Adhesión y señalización de células

endoteliales
1. Introducción

Las células endoteliales (EC) forman una barrera semipermeable para separar la corriente
sanguínea de los órganos y tejidos subyacentes y controlar el transporte de fluidos, solutos y
células a través de las paredes de los vasos sanguíneos. La barrera está mediada por
adhesiones de células endoteliales incluyendo uniones estrechas (TJ), uniones adherentes (AJ)
y una variedad de otras moléculas de adhesión que incluyen PECAM-1 y nectinas, que están
conectadas al citoesqueleto de actina a través de diferentes moléculas adaptadoras (Fig. 1). La
arquitectura y la composición de las uniones célula-célula varía entre los lechos vasculares
dependiendo de los requisitos específicos del órgano [1, 2]. Además de mantener la adhesión
entre EC, las uniones célula-célula controlan la permeabilidad vascular y la migración de
leucocitos mediante un complejo equilibrio entre múltiples moléculas de señalización (Figuras
1 y 2) [3,4]. TJs regulan la difusión de iones y solutos polares y bloquean la penetración de
grandes macromoléculas a través de EC. TJs están formados por las moléculas de adhesión
homófilas célula-célula occludin, claudinas y moléculas de adhesión de unión (JAM) (Fig. 1)
[5,6]. Las claudinas son las principales proteínas que forman barreras, en particular la claudina-
5 es crítica para la permeabilidad endotelial in vivo e in vitro [7]. La ocludina y las claudinas
están relacionadas con zonula ocludens (ZO) -1, ZO-2, ZO-3, cingulina y otros complejos
proteicos, que median la interacción entre las moléculas de adhesión y los filamentos de actina
[5]. La familia JAM está compuesta por tres proteínas estrechamente relacionadas JAM-A, -B y
-C, y por el receptor coxsackie y adenovirus (CAR). Los JAM median la interacción célula-célula
endotelial y regulan la migración transendotelial de leucocitos (TEM) [8]. Tanto JAM como CAR
regulan la permeabilidad al soportar la función y el ensamblaje de TJ [9]. VE-cadherina es el
componente transmembrana clave de AJs endoteliales y se expresa solo en EC [10]. La VE-
cadherina junto con PECAM-1 inicia y mantiene el contacto célula-célula endotelial,
manteniendo unidos los CE para proporcionar soporte mecánico al endotelio y proporcionar
estabilidad a la unión endotelial [11,12]. AJ puede regular la expresión de los componentes TJ y
la organización TJ sigue la formación AJ [11,13]. Además, AJs y TJs están interconectados [14],
por ejemplo, la diafonía de las proteínas ZO con AJs [15]. VE-cadherina está vinculada
indirectamente a través de su cola citoplásmica a los filamentos de actina por un complejo de
proteínas que incluyen α- y β-cateninas, placoglobina (γ-catenina), p120-catenina, vinculina y
α-actinina (Fig. 1) [16] , que son vitales para la estabilidad de las uniones y también para la
apertura y el cierre dinámicos de las uniones [17]. Aquí discutimos los roles de las uniones
endoteliales de células y células en la señalización que conducen a cambios en la
permeabilidad endotelial y durante la migración transendotelial de leucocitos (TEM), con un
enfoque particular en las pequeñas GTPasas.

2. Regulación de pequeñas GTPasas

Varios miembros de la superfamilia Ras de pequeñas GTPasas contribuyen a la adhesión de

células endoteliales y, por lo tanto, regulan la permeabilidad endotelial y / o la TEM de
leucocitos. Estos incluyen Rap1, Rap2 y varias familia de Rho GTPasas (Figuras 2 y 3). La
mayoría de las GTPasas pequeñas ciclan entre una conformación inactiva del GDP-bound y una
conformación GTPbound activa. Este ciclo está regulado por factores de intercambio de
nucleótidos de guanina (GEF), que catalizan el intercambio de GDP por GTP, activando así las
proteínas, y por las proteínas activadoras de GTPasa (GAP), que estimulan la hidrólisis de GTP e
inactivan las proteínas. La interacción entre pequeñas GTPasas y sus efectores aguas abajo a
menudo requiere su localización en las membranas, que está mediada por la modificación
postraduccional por los lípidos (prenilación y / o palmitoilación) [18,19]. Por ejemplo, se
requiere la geranilgeranilación de Rho GTPasas para la permeabilidad inducida por trombina
en EC [20]. Algunas GTPasas pequeñas se inhiben al unirse a las proteínas que las extraen de
las membranas, incluidos los inhibidores de la disociación de nucleótidos de guanina (GDI) y las
proteínas 14-3-3 [21,22]. Pequeñas GTPasas son rápidamente

activado por los receptores de la superficie celular, y una sola GTPasa puede interactuar con
múltiples objetivos aguas abajo para inducir un rango de respuestas celulares en una forma
espacio-temporal, dependiendo del estímulo y el tipo de célula [19].

Fig. 1. Las principales proteínas transmembrana en las uniones célula-célula endoteliales. Las
células endoteliales se alinean en el torrente sanguíneo y están constantemente expuestas al
estrés por cizalladura del fluido (panel superior). El panel inferior muestra las principales
proteínas transmembrana en las uniones célula-célula endoteliales (derecha). Están asociados
con uniones estrechas o uniones adherentes como se indica, con la excepción de PECAM-1,
que no está asociado con ningún tipo de unión. Se informa que tres genes diferentes de
claudina, JAM y nectina se expresan en células endoteliales (números / letras indicadas bajo el
nombre de la proteína). Las proteínas intracelulares unen las proteínas transmembrana al
citoesqueleto de actina. Hay moléculas de unión adicionales, como CD99 y ESAM, que se
omiten para mayor claridad.

3. Señalización de las uniones endoteliales en la permeabilidad vascular

Las uniones endoteliales de células y células se remodelan dinámicamente en respuesta a
múltiples estímulos extracelulares, que aumentan o disminuyen transitoriamente la
permeabilidad endotelial y regulan así la entrada de solutos y macromoléculas polares en los
tejidos del torrente sanguíneo (Fig. 2) [4]. Por ejemplo, los estímulos proinflamatorios como la
trombina, la histamina y el TNFα aumentan la permeabilidad, mientras que los mediadores
antiinflamatorios como la esfingosina 1-fosfato (S1P) y la angiopoyetina-1 disminuyen la
permeabilidad [23]. El aumento de la fuga de la barrera vascular se asocia con la interrupción
de las uniones endoteliales, en particular AJs [10], y se produce en enfermedades como el
cáncer, la aterosclerosis, la diabetes, la hipertensión, la inflamación y la isquemia [24,25].
Además, las malformaciones cavernosas cerebrales (MCP) son enfermedades hereditarias o
esporádicas que se asocian con la desorganización de las uniones de vasos microvasculares
cerebrales venosos y el aumento de la permeabilidad [26].

Fig. 2. Moléculas de señalización que regulan la permeabilidad vascular. Las principales

proteínas de unión que regulan la permeabilidad vascular se muestran en la célula derecha. La
celda izquierda muestra ejemplos de receptores que aumentan la permeabilidad vascular y las
moléculas de señalización intracelular que contribuyen a esta respuesta, centrándose en
aquellos regulados por Rho y Rap GTPasas. ROS, especies de oxígeno reactivo.
Fig. 3. Moléculas de señalización que regulan la migración transendotelial de leucocitos. La
unión de los leucocitos y la transmigración a través de las células endoteliales es un proceso de
múltiples pasos, que implica una variedad de diferentes moléculas de adhesión en los
leucocitos y las células endoteliales (panel superior). Durante la migración transendotelial, las
moléculas de adhesión endotelial ICAM-1, VCAM-1 y PECAM-1 interactúan con leucocitos y
transmiten señales a la célula endotelial (panel inferior), lo que promueve el proceso de
transmigración. La celda izquierda muestra señales que implican RhoG, Rac1 y Rap1 GTPasas;
la celda derecha muestra señales que involucran a RhoA. LBRC, compartimiento de reciclaje de
borde lateral; ROS, especies de oxígeno reactivo.
3.1. Señales que aumentan la permeabilidad endotelial

Los estímulos proinflamatorios aumentan la permeabilidad a través de una combinación de

cambios en AJ, TJ y el citoesqueleto de actina asociado (Fig. 2). La composición e integridad de
AJ está regulada por cambios en la fosforilación de las proteínas de unión. Por ejemplo, la
trombina activa la serina / treonina quinasa proteína quinasa C (PKC) α, que induce el
desensamblaje del complejo VE-cadherina mediante la fosforilación de p120ctn [27]. En ECs
estimulados por VEGF, Src media la activación de Rac1, lo que conduce a la fosforilación de VE-
cadherina a través de la serina / treonina quinasa PAK, y por lo tanto aumenta la
permeabilidad endotelial [28]. El LPS activa la familia Rab GTPasa Rab5, que media la
internalización de VE-cadherina, dando como resultado un aumento de la permeabilidad [29].

La fosforilación de la tirosina de los componentes AJ también se asocia con una mayor

permeabilidad. En las EC no estimuladas, el receptor y la proteína tirosina fosfatasas (PTP)
citoplásmicas se localizan en los AJ endoteliales y desfosforilan los componentes AJ para
reducir la permeabilidad [17,30,31]. Por ejemplo, la tirosina fosfatasa SHP2 se asocia con β-
catenina en VE-cadherin / p120 / plakoglobin complejos [32]. La depleción de SHP2 potencia la
fosforilación de los componentes del complejo AJ que conduce a una mayor permeabilidad en
respuesta a la trombina [32,33]. El TNFα aumenta la fosforilación de la tirosina de VE-
cadherina para mejorar la permeabilidad vascular [34,35]. La fosforilación VE-cadherin Tyr685
es necesaria para la permeabilidad inducida por VEGF e histamina in vivo [36]. Además, se
informó que la fosforilación de VE-cadherina en Tyr658 y Tyr685 era necesaria para aumentar
la permeabilidad y la endocitosis de VE-cadherina en respuesta a bradiquinina e histamina
[37].

Los contactos célula-célula endoteliales están relacionados con el citoesqueleto de actina, que
es fundamental para la estabilidad de la unión y contribuye a los cambios en la permeabilidad
vascular [38]. Los factores inductores de permeabilidad desestabilizan las uniones célula-célula
al cambiar la orientación del haz de actina, que pasa de ser paralela a las uniones a ser
perpendicular. Los filamentos de actina perpendiculares, incluidas las fibras de tensión,
imponen una fuerza mecánica sobre las uniones y alteran su integridad [39-41]. RhoA induce
fibras de estrés y aumenta la contractilidad que conduce a una mayor permeabilidad vascular
en respuesta a una variedad de estímulos extracelulares que incluyen trombina e histamina
(Fig. 2). RhoA activa la serina / treonina quinasa ROCK, que fosforila la subunidad MYPT1 de la
fosfatasa de la cadena ligera de miosina trimérica (MLC), inhibiendo así su enzima

actividad [42,43]. La posterior fosforilación incrementada de MLC conduce a un aumento de la

contractilidad de la actomiosina. RhoA se requiere para una mayor permeabilidad en
respuesta a varios estímulos, incluidos la trombina y el TNF α [44]. Curiosamente, RhoB y RhoC
también se activan por la trombina [45], y RhoB promueve la contracción sostenida inducida
por la trombina [46]. Por el contrario, la activación de RhoA por angiopoyetina-1 conduce a la
estabilización de la unión célula-célula e inhibe la permeabilidad inducida por VEGF, y esta
respuesta depende de la formina mdi1 activada por Rho, pero no de la ROCK [47]. Esto sugiere
que el efecto de RhoA en las uniones depende de si activa ROCK, promoviendo la
contractilidad de la actomiosina, o sobre mDia1, que estimula la polimerización de la actina
[48].

El aumento de la permeabilidad a menudo refleja la pérdida de proteínas TJ a partir de las

uniones, lo que está relacionado con la señalización mejorada de RhoA / ROCK. Por ejemplo,
ROCK induce la fosforilación de claudin-5 y occludin [49]. El TNFα aumenta la permeabilidad al
inducir una disminución de claudina-5 en las uniones a través de ROCK1 y ROCK2 [50]. LPS
induce la pérdida de proteínas TJ y el aumento de la permeabilidad endotelial a través de la
activación de RhoA por p115RhoGEF [51]. En el complejo TJ, ZO-1 está unido a la cingulina que
está unida al citoesqueleto de actina (figura 1). La cingulina promueve la función de barrera
endotelial in vitro e in vivo, en parte interactuando e inhibiendo el RhoA GEF-H1 [52,53],
mientras que la proteína JACOP de cingulina se asocia con p114RhoGEF para mantener las TJ y
AJ endoteliales, presumiblemente al estimular la actividad de RhoA en uniones célula-célula
[15]. Esto indica que el sitio de activación de RhoA, y cuál de sus objetivos estimula, determina
si inhibe o estimula la interrupción de la unión.

3.2. Señales que reducen la permeabilidad

Los estímulos que reducen la permeabilidad y promueven la función de barrera endotelial

generalmente actúan a través de tres GTPasas pequeñas, Rap1, Rac1 y Cdc42, y como se
describió anteriormente en algunos casos RhoA, que actúan juntas a través de redes de
señalización interconectadas (Figura 2). Por ejemplo, la trombina inicialmente aumenta la
permeabilidad endotelial a través de RhoA, pero también aumenta la generación de S1P, que
luego estimula la activación de Rac1, lo que da como resultado una mayor integridad de la
barrera para revertir la permeabilidad inducida por la trombina [54].

La integridad de la unión endotelial se ve reforzada por estímulos que elevan los niveles de
cAMP, como adrenomedulina, prostaciclina, prostaglandina E2 y agonistas β-adrenérgicos, que
reducen la permeabilidad de la CE [55]. cAMP activa directamente el RapGEF Epac, que activa
Rap1 [56]. Hay dos proteínas Rap1, Rap1a y Rap1b. Rap1b es el más expresado en EC, pero la
depleción de Rap1a reduce la función de barrera de EC más que la depleción de Rap1b, lo que
podría explicarse por su colocalización con VE-cadherin en AJs [57].

Rap1 actúa a través de múltiples vías para promover la adhesión mediada por VE-cadherin y
mantener la función de barrera [56]. En primer lugar, conduce a la activación de Rac1 y Cdc42,
que a su vez fortalecen las uniones célula-célula endoteliales. Por ejemplo, Epac1 / Rap1
actúan a través de Rac GEFs Tiam1 y Vav2 para promover la activación de Rac1 [55]. Además,
los eritrocitos circulantes o las plaquetas liberan S1P que activa Rac1 aguas abajo de Rap1 a
través de Akt, lo que lleva a la estabilización de la barrera endotelial [58,59]. Rap1 también
promueve el ensamblaje de un complejo mecanosensor de unión de PECAM1, VE-cadherina y
VEGFR2 en respuesta al estrés de cizalladura, que luego activa Rac1 a través de Vav2 y Tiam1.

para aumentar la función de barrera [60-62]. Finalmente, Rap1 activa Cdc42 a través de
RhoGEF FGD5 para promover la estabilización de la unión célula-célula [63,64]. Además de
activar Rac1 y Cdc42, Rap1 actúa a través de varios mecanismos para reducir la actividad de
RhoA / ROCK, lo que resulta en una mayor función de barrera endotelial (Fig. 2). Actúa a través
de su efector Rasip1, que recluta el RhoGAP ARHGAP29 para inhibir la actividad de RhoA y
ROCK [65,66]. Rasip1 también disminuye la formación de fibras de estrés y la permeabilidad
endotelial por interacción directa con el corazón del receptor transmembrana de vidrio (HEG1)
[67]. Además, Rap1 controla la barrera endotelial al reclutar su efector CCM1 / KRIT1 a las
uniones EC, lo que reduce las fibras de estrés y la actividad de RhoA en los CE [68,69]. A
diferencia de Rap1, el agotamiento de Rap2 aumenta la resistencia a la barrera endotelial,
aunque no se conoce el mecanismo por el que la función de barrera de Rap2 altera [70].

Rac1 aumenta la estabilidad de la unión EC y por lo tanto reduce la permeabilidad, tanto al

estimular la extensión de lamellipodia para cerrar espacios intercelulares como al inducir el
ensamblaje de haces corticales de actina F y reducir la tensión de actomiosina [71,72].
Además, el estrés de cizallamiento actúa a través de VE-cadherina, Tiam1 y Rac1 para reducir
el nivel de fosforilación de la tirosina en ocludina, lo que conduce a una mejora de la barrera
[73], aunque

la tirosina fosfatasa implicada en esta vía no ha sido identificada, la angiopoyetina-1 reduce la

fosforilación de ocrosina ocludina a través de la proteína tirosina fosfatasa N-2 y promueve la
interacción ocludina con ZO-1 para mejorar las TJ [74], por lo que será interesante probarla si
esta fosfatasa actúa aguas abajo de Rac1.

Rac1 actúa a través de varios efectores aguas abajo para mediar la estabilización de unión,
incluido IQGAP1, que se une a Rac1 y Cdc42, e interactúa con activadores de la polimerización
de actina (N-WASP, complejo Arp2 / 3) para promover el ensamblaje de AJ [75,76]. Por el
contrario, se ha informado que Rac1 aumenta la permeabilidad aguas abajo de VEGF a través
de PAKmediante la fosforilación de un motivo altamente conservado dentro de la cola
intracelular de VE-cadherina, Ser665, lo que resulta en la internalización de VE-cadherina [47].
VEGF activa VEGFR2 que se asocia con VE-cadherina y activa Rac1 a través de Src y RacGEF
Vav2 [47]. El VEGF también puede actuar a través del intercambiador de Rac fosfatidilinositol
(3,4,5) -trisfosfato dependiente (P-Rex1) para activar Rac1 y aumentar la permeabilidad [77].
Por lo tanto, es probable que el efecto de Rac1 sobre la permeabilidad dependa del contexto
celular.

Además de ser activado aguas abajo de Rap1, Rac1 se activa localmente en las uniones célula-
célula, en parte a través de RhoGEFs Trio y Tiam1, que interactúan con VE-cadherina [44,78-
80]. Por otro lado, los mediadores inflamatorios tales como LPS, TNFα, angiotensina 2 y
trombina reducen la actividad de Rac1 lo que resulta en la apertura de la unión y el aumento
de la permeabilidad [81]. RhoB inhibe la actividad de Rac1 en las uniones al reducir el tráfico
de Rac1 a las uniones célula-célula. La expresión de RhoB es inducida por las citoquinas
inflamatorias TNFα e IL-1β, y promueve la contracción sostenida de la CE sobre la exposición a
la trombina en el contexto de la inflamación [46].

Al igual que Rac1, Cdc42 es importante para mantener AJs [82-84]. Por ejemplo, Cdc42
restaura la función de barrera endotelial sobre la estimulación con trombina [85]. El aumento
de la permeabilidad endotelial inducida por la pérdida o desestabilización de VE-cadherina
aumenta la actividad de Cdc42 [84,86], lo que presumiblemente promueve la restauración de
las uniones. In vivo, se requiere Cdc42 para la adhesión célula-célula endotelial durante el
desarrollo, y es necesaria para la polaridad endotelial [87].

Cdc42 actúa a través de varios mecanismos para estimular el ensamblaje AJ. Promueve el
transporte de VE-cadherina después de Golgi a AJs [88] y controla la unión de α-catenina con
β-catenina y la interacción del complejo VEcadherin con el citoesqueleto de actina [84].
Además, Cdc42 controla la organización de la actina, pensó dos vías: primero a través de sus
efectores PAK2 y PAK4 que regulan la actomiosina de unión, y en segundo lugar a través de
NWASP que se requiere para el ensamblaje de la actina de unión [87]. También se ha
informado que Cdc42 actúa a través de la proteína quinasa C PKC1 atípica para mediar en la
adhesión de células endoteliales in vivo [89].

En general, la permeabilidad endotelial refleja las acciones combinadas de múltiples moléculas

de señalización, incluidas pequeñas GTPasas, quinasas y fosfatasas, que modifican
directamente las moléculas de unión y actúan sobre el citoesqueleto de actina asociado para
alterar la integridad de la unión (figura 2).
4. Señalización en las uniones endoteliales y migración transendotelial leucocitaria

La TEM de leucocitos es esencial tanto en inmunosurvencias como durante el daño o la

infección tisular [90,91]. El TEM es un proceso único en el cual un leucocito se comprime a
través del endotelio e implica una señalización dinámica entre los leucocitos y las EC que
conduce a los cambios en la morfología requerida para TEM (Fig. 3).

Los leucocitos cruzan el endotelio a través de una cascada de pasos múltiples que involucra la
captura, enrollamiento, adhesión y rastreo de leucocitos, seguida de migración de leucocitos a
través del endotelio en presencia de fuerzas de cizallamiento ejercidas por el flujo sanguíneo
(Fig. 3) [92-94]. Los leucocitos pueden atravesar el endotelio a través de dos rutas diferentes:
paracelular, a través de las uniones célula-célula, o transcelular, a través del cuerpo celular
endotelial [95,96]. La elección de la ruta depende del tipo de célula transmigratoria, el sitio de
TEM y el tipo de endotelio vascular [97,98].

Además, la ruta de la diapedesis depende de la integridad de la unión endotelial: es más

probable que las células T tomen una ruta transcelular cuando las uniones se fortalecen [99].

Varias moléculas de adhesión expresadas por EC contribuyen a TEM, incluyendo ICAM-1 y / o

VCAM-1 en la superficie luminal y PECAM-1 y / o JAM en las membranas basolaterales
[8,93,100]. La expresión y regulación de estas moléculas depende del estrés cortante del flujo
sanguíneo, las citoquinas proinflamatorias y las quimiocinas, el lecho vascular y la rigidez del
tejido [101,102].

4.1. Arrastre de leucocitos y extensión endotelial de estructuras de atraque

Los leucocitos inicialmente se arrastran sobre CE antes de arrestar y transmigrar.

La interacción de la integrina leucocitaria LFA-1 / αLβ2 con ICAM-1 activa RhoA [94]. RhoA
promueve la rigidez de la superficie endotelial, mejorando la migración de leucocitos sobre ella
y, por lo tanto, la capacidad de los leucocitos para encontrar un sitio para TEM. ICAM-1 activa
RhoA a través de RhoGEF LARG (Rho GEF asis- tido por leucemia, ARHGEF12), y el agotamiento
de LARG endotelial reduce el rastreo de leucocitos en los CE [103].

Las CE a menudo extienden protuberancias dinámicas a modo de microvellosidades conocidas

como estructuras de atraque o copas transmigratorias alrededor de leucocitos adherentes
(Figura 3) [94]. Estas estructuras contribuyen a TEM, probablemente al aumentar el área de
contacto leucocito-endotelio con una interrupción mínima de la barrera y para ayudar a los
leucocitos a extender las protuberancias para cruzar el endotelio [104]. Inicialmente ICAM-1 y
VCAM-1 se agrupan en estructuras similares a anillos alrededor del leucocito, seguidas por la
protrusión de la membrana apical. El anclaje de ICAM-1 al citoesqueleto de actina a través de
proteínas adaptadoras, tales como filamina y cortactina, es esencial para la formación de
anillos de ICAM-1 y la posterior TEM de los leucocitos [105-107].

Se requiere Rac1 para la agrupación ICAM-1, mientras que RhoG controla la protrusión de la
membrana (Fig. 3). RhoG se activa mediante la unión de ICAM-1 al GEF SGEF específico de
RhoG [108]. ICAM-1 también se asocia y activa el GEF Trio, que activa Rac1 y luego RhoG a
través de sus dos dominios RhoGEF [109]. Curiosamente, la expresión de Trio está fuertemente
regulada positivamente por estimulación de TNFα, lo que sugiere que el ensamblaje de la
estructura de acoplamiento está acoplado a la inducción de ICAM-1 y VCAM-1 [109].
4.2. Cruzando el endotelio y cerrando el poro de transmigración

Para TEM paracelular, se producen dos eventos de señalización una vez que el leucocito está
anclado al endotelio: internalización VE-cadherina local a través de vesículas recubiertas de
clatrina y afluencia de proteínas de membrana y membrana que incluyen PECAM-1 desde un
compartimento de reciclado de borde lateral (LBRC) al TEM sitio [110-113].

La apertura de la unión implica la señalización de VCAM-1 a VE-cadherina.

La interacción de VCAM-1 con la integrina leucocitaria VLA-4 induce la activación de Rac1 y la

producción subsiguiente de especies de oxígeno reactivo intracelular (ROS) por NADPH oxidasa
[114]. Esto a su vez activa la tirosina quinasa rica en prolina (Pyk2) [115] que luego fosforila VE-
cadherina en Tyr658 y Tyr731 dando como resultado la pérdida local de la función VEcadherin,
apertura de la unión y aumento de TEM (Fig. 3) [36,116-118]. La inhibición de esta vía, a través
de la PI3-quinasa p110α, Pyk2 y Rac1, reduce la TEM [114,118-120]. Rac1, ROS y Pyk2 también
inducen la disociación de VE-PTP de VE-cadherina, dando lugar a un aumento de la
fosforilación de la tirosina de VE-cadherina y de la internalización de VE-cadherina facilitando
así la transmigración [3,31,113,121].

Además, la señalización endotelial estimula la contractilidad de la actomiosina de unión y

actúa sobre las proteínas de unión célula-célula, lo que conduce al desensamblaje de la unión
transitoria y local esencial para la TEM de los leucocitos [94,122].

Múltiples proteínas están asociadas con la fracción LBRC durante TEM, incluida PECAM-1, que
es importante para TEM [123, 124].

La interacción homotípica PECAM-1 inicia el reclutamiento del LBRC en el sitio de interacción

leucocitaria. Esto está relacionado con el reclutamiento localizado del canal de Ca2 + TRPC6,
que aumenta el Ca2 + intracelular y se requiere para la etapa final de TEM, similar a PECAM-1
[125].

El aumento de Ca2 + intracelular desencadena la contractilidad de la actomiosina por la cinasa

de la cadena ligera de la miosina (MLCK), que se requiere para TEM [102]. PECAM-1 también
está involucrado en TEM transcelular, ya que la agrupación de ICAM-1 en EC no es suficiente
para promover la vía transcelular si PECAM-1 está bloqueado [126].

Endotelial RhoA se activa localmente por ICAM-1 durante TEM a través del reclutamiento de
RhoGEFs LARG y Ect2 [45,97]. La actividad de RhoA es máxima durante la etapa final de
extravasación, y media la remodelación de actina F endotelial para formar estructuras
circulares alrededor de leucocitos transmigratorios, que previenen la pérdida vascular durante
la diapedesis leucocitaria y promueven el cierre de poro y la transmigración [97].

5. Conclusiones y perspectivas futuras

La permeabilidad endotelial y la TEM de leucocitos implican mecanismos de señalización

intracelular similares, que incluyen la señalización Rho y Rap GTPasa, la unión célula-célula y la
remodelación de la F-actina, y por lo tanto, ha sido difícil separar los dos procesos de forma
mecánica. Sin embargo, una diferencia clave entre ellos es cuándo y dónde ocurren las señales
en EC. Para la TEM de leucocitos, los receptores se activan localmente en EC debajo y
alrededor del leucocito [94], mientras que para la permeabilidad endotelial los receptores
generalmente se activan en toda la membrana plasmática de la EC y / o las uniones célula-
célula [4]. Además, TEM no implica un aumento en la permeabilidad vascular, sino que existen
mecanismos para asegurar una fuga mínima [36,97,127]. Además, los estímulos que conducen
a la permeabilidad vascular generalmente actúan en minutos [23], mientras que la TEM de
leucocitos durante la inflamación requiere una regulación positiva de

receptores de unión a leucocitos en EC [91].

Aunque varios mecanismos de señalización son similares entre la permeabilidad endotelial y

TEM, también hay señales que difieren, que podrían manipularse para inhibir uno u otro
proceso. Por ejemplo, se han informado diferencias en la fosforilación de la tirosina VE-
cadherina entre los dos procesos [36,128]. La investigación futura debería identificar cómo
estos sitios de fosforilación median local versus global

cambios a las uniones en EC. Además, RhoG hasta ahora solo está implicado en TEM [108]. Por
otro lado, Rap1, RhoA y Rac1 están involucrados en ambos procesos. Sin embargo, es probable
que formen parte de complejos proteicos diferentes porque los receptores transmembrana
implicados en la permeabilidad y TEM son diferentes. Aunque se han identificado varios GEF
para contribuir a la permeabilidad y al TEM, las investigaciones futuras deberían tener como
objetivo identificar qué objetivos aguas abajo y GAP de Rho y Rap GTPasas son críticos para la
permeabilidad vascular frente al TEM de los leucocitos.

A diferencia de los leucocitos TEM, comparativamente se sabe poco sobre la contribución de la

señalización de la CE al cáncer TEM. Se han implicado múltiples receptores en las CE para
mediar la TEM de las células cancerígenas, pero se sabe poco de sus funciones mecánicas más
allá de simplemente facilitar la adhesión [129]. Recientemente, Ephrin-1 se identificó como un
ligando en EC que estimula la fosforilación de tirosina de EphA2 en células cancerosas,
induciendo

repulsión de célula-célula y que conduce a TEM disminuida de células de cáncer de mama

[130]. Será interesante determinar cómo otros receptores contribuyen a la señalización
dinámica entre las células cancerosas y los EC.

En conclusión, los cambios en la permeabilidad vascular y la TEM de los leucocitos están

orquestados por una combinación de pequeñas GTPasas, proteínas quinasas y fosfatasas, que
coordinan los cambios en las uniones de células endoteliales con el citoesqueleto de actina.
Dirigirse a estas moléculas de señalización podría usarse para reducir la inflamación y las
enfermedades autoinmunes.

Reconocimiento

Organizaciones que apoyan la investigación: Cancer Research UK grant no.

C6620 / A15961