Espectroscopia de ultravioleta visible.

Literalidad de la Ley de Beer-Lambert

RESUMEN

La espectrometría UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinación cuantitativa de

soluciones de iones metálicos de transición y compuestos orgánicos muy conjugados.
Para la práctica de este método se analizó la absorbancia del compuesto aminoácido
(Fenilalanina) mediante diluciones de una solución patrón dada. Esto arrojo un espectro
cercano a 1.00 en las soluciones mayormente diluidas y un espectro cercano a 2.00 en las
más concentradas. Linealizando estos espectros se pudo llegar a cierto patrón mediante
la ley de Beer – Lamber relacionando la absorbancia con la concentración. Finalmente se
concluyó que las cuatro concentraciones se relacionan de cierta manera cumpliendo en
medida el objetivo de la practica.

1. INTRODUCCIÓN

La espectroscopia UV-Vis está basada en el proceso de absorción de la radiación ultravioleta-

visible (radiación con longitud de onda comprendida entre los 160 y 780 nm) por una
molécula. La absorción de esta radiación causa la promoción de un electrón a un estado
excitado. Los electrones que se excitan al absorber radiación de esta frecuencia son los
electrones de enlace de las moléculas, por lo que los picos de absorción se pueden
correlacionar con los distintos tipos de enlace presentes en el compuesto. Debido a ello, la
espectroscopia UV-Vis se utiliza para la identificación de los grupos funcionales presentes
en una molécula. Las bandas que aparecen en un espectro UV-Vis son anchas debido a la
superposición de transiciones vibraciones y electrónicas.

La ley que rige los aspectos cuantitativos de la absorción de luz es la ley de Lambert y Beer,
la cual establece que, la absorbancia de la especie química varia directamente con la
concentración bajo ciertas condiciones experimentales fijas tales como longitud de onda de
la radiación, camino óptico, temperatura entre otras. Esta ley se cumple para cualquier
proceso de absorción en cualquier zona del espectro y se basa en que cada unidad de longitud
a través de la cual pasa la radiación absorbe la misma fracción de radiación. Si tenemos un
haz de luz monocromática, “Io”, que pasa a través de un material de espesor, “l”, la
disminución de la intensidad de luz transmitida, “It”, será proporcional al camino recorrido
y a la concentración de la sustancia absorbente, “c”.

𝐼𝑜
log = 𝐸𝐿𝐶
𝐼
 Imagen 1. Modelo base del espectrómetro de UV- Visible

2. METODOLOGÍA

Inicialmente se preparó una solución base de Fenilalanina, para esto se pesó

aproximadamente 0,0165 g del compuesto y se dispuso en un balón aforado de 10 ml, este
se llevó al menisco con agua tipo 1 obteniendo una concentración neta de 0,01M,
posteriormente a partir de la inicial, por medio de una dilución, se llegó a una segunda
solución de concentración 0,005 M tomando 5.0 mL en una pipeta y llevándola al aforo en
un balón de 10 mL; este mismo proceso se renovó para la preparar la solución de
concentración 0,001 M, y 0,0005 M. Una vez preparadas, las soluciones se llevaron a la
máquina donde se tomaron las respectivas lecturas en el espectroscopio de ultravioleta
visible.

Imagen 2. Balón aforado de Concentración 0.005M para la dilución

3. RESULTADOS

Tabla 1. Resultados muestra con concentración 0,0033 M

No Longitud de onda Absorbancia
1 258,00 1,781
2 228,00 0,321

Tabla 2. Resultados muestra con concentración de 0,00165 M

No Longitud de onda Absorbancia
1 263,00 1,656
2 227,00 0,204
Tabla 3. Resultados muestra con concentración de 0,001 M
No Longitud de onda Absorbancia
1 258,00 0,950
2 227,00 0,251

Tabla 4. Resultados muestra con concentración de 0,0005 M

No Longitud de onda Absorbancia
1 264,00 0,947
2 226,00 0,208
Tabla 5. Resultados muestra con concentración de 0.01 M
No Longitud de onda Absorbancia
1 257,00 2,361
2 230,00 0,573

Tabla 6. Resultados muestra con concentración de 0,005 M

No Longitud de onda Absorbancia
1 258,00 2,662
2 228,00 1,030
 Absorbancia vs Concentracion Fase 1
1
0.9 y = 0.9974x - 0.0005
0.8 R² = 1
0.7
0.6
0.5
0.4 Conc. Abs
0.3
0.2 0.001 0.950
0.1
0
0.0005 0.947
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1

Fase 1. Concentraciones más diluidas a determinado rango de longitud de onda

Absorbancia vs Concentracion Fase 2

1.8
1.6 y = 0.9306x - 0.0014
1.4 R² = 1
1.2
1
0.8 Conc. Abs
0.6 0,0033 1,781
0.4
0.2
0,00165 1,656
0
0 0.5 1 1.5 2

Fase 2. Concentraciones diluidas con el rango de la longitud de onda ampliado.

4. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Siguiendo el parámetro de la Ley de Lambert – Beer se estableció que las soluciones más
diluidas encajan perfectamente en una linealidad dando una pendiente constante, sin
embargo, se denota que a concentraciones elevadas este parámetro se pierde o es difícil de
definir, por tanto, se debe encontrar soluciones intermedias donde los picos se ajusten a las
bandas predefinidas donde el espectro coincida. Esto es posible evidenciarlo en los
resultados, en las gráficas 1-4, dado que el compuesto tiene un comportamiento similar en el
intervalo de los 220- 780 nm.

A su vez, este análisis se puede complementar con un término llamado absortividad molar o
coeficiente de extinción molar, la cual es una característica propia de la sustancia que
depende en mayor grado de las posibilidades cuánticas de transición electrónica de la especie
(momento dipolar de transición), de la sección transversal de la molécula, así como de la
longitud de la onda y en menor grado de la concentración.

Definida por la ecuación A = ɛlc donde A= Absorbancia medida, ɛ= constante de absortividad

molar, l = distancia que recorre la luz a través de la solución, c = concentración de la solución

1.781
1.781 = ɛ(1.00𝑐𝑚)(0.0033𝑀) = ɛ = = 539.69 𝐿 𝑚𝑜𝑙 −1 𝑐𝑚−1
(1.00𝑐𝑚)(0.0033𝑀)

1.656
1.656 = ɛ(1.00𝑐𝑚)(0.00165𝑀) = ɛ =
(1.00𝑐𝑚)(0.00165𝑀)
= 1003.63 𝐿 𝑚𝑜𝑙 −1 𝑐𝑚−1

Al momento de reducir la concentración a la mitad de la solución la constante se

aproximadamente duplica denotando una relación inversamente proporcional.

Observaciones

El espectro de UV- Visible para las concentraciones de 0.0033M y 0.000165M no

coinciden con un valor cercano a 1,00 como ocurrió en las soluciones más diluidas, esto se
debe a la ampliación del rango espectral preestablecido para las primeras mediciones. Sin
embargo, se encuentra relación entre las 4 mediciones respecto a su absorbancia.

5. CONCLUSIONES

La absorbancia es la capacidad de algunos elementos de absorber la radiación

electromagnética que se les irradia por medio de un haz de luz con cierta longitud de onda
característica esta se puede ver afectada por su concentración. Por tanto, en la práctica de
este espectro se recomienda manejar alto grado de precisión a la hora de preparar la
solución ya que la Ley de Beer – Lambert debe cumplirse a cabalidad. Sin embargo, esta
técnica tiene gran campo de aplicación ya que en ella encajan numerosas especies
inorgánicas y orgánicas las cuales absorben en la región UV-VIS, y son susceptibles de ser
determinadas cuantitativamente.

6. REFERENCIAS.

 Informe de laboratorio de espectrofotometría,

https://es.slideshare.net/joselgallego/informe-de-laboratorio-8908350
Consultado viernes 2 de Marzo, 2018.

 Espectrofotometría visible
https://es.scribd.com/document/318036823/Informe-Uv-Vis,
Consultado Sábado 3 de Marzo, 2018.

 Revista colombiana de química,

 https://revistas.unal.edu.co/index.php/rcolquim/article/view/10381/36524,
consultado Domingo 4 de Marzo, 2018.

 Análisis instrumental
http://perso.wanadoo.es/e/daseri/ing_quimica/3ingquim/6c%20AI%20Determinacio
n%20Ti%20y%20V%20(MAS).pdf
Consultado lunes 5 de marzo, 2018