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Resumen: Las proteínas son biomoléculas de gran importancia, conformadas por monómeros llamados
“aminoácidos” y unidos mediante enlaces peptídicos. La ovoalbúmina es una proteína de cadena simple y de alto
contenido proteico, motivo por el cual es posible analizar con facilidad sus propiedades en un laboratorio. La
estabilidad de la espuma se determinó mediante el goteo de la formada por una clara de huevo sin aditivos, una con
10 g de sal comercial y otra con 10 mL de vinagre. Para la determinación e identificación de proteínas se utilizaron
las reacciones de biuret, xantoproteica, y azufrados, así como la prueba de la coagulación; mediante el reconocimiento
cualitativo del cambio en las propiedades físicas de la muestra, como la coloración o textura. Los volúmenes de
albumen líquido recuperado tras los 30 minutos de espera fueron 20, 3,5 y 7,5 mL respectivamente. Las reacciones
de reconocimiento dieron resultados positivos, en tanto que la reacción de biuret generó en la muestra una coloración
morada, naranja en la xantoproteica y una tonalidad parcialmente negra en la de azufrados; mientras que se observó
un cambio de color y textura en la prueba de coagulación. Se determinó que la estabilidad de la espuma aumentó
cuando el albumen es batido en presencia de sal, debido al aumento de la solubilidad de las proteínas. Finalmente, se
determinó la presencia de proteínas en todas las muestras, puesto que todas las reacciones de identificación
adquirieron la coloración esperada.
Palabras clave: proteínas, ovoalbúmina, estabilidad de espuma, reacción de biuret, reacción xantoproteica, reacción
de azufrados.
Keywords: proteins, ovalbumin, foam stability, biuret reaction, xanthoproteic reaction, sulfur reaction
jordan.venegas@epn.edu.ec
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En el presente trabajo se analiza la albumina, la cual es una Para la coagulación de proteínas, se añadieron 10 gotas de
proteína conformada por 610 aminoácidos formando una solución de CH3COOH al 50 % en 3 mL de albúmina y se
cadena peptídica simple que se encuentra doblada sobre sí procedió a calentar a la llama del mechero.
misma en varias capas y tiene un peso molecular de
aproximadamente 66,248; por lo tanto, su contenido proteico En la reacción xantoproteica, se colocaron 3 mL de albúmina
es alto. Se la puede encontrar en la ovoalbúmina del huevo y 2 mL de solución de HNO3 50 % en un tubo de ensayo para
(clara del huevo) y en las secreciones de un caracol (Peters, posterior calentar la mezcla a la llama y enfriar en agua.
1995, pp. 1-2). A partir de la albumina se puede hacer espuma Después, se añadió 10 gotas de la solución de NaOH 40% y se
mediante la deshidratación y estiramiento de la misma, dando observó su tonalidad.
lugar a un proceso de desnaturalización por agitación
mecánica, es decir, se incorpora gas a la dispersión proteica Con la última prueba, la reacción de azufrados se adicionó en
(Gil, 2010, p.92). La desnaturalización se da fácilmente debido un tubo de ensayo: 3 mL de albúmina y 2 mL de NaOH al 20
a las fuerzas débiles de los enlaces peptídicos que forman la %, y se calentó con el mechero hasta ebullición. Se colocaron
proteína, y son alterados por un cambio de pH, temperatura o inmediatamente 10 gotas de Pb(CH3COO)2 5 % y se apreció
disolventes. De esta manera, la hidrolisis de una proteína es su coloración.
realizada de forma parcial por ácidos, bases o enzimas dando
lugar a moléculas más pequeñas (Teijón y Garrido, pp. 53-54,
2009). 3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Para la identificación de las proteínas se tienen varios métodos
ya sean cualitativos o cuantitativos, es fundamental la En la primera parte de la experimentación, se obtuvo diferentes
concentración puesto que esto define la estructura de una volúmenes en cada probeta debido a las distintas
proteína, la actividad de una enzima o el contenido proteínico combinaciones que tenía la espuma de la clara del huevo de
de un alimento. Entre las técnicas más representativas se gallina, tal como se indica en la Tabla 2.
encuentra el uso de reactivo de Biuret para su análisis
Tabla 2. Volúmenes registrados en la Prueba de goteo de albúmina de
cualitativo y para su cuantificación se realiza huevo.
espectrofotometría UV-VIS en un máximo de absorción de
540 nm (UNAM, 2005, p.45). Además, se puede encontrar Volumen obtenido
N° de Bureta Contenido
otras técnicas de identificación como: la reacción (mL)
xantoproteica, la reacción de azufrados, millón, ninhidrina, 1 Testigo 20
coagulación por calor, entre otras (Donnersberger y Lesak, 2 Sal 3,5
2002, p. 385). 3 Vinagre 7,5
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tipo de disolvente como por ejemplo el ácido acético, reducen de temperatura empiezan a desenrollarse para enlazarse entre
su solubilización pero aumentan su precipitado, ya que existe sí formándose una consistencia dura del albumen, tal como se
una mayor interacción molecular gracias a su pequeña indica en la Figura 2. Es por esto, que uno de los factores más
constante dieléctrica que caracteriza la polarización o coacción influyentes en las proteínas es la temperatura porque afecta su
entre distintas moléculas. (López, 2013, p. 26). Es por esta estructura inicial (líquida) a una nueva estructura final (sólida).
razón que se obtuvo un mayor volumen en la tercera muestra (Goña y Macarulli, 1994, p. 115).
comparada con la segunda porque la fuerza de interacción
entre las moléculas fue mayor lo cual permitió recuperar un
mayor contenido de albumina de huevo por el proceso de
precipitado que disminuía su estabilidad y provocaba que el
líquido contenido pueda expandirse con mayor facilidad.
Resultado
Tipo de Reacción Coloración
(positivo/negativo)
Wharton (1972) indica que la reacción de Biuret se caracteriza Montilla (2012) menciona que en la reacción Xantoproteica
por la coloración violeta que se genera por la respuesta de los inicialmente se produce un precipitado de color blanco que
iones peptídicos de las proteínas con los iones del sulfato y que cambia al amarillo por adición de ácido nítrico y de NaOH en
al menos necesita dos uniones de este tipo para llegar a la la muestra. Solo puede darse estas características en ciertas
coloración mencionada. Además, otro factor influyente es la proteínas que tienen grupos de hidrocarburos aromáticos para
concentración proteica de la reacción. (Wharton, 1972). Por lo obtener compuestos nitrados que en un tratamiento de ácido
tanto, la muestra al cumplir los parámetros de concentración nítrico concentrado al 50 % actúa con la Tirosina contenida en
como de interacción entre compuestos se logró apreciar la la clara del huevo, por lo que presenta una coloración amarilla
coloración violeta indicada en la Figura 1. como se indica en la Figura 3 y que puede tornarse anaranjada
cuando la proteína se encuentra en un medio alcalino más
fuerte. (Montilla, 2012).
3
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La reacción de azufrados se basa en una reacción de separación La reacción de Biuret permite determinar la concentración de
entre el azufre y las proteínas mediante un álcali o NaOH, que una proteína en la muestra, mediante el cambio en su
al adicionar una pequeña cantidad de acetato de plomo forma coloración al ponerse en contacto con los reactivos que lo
un precipitado negruzco de sulfuro de plomo como se indica componen. Es por este motivo que la coloración morada
en la Figura 4. Esta muestra no presentaba inicialmente el color adquirida por la muestra de huevo permitió concluir la
negro característico por lo que fue necesario esperar más presencia proteínas, dando la prueba como positiva.
tiempo que en las demás muestras para apreciar con mayor
claridad el precipitado mencionado. (Flores, 2010). El proceso de coagulación induce a que la proteína en su estado
inicial de estructuras proteicas grandes enrolladas se
desenrollen por el aumento de temperatura, para enlazarse de
forma simple y formar una nueva estructura final proteica
diferente. Este hecho se evidenció en la prueba al fuego, puesto
que su textura y coloración cambió al exponerse a este cambio
de temperatura.
Por lo tanto, dependiendo de la aplicación de las diferentes Las diversas reacciones que se emplean para las proteínas
reacciones para el albumen de huevo, se puede presentar una tienen por objetivo determinar la concentración proteica de
notoria diferenciación de sus características, una de ellas es la cada muestra si presentan ciertas condiciones, debido a que las
coloración. En el caso de la reacción Biuret, presenta un color proteínas en presencia de diferentes compuestos tienden a
violeta; en la reacción Xantoproteica, el color amarillo; y en la comportarse de manera característica. A su vez, la textura de
Reacción de Azufrados, el color negro. Se debe a los distintos la muestra varía con la temperatura, ya que es otro agente que
compuestos empleados que interaccionan de una manera influye en la desnaturalización proteica, lo cual indica ser otro
particular con las proteínas brindando un color particular y así parámetro útil en el análisis de proteínas.
poder detectar el contenido proteico de las muestras
registradas. Otra característica es el cambio de su forma
estructural, que se ve afectada por el contacto de la muestra 4.2 RECOMENDACIONES
con una temperatura más elevada obteniendo así una
consistencia diferente a la inicial. Se sugiere realizar el análisis de la estabilidad de la espuma de
huevo al agregar una base débil antes de realizar el batido, con
el fin de compararla con aquella formada en presencia de
4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ácido.
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REFERENCIAS