9.

- Explicar los mecanismos químicos y físicos de la mutación, utilizando como

ejemplo los siguientes mutágenos químicos (5-bromouracilo, 2-aminopurina,
ácido nitroso, hidroxilamina y acridina)
Mutágenos físicos: son radiaciones que pueden alterar la secuencia y
estructura del ADN. Son ejemplos la radiación ultravioleta que origina dímeros
de pirimidina (generalmente de timina), y la radiación gamma y la alfa que son
ionizantes. También se considerar agentes físicos los ultrasonidos, con
400.000 vibraciones por segundo, que han inducido mutaciones en Drosophila
y en algunas plantas superiores, y centrifugación, que también producen
variaciones cromosómicas estructurales.

Mutágenos químicos: son compuestos químicos capaces de alterar las

estructuras del ADN de forma brusca. Ejemplo
 5-bromouracilo (5BU) es una sustancia análoga de timina, las DNA
polimerasas no pueden distinguir estos análogos de base; por
consiguiente, si esta está base análoga durante la replicación, puede ser
incorporada a las moléculas de DNA recién sintetizada.
 La 2-aminopurina (2AP) se comporta como Adenina, pero con
frecuencia se tautomeriza y se aparea con la Citosina.
  Óxido nitroso: induce la desaminación de la citocina, lo que genera
uracilo, que en la siguiente ronda de replicación se aparea con adenina,
lo que produce una mutación de transición C G ---- T A. El ácido nitroso
transforma la adenina en hipoxantina, se aparea con citocina e induce la
transición T A ----- C G.

 Hidroxilamina: es un mutágeno modificador de bases muy específico

que agrega un grupo hidroxilo a la citocina y la convierte en
hidroxilaminacitosina. Esta conversión aumenta la frecuencia de un
tautomero raro que se aparecerá con adenina en lugar de con guanina.
La hidroxilamina no revertirá las mutaciones que provoca.
 Acridina: es un agente intercalante que provoca mutaciones al
intercalarse entre bases adyacentes de DNA, lo que distorsiona la
estructura tridimensional de lesiones de la hélice y causa inserciones y
deleciones de nucleótido único durante la replicación. Estas inserciones
suelen provocar mutaciones de marco de lectura, de manera que los
efectos mutágenos a menudo no son graves.

10.- Explicar las mutagénesis dirigidas o mutación específica

La genética inversa depende de la capacidad de crear mutaciones, no de
manera aleatoria sino en secuencias particulares de DNA y después estudiar los
efectos de estas mutaciones en el organismo. Se inducen mutaciones en
localizaciones específicas mediante un proceso denominado mutagénesis
dirigida al sitio. Existe una serie de estrategias diferentes para la mutagénesis
dirigida al sitio. Una estrategia que se suele utilizarse las bacterias consiste en
cortar con enzimas de restricción una secuencia corta de nucleótidos y
reemplazarla por un oligonucleótido cortos sintético que contiene la secuencia
multada deseada. El éxito de este método depende de la disponibilidad de
sitios de restricción que flaquean la secuencia que ser alterada.
Si no se dispone de sitios de restricción apropiados, es posible utilizar
mutagénesis dirigida por oligonucleótido. En este método se produce un
oligonucleótido monocatenario que difiere de la secuencia diana en una o unas
pocas bases. Cómo difieren sólo en algunas bases, él DNA diana y
oligonucleótido se aparearán. El oligonucleótido, cuando se aparece de manera
exitosa con el DNA diana, puede actuar como un cebador para iniciar la síntesis
de DNA, lo que produce una molécula bicatenaria con un error de
apareamiento en la región del cebado. Cuando este DNA se transfiera las
células bacterianas, las bases aparejadas de manera incorrecta serán reparadas
por enzimas bacterianas.

11.- Explicar los fundamentos bioquímicos de la extracción de ADN

El primer paso en cualquier protocolo de separación es el rompimiento del
material inicial ya sea de origen viral, bacteriano, vegetal o animal. El método
utilizado para romper la célula debe ser tan leve como sea posible con el fin de
causar el menor daño posible al ADN. La lisis celular se puede hacer por acción
mecánica, pulverizando el tejido con hielo seco o nitrógeno líquido, también se
puede utilizar la degradación enzimática de la pared celular (si está presente) y
lisis con detergentes de las membranas celulares. Seguido al rompimiento
celular la mayoría de métodos involucran una desproteinización, lo cual se lleva
a cabo con un solvente orgánico, seguido de una precipitación con isopropanol
o etanol y posterior solubilización con agua o tampón.