Benemérita Universidad Autónoma de Puebla

PRÁCTICA 5. ACTIVIDAD ENZIMATICA

¿El CN- y Pb- inhiben la actividad de la enzima catalasa?

Materiales y reactivos
Introducción
Reacción de la enzima catalasa FUNDAMENTO DISCUSIÓN
-H2O2 -2 goteros
ENZIMAS: Son proteínas globulares responsables de la mayor parte de la actividad química de los organismos vivos. Actúan como cataliza dores, que son
Enz (Por-FeIII) + H2O2 → Compuesto I (Por+•-FeIV-O) + H2O
sustancias que aceleran las reacciones químicas sin ser destruidas o alteradas durante el proceso (a menos que estén contacto con un inhibidor). Las
enzimas son extremadamente eficientes y se pueden utilizar una y otra vez repetidamente. Una enzima puede catalizar miles ❶ Compuesto I (Por+•-FeIV-O) + H2O2 → Enz (Por-FeIII) + H2O + O2 -Papa -pinzas pequeñas Según lo observado en la práctica, todos los tubos 1 presentaron la mayor cantidad de burbujeo. Es decir, la catalasa se encontraba intacta en los tres tejidos, no se
de.reacciones.en.cada.segundo. ❷ Compuesto I (Por+•-FeIV-O) + CH3CH2OH → Enz (Por-FeIII) + CH3CHO + H2O le aplicó ningún factor para alterarla.

¿Cuáles son sus características distintivas?

El mecanismo de reacción. En la reacción de la catalasa ocurre la transferencia de dos electrones entre dos moléculas de peróxido de hidrógeno en la -hígado de pollo - papel absorbente Al tubo 2 de cada uno de los tejidos se le agregó el factor de calor y presentaron un patrón del segundo tubo con menos presencia de burbujeo. La catalasa es un
enzima de naturaleza proteica y , a partir de cierta temperatura, se empiezan a desnaturalizar por el calor. La temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima
cual una funciona como donador y otra como aceptor de electrones. El mecanismo de reacción se lleva a cabo en dos pasos. En el primero la catalasa se se llama temperatura óptima. Sin embargo, si la temperatura aumenta por encima de la temperatura óptima, disminuye e incluso cesa la actividad enzimática debido
 Son proteínas. oxida por una molécula de peróxido formando un intermediario llamado compuesto I. El compuesto I se caracteriza por tener un grupo ferroxilo con FeIV y
 Son los catalizadores más eficientes que se conocen. La mayor parte de las reacciones celulares ocurren a una velocidad alrededor de un a que la enzima se desnaturaliza.. Cada enzima posee una temperatura óptima, en las enzimas humanas suele estar alrededor de 37°C. *La enzima catalasa, al
millón de veces más alta de lo que serían en ausencia de enzimas.
un radical catiónico de porfirina. En esta reacción se produce una molécula de agua (Reacción 1). En el segundo paso de la reacción, el compuesto I es
reducido por otra molécula de peróxido regresando la catalasa a su estado inicial y produciendo agua y dioxígeno (Reacción 2).
-manzana -cuchillo igual que otras proteínas, se puede desnaturalizar al exponerla a altas temperaturas. Al perder su estructura se perderá también la función, por lo que no podrá
descomponer el agua oxigenada. Todas las enzimas son proteínas. Por lo tanto, todas las enzimas sufren desnaturalización frente al calor. Esto quiere decir que
 La mayoría de las enzimas se distinguen por su especificidad, lo que significa que cada conversión de un reactivo (llamado sustrato) en un
producto es catalizada por una enzima determinada. cuando la temperatura es muy elevada, la enzima pierde su estructura terciaria, por lo tanto su sitio activo también se desnaturaliza, y ya no puede cumplir su
 En ciertas condiciones el compuesto I puede captar un electrón originando el compuesto II. El compuesto II tiene un estado de oxidación intermedio a los función. Este hecho se puede demostrar repitiendo el experimento anterior, pero habiendo hervido previamente los trocitos de hígado. Cuando añadimos el agua
Las acciones de muchas enzimas están reguladas de modo que pueden cambiar de un estado de baja actividad a uno de alta actividad,
dependiendo de las condiciones celulares en las que se encuentren. observados en el compuesto I y la catalasa en reposo. Al reaccionar con una molécula de H2O2 forma el compuesto III, que tiene un estado de oxidación -14 tubos de ensayo - gradilla oxigenada, no se observa el burbujeo. En general, la velocidad de la reacción se incrementa con la temperatura hasta que un punto máximo es alcanzado. Este
FeVI. El compuesto II y el compuesto III son inactivos cataliticamente. La catalasa también puede catalizar ciertas reacciones como peroxidasa. En la reacción incremento se debe a que aumenta el número de moléculas ricas en energía que pueden pasar la barrera energética de estado de transición, para formar a los
de peroxidasa de la catalasa, el compuesto I puede oxidar el metanol, el etanol, el formato o el nitrato utilizando una molécula de H2O2 como oxidante (5). productos; la temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se llama temperatura óptima. Sin embargo, si la temperatura aumenta por encima de la
En 1960 se creó la Comisión Internacional de Enzimas quien propuso:
En el cerebro, la reacción de la catalasa con el etanol forma acetaldehído (Reacción 3), que explica algunos de los efectos neurológicos del alcohol en
humanos (4).
-pipetas - baño María 100°C temperatura óptima, disminuye e incluso cesa la actividad enzimática debido a que la enzima se desnaturaliza. Cada enzima pos ee una temperatura óptima, en las
enzimas humanas suele estar alrededor de 37°C.
➢ El uso de un nombre propio. ➢ El uso de un nombre descriptivo.
➢ El uso de un nombre sistemático. ➢ El uso de un número de
Inhibidores CN- y Pb- En el tubo 3 de los tejidos fueron los que menos burbujas tenían, aquí se encontró la presencia del inhibidor CN- que es un inhibidor competitivo irreversible cuyas
clasificación. -cianuro de sodio al 5% - Nitrato de plomo al 5% moléculas son semejantes en composición y morfología a las de ciertas sustancias activas. Éstas son capaces de unirse a ciertos receptores de las células y
Ambos inhibidores son irreversibles. provocar un efecto, en este caso va a detener todo el proceso que realice la enzima catalasa reduciendo su presencia.
NÚMERO DE CLASIFICACIÓN DE LA ENZIMA

El número de clasificación de las enzimas consta de 4 dígitos separados por puntos. A . B . C . D. Inhibición. La actividad enzimática se puede inhibir, es decir, reducir o eliminar la actividad enzimática o catalítica de enzimas específicas. La inhibición puede Desarrollo En los tubos número 4 el burbujeo fue moderado, pues el inhibidor Pb- actúa diferente, no se sitúa totalmente en el sitio activo si no que hace que la enzima catalasa
retarde y se le dificulte el proceso o la función que tiene que realizar, por ello se nota que un poco de burbujeo al aña dirle el H2O2.
ser: Irreversible - el inhibidor se une covalentemente a la enzima, casi siempre a un grupo de la cadena lateral de los amino ácidos en el foco activo. La
enzima queda inactiva permanentemente.
El primer dígito es la CLASE. Indica el tipo de reacción.

Reversible: el inhibidor puede disociarse de la enzima porque no se une por enlaces covalentes. Esta inhibición puede ser competitiva o no-competitiva.
El segundo dígito es la SUBCLASE. Indica el sustrato.

El tercer dígito es la SUB SUB CLASE. Indica el con su sustrato. Inhibición Competitiva: el inhibidor competitivo es muy similar al sustrato normal de la enzima. Dada esa similitud estructural, este tipo de inhibidor se une
reversiblemente al foco activo de la enzima.

El cuarto dígito es el NÚMERO DE ORDEN. La comisión internacional de las enzimas ha clasificado a las enzimas en 6 clases que son:
Inhibición No-Competitiva: el inhibidor se combina con la enzima en un lugar distinto al foco activo. La unión del inhibidor afecta la configuración tridimensional
de la enzima y bloquea la reacción. Este tipo de inhibidor no compite directamente con el sustrato para unirse a la enzima (no afecta la unión ES).

Cianuro: Es una sustancia química de uso industrial, minero como agente acomplejante de iones metálicos, en la galvanoplastía de elect rodeposición de
zinc, oro, cobre y especialmente plata, y de uso en la producción de plásticos de base acrílica.

Se coordina muy fuertemente con el ion Fe (III). Esto hace que el ion Fe (III) no tenga la capacidad de reaccionar con el oxí geno extra del peróxido de
hidrógeno, y entonces no cumpla su función. El cianuro se une por en laces covalentes al grupo funcional de la enzima, Conclusión
La acción de la catalasa es por vía de la reacción directa del ión Fe(III) con el oxígeno, para liberar el peróxido y formar agua. La elevada constante de
formación de complejos de hierro trivalente y divalente con aniones cianuro es debida al fuerte enlace sinérgico originado por la suma de dos efectos:

INACTIVACION ENZIMATICA
Factores que afectan la actividad enzimática: La pérdida de actividad de una enzima se puede lograr por desnaturalización, ya que se trata de una
proteína y por lo tanto le afectan pH, temperatura, agitación vigorosa, por citar algunos agentes. Las enzimas presentan un c omportamiento diferente frente
a los cambios de pH dependiendo del comportamiento ácido-base de la enzima y el sustrato. Estos comportamientos pueden explicarse por:
…………………………………………………..’’9999999999999999999999999999999999999999999999999
1. Una alteración de la carga neta de la proteína que repercute en la solubilidad.¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿
2. Alteración de la conformación de la proteína al afectar los niveles 3º y/o 4º lo cual repercute en una mayor o menor
actividad.¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿
3. Un efecto del pH sobre el sustrato.¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿
4. Una combinación de los efectos anteriores.’’’’’’¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿
Efecto de la concentración. La velocidad maxima se presenta debido a la ocupación del sitio activo de todas las enzimas prese ntes es decir se han saturado
los sitios activos. Otra forma de hacer que la actividad de una enzima se pierda o disminuya es a través del uso de inhibidores.
Inhibidores: Una forma de hacer que la actividad de una enzima se pierda o disminuya es a través del uso de inhibidores. Los inhibidores producen
disminución en la actividad enzimática, a través de interacciones con el centro..activo.
Reversible:.Los.inhibidores.se.unen.en.forma.no.covalente.
Irreversible:.Los.inhibidores.se.unen.en.forma.covalente.
Dependendiendo.de.la.cantidad.de.enzima.o.inhibidor.la.inhibición.puede.ser.
Total:.La.concentración.de.inhibidor.es.igual.o.mayor.que.la.enzima. Parcial: La
concentración es menor que la enzima.
Tipos de inhibición reversibles:
Competitiva: Las sustancias que se comportan como inhibidores competitivos, suelen tener una estructura semejante a la del sustrato.
Acompetitiva: El inhibidor solo se une al complejo enzima-sustrato, y no a la enzima libre.
No competitiva: La adición de más sustrato a la reacción da lugar a un aumento de la velocidad de reacción, pero no hasta el grado notado en las
reacciones sin inhibir.
- Donación de e- por parte del ligando en enlace s.
- Retrodonación de e- por parte del metal en enlace p. Ya que el cianuro se une por en laces covalentes al grupo funcional de la enzima, su inhibición es
irreversible.
El plomo: La adición de plomo puede lograr una sustitución del ion Fe (III) por la del ion Pb (II). Cuando se logra la sustitución, la enzima queda desactivada,
pues el plomo (ahora en la enzima) no tiene la cantidad de orbitales vacíos para cumplir con la misma función del hierro. La adición de ion cianuro tiene un
modo diferente de actuar. La unión del plomo a la catalasa se da en los grupos sulfhídrico-libres de las cisteínas que contiene la enzima, de forma covalente,
por lo que su inhibición sobre la enzima es irreversible.
RESULTADOS
TEMPERATURA: La temperatura afecta a las reacciones químicas. Las reacciones enzimáticas no son la excepción. Pero debido a que las enzimas son
proteínas se presenta una desnaturalización térmica. En general, la velocidad de la reacción se incrementa con la temperatura hasta que un punto máximo
es alcanzado. Este incremento se debe a que aumenta el número de moléculas ricas en energía que pueden pasar la barrera energética de estado de
transición, para formar a los productos; la temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se llama temperatura óptima. Sin embargo, si la temperatura
aumenta por encima de la temperatura óptima, disminuye e incluso cesa la actividad enzimática debido a que la enzima se desnaturaliza. Cada enzima
posee una temperatura óptima, en las enzimas humanas suele estar alrededor de 37°C. *La enzima catalasa, al igual que otras proteínas, se puede
desnaturalizar al exponerla a altas temperaturas. Al perder su estructura se perderá también la función, por lo que no podrá descomponer el agua oxigenada
HÍGADO
El plomo y el cianuro sí actúan como inhibidores de la catalasa, reducen su actividad enzimática relacionándose con el grupo HEM en el caso del cianuro y con los SH en
el caso del plomo. Debido al efecto de la temperatura sobre las proteínas estas sufren desnaturalización a lo que conlleva que la catalasa pierda su actividad biológica y
por lo tanto ya cumple su función.
Cuestionario
1. ¿Cuál es el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática?
PAPA MANZANA R= Al ser proteínas, a partir de cierta temperatura, se empiezan a desnaturalizar por el calor. La temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se
llama temperatura óptima. Sin embargo, si la temperatura aumenta por encima de la temperatura óptima, disminuye e incluso cesa la actividad enzimátic a
debido a que la enzima se desnaturaliza.. Cada enzima posee una temperatura óptima, en las enzimas humanas suele estar alrededor de 37°C. *La enzima
catalasa, al igual que otras proteínas, se puede desnaturalizar al exponerla a altas temperaturas. Al perder su estructura se perderá también la función, por lo
que no podrá descomponer el agua oxigenada. Todas las enzimas son proteínas. Por lo tanto, todas las enzimas sufren desnaturalizarción frente al calor. Esto
quiere decir que cuando la temperatura es muy elevada, la enzima pierde su estructura terciaria, por lo tanto su sitio activo también se desnaturaliza, y ya no
puede cumplir su función. Este hecho se puede demostrar repitiendo el experimento anterior, pero habiendo hervido previamente los trocitos de hígado. Cuando
añadimos el agua oxigenada, no se observa el burbujeo. En general, la velocidad de la reacción se incrementa con la temperatura hasta que un punto máximo
es alcanzado. Este incremento se debe a que aumenta el número de moléculas ricas en energía que pueden pasar la barrera energética de estado de
transición, para formar a los productos; la temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se llama temperatura óptima. Sin embargo, si la temperatura
aumenta por encima de la temperatura óptima, disminuye e incluso cesa la actividad enzimática debido a que la enzima se desna turaliza. Cada enzima posee
una temperatura óptima, en las enzimas humanas suele estar alrededor de 37°C.
2. ¿Qué es el factor Q-10?

Catalasa: La catalasa es una enzima antioxidante presente en la mayoría de los organismos aerobios. Cataliza la dismutación del peróxido de hidrógeno
R= Es el coeficiente de temperatura Q10 es la medida de la tasa de variación de sistemas químicos o biológicos como consecuencia del incremento de 10 °C de
(H2O2) en agua y oxígeno. La mayoría de estas enzimas son homotetrámeros con un grupo hemo en cada subunidad. Se ha determinado la estructura de
nueve catalasas. Algunas catalasas tienen subunidades pequeñas (masa molecular ≈ 60 kDa) y otras grandes (masa molecular > 80 kDa). Se han la temperatura. Otro parámetro que se utiliza para cuantificar el efecto de la temperatura es el coeficiente de temperatura (Q10), que se define, para una
identificado tres grupos de catalasas: i) las catalasas monofuncionales, que contienen hemo y están presentes tanto en los organismos procariotos como en temperatura dada, como el factor de incremento de la velocidad de reacción cuando la temperatura se incrementa 10 o C. S
los eucariotos, ii) las Mn-catalasas, que son enzimas hexaméricas que no tienen hemo, tienen Mn en el sitio activo y sólo están presentes en algunos
organismos procariotos anaerobios y iii) las catalasas-peroxidasas, que tienen actividad de catalasa y de peroxidasa, contienen hemo y sólo están 3. Escribe el complejo que se forma con el Fe y CN
presentes en las bacterias y los hongos.
Tanto el ion ferroso como el férrico forman un complejo con seis iones de 𝐶𝑁 − y estos son denominados ferrocianuro, es un complejo octaédrico. La diferencia
radica en el complejo de hierro II (ferroso) debido a su capacidad de tener un electro más que el hierro III ( férrico).

Catalasa a nivel estructural: Es un tetrámero de cuatro cadenas polipeptidicas, cada una larga cadena con 500 aminoácidos. contiene cuatro grupos
hemo porfirinicos (hierro) que llevan a la enzima a reaccionar con el peroxido de hidrógeno. El pH óptimo para la catalasa es aproximadamente de 7, la
PAPA MANZANA HÍGADO
temperatura varia por especie. El centro activo de la catalasa es una proteína hemo denominada citrocromos. El hemo de la catalasa es un complejo de
hierro y porfirina de alto giro de protoporfirina lX. La protoporfirina es una nomenclatura alternativa para el grupo hemo de la catalasa; define sus
propiedades químicas. tubo 1 XXXX tubo 1 XX tubo 1 XXXX

tubo 2 X tubo 2 0 tubo 2 XX

tubo 3 0 tubo 3 0 tubo 3 X

- Donación de e- por parte del ligando en enlace s.

- Retrodonación de e- por parte del metal en enlace p. Ya que el cianuro se une por en laces covalentes al grupo funcional de la enzima, su inhibición es
tubo 4 XXX tubo 4 X tubo 4 XXX
irreversible

Nitrato de plomo: Inhibidor irreversible: puede lograr una sustitución del ion Fe (III) por la del ion Pb (II). Cuando se logra la sustitución, la enzima queda
desactivada, pues el plomo (ahora en la enzima) no tiene la cantidad de orbitales vacíos para cumplir con la misma función del hierro. La adición de ion
cianuro tiene un modo diferente de actuar. La unión del plomo a la catalasa se da en los grupos sulfhídrico-libres de las cisteínas que contiene la enzima, de
Bibliografía
forma covalente, por lo que su inhibición sobre la enzima es irreversible. Ayudas didácticas
La manera en que estos inhibidores se unen es que el sustrato, en este caso el peróxido de hidrógeno se une a los aminoácidos catalíticos y de jfijación que
www.farmacopea.org.mx/Repositorio/Documentos/110.pdf
es donde se llevan a cabo las interacciones con el sustrato.