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MIBW, 2018 1
MIBW, 2018 3
Técnicas
Métodos
Electroforesis inmunométricas
electroquímicos
(inmunológicas)
Técnicas
Cromatografía
fotométricas
¿Cuantitativas?
¿Semi-cuantitativas?
¿Cualitativas? MIBW, 2018 4
1
02-03-2018
Técnicas fotométricas
Basadas en la interacción de las radiaciones
electromagnéticas con las moléculas
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Recordar
• Lab. Bioquímica básica
• Clase de Instrumentación
• Espectro electromagnético
• Absorbancia
• Transmitancia
• Ley de Lambert - Beer
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Luz incidente
Luz transmitida
Luz absorbida
Luz reflejada
Luz dispersada
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Espectrofotometría
Colorimetría (moléculas coloreadas)
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Espectrofotómetro - Fotómetro
FILTRO (FOTÓMETRO)
MONOCROMADOR (ESPECTROFOTÓMETRO)
Vidrio: 320-950 nm
Plástico: 320-950 nm
Cuarzo: <320 nm (Ac. Nucleicos)
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Medición de
Absorbancia del
producto de una
reacción
química/enzimática
donde participa la
molécula de interés y
se genera un producto
medible
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02-03-2018
Curva calibración
¿Cómo cuantificar? Calibrador o estándar
Calibrador
Estándar
Solución de concentración
conocida del analito
Ecuación de la recta
y = mx + n
y = mx
Regla de tres
A = mC
FACTOR x Abs. Muestra
C = A/m MIBW, 2018 14
Etapas
Desarrollar técnica
Calibrar Técnica
Controlar Técnica
Procesar Muestras
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Blancos
Blanco de agua (Abs del agua)
Blanco de reactivo (Abs reactivo)
Blanco de muestra (Abs muestra s/rx)
Calibración de Técnicas
Solución Estándar
Calibrador Universal
Control de Técnicas
Control Normal
Control Patológico
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Controles
• Control calidad interno:
– Uso de Control Normal y Control Patológico
– Carta control de Levey-Jennings
– Reglas de Westgard
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Reglas de Westgard
Serie de reglas de control usadas en el
procedimiento de control de calidad para
analizar la medición del control
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Química
Enzimática
l 405nm
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02-03-2018
Detección analito
Directa (Una Rx)
Determinación actividad
Indirecta (Rx acopladas, Rx “reveladora) enzimática
l 500nm
l 405nm
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Cinética enzimática
se estudia en
estado estacionario
Estado estacionario
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Visible
Crecientes Detección de formación de producto
(Colorimétricas)
Decrecientes Detección de desaparición de sustrato
UV
Fosfatasa Alcalina
¿Reactivos vs Muestra?
Lactato deshidrogenasa
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Punto final
Dos puntos
Cinética
Dos puntos • A
Cinética
• DA/min
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CK
determinación = 340nm
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Colesterol
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02-03-2018
Desviación estándar –
Coeficiente de variación
• Repetibilidad
• Reproducibilidad
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MIBW, 2018 34
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Determinación de
Glucosa plasmática
Determinación de LDH
plasmática
Determinación de
CK plasmática
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Turbidimetría y Nefelometría
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Turbidimetría
Inmunoturbidimetría (ag – ac)
•Determinación de proteínas totales en LCR u orina (haciendo que las proteínas precipiten
con TCA o ácido sulfosalicílico)
•Uso de fotómetro.-
Inmunoturbidimetría
MAU
PCR
ASLO
Factor reumatoídeo
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Nefelometría
Inmunonefelometría (Ag – Ac)
• La nefelometría mide la luz desviada en diversos ángulos (entre
15º y 90º) por las partículas presentes en esta suspensión.
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