500000
1 13918 3000000
5 58805 2500000

U. Absorbancia
25 399798 2000000
100 1554989 1500000
200 3123919 1000000
500000
0
0 50 100 150 200 250
Concentración (µg/mL)

Muestra C (g/mL)
Alicuota de Pepsi
825972 53.139 Mezcla 80:20 kick 2.9 mL
20403 1.64187 MeOH 100 2.931 g
54.7808 Total Dilución (1:10)

Cafeina
P.K. 188.899 g/mL de Refresco
0.01889 % w/v
Etiqueta reporta 0.0195%
La extracción se realizó empleando un cartucho de extracción en fase sólida (C18), se realizó el acondicionamiento (MeOH y
Agua), se introdujo la muestra de refresco (2.9 mL). Primeramente se eluyó con agua para remover sustancias polares (azucares),
posteriormente se extrajo la cafeína con una mezcla 80:20 agua:MeOH (9 mL) y se extrajeron los compuestos no polares empleando
100% MeOH (6 mL). Estas soluciones se aforaron a 10 mL y se inyectaron al cromatógrafo (1 L). La cuantificación se realizó mediante
estándar externo, una vez obtenida la curva de calibración se calculó la concentración de cafeína presente en el refresco (188.899 g /
mL). Finalmente este valor se comparó con lo reportado en la etiqueta del producto.