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5463
FIG. 1. Autoradiograph de los geles de acrilamida en la determinación de la secuencia de los
fragmentos de restricción A12D y A14 como cartillas sobre la
Complementaria de IX174 ADN. Los inhibidores utilizados fueron (de izquierda a derecha) , ddGTP ddATP, y
araCTP ddTTP. Electroforesis se en un 12%6 geles de acrilamida en 40 mA durante 14 h en la parte
superior 10 cm del gel no se muestra. La secuencia de ADN se escribe de izquierda a derecha y de
arriba junto a
Las bandas en el radioautograph correspondiente. La numeración es como se indica en la ref. 2.
al.
5464 Bioquímica:' 44 Sanger et
Al. (4) han demostrado que Aproximadamente 0.25
(La concentración del
es también activo como terminador.
allí
Sin embargo, tuvimos éxito
Compuestos parecen mucho Era insuficiente para determinar el rendimiento
dideoxy derivado.
pero la dilución requerida de la solución fue
araATP y araCTP fueron determinada
obtenidosexperimentalmente.)
bioquímicos Inc,Milwaukee, WI.
Procedimiento de secuenciación
enzima de restricción fueron
Obtenido de OX174 formulario replicativo
separados por elec-
Trophoresis en geles de acrilamida.
obtenido de 5
,Ug de OX174 replicativa
H20 fue mezclado con
1 Al viral o complementaria
y
1 Mi de H X 10 buffer
capilar, calentado
En 1000 durante 3 min, y
durante 30 min. El
Solución fue diluido al
muestras al.
Fueron tomadas para cada
2 ml de la ap-
Apropiado "mix" y 1 il de ADN
Klenow, Boehringer, Mannheim) (0,2 unidades).
mezcla con-
Nivel sostenido de 1,5 X
-32P]dATP ( actividad específica
Aproximadamente 100 mCi/,Mnwol) y el seguimiento de
otros trifosfatos.