CUANTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS POR EL MÉTODO DE

RECUENTO EN PLACA Y TÉCNICA DEL NÚMERO MÁS PROBABLE

Nombres

Universidad de Córdoba
Facultad de ingeniería
Programa de Ingeniería de Alimentos

Introducción Objetivos:
Debido al cuidado que se debe tener con los  Determinar poblaciones
alimentos, la cuantificación de microbianas por el método de
microorganismos es un elemento crítico en recuento en placa mediante
los estudios de microorganismos presentes siembra en profundidad y
en ellos. Es importante saber qué tipo de superficie.
microorganismo está inmerso en el alimento  Determinar la población de
y aún más importante saber cómo tratarlo, de coliformes fecales y totales en
igual forma saber la cantidad exacta de alimentos utilizando la técnica del
microorganismos presentes en el alimento,
número más probable
de esta forma saber si estos son patógenos o
no. Hay distintas formas para contabilizar a
los microorganismos cultivables en muestras
Materiales y métodos:
ambientales o de laboratorio, en este caso se
utilizó la técnica de recuento en placa; Esta Materiales:
técnica no pretende detectar a todos los
microorganismos presentes, pero el medio de  10 tubos de ensayos
cultivo, las condiciones de temperatura y la  3 pipetas
presencia de oxígeno, permiten seleccionar  1 micropipeta
grupos de bacterias cuya presencia es  1 beaker
importante en diferentes alimentos [1]. El  90 ml de agua peptonada
conteo de bacterias podría realizarse  10 ml de jugo de corozo
mediante el método del Número Más  Gradilla para tubos de ensayos
Probable (NPM), esta técnica se basa en la
 Asas bacteriológicas
determinación de presencia o ausencia (pos o
 8 cajas de Petri
neg) en réplicas de diluciones consecutivas de
 Agar EMB
atributos particulares de microorganismos
presentes en muestras de suelo u otros  Caldo triptófano
ambientes [2] .  Caldo verde brila
 Incubadora
Métodos: resultados de la prueba
confirmatoria.
Recuento en placa: La técnica se basa en
- Prueba completa o de coliformes
contar las UFC (unidades formadoras de
fecales: se transfirió de la siembra
colonias) presentes en un mililitro de
en agar EMB (se habían desechado
muestra. Se considera que cada colonia
los tubos) una asada y se incubó en
que se desarrolla en el medio de cultivo de
caldo brilla y caldo triptófano. Se
elección después de cierto tiempo de
mezcló e incubó a 44,5 °C por 92
incubación a temperatura adecuada,
horas (debido al fin de semana).
proviene de un microorganismo o de un
Confirmó la positividad de cada
agregado de ellos, esos microorganismos
prueba. Solamente la positividad
son capaces de formar las colonias, es
de las dos pruebas indica la
decir UFC. Para que las colonias puedan
presencia de coliformes fecales.
contarse de manera confiable, se hacen las
diluciones decimales necesarias de la
muestra antes de ponerla en el medio de
Resultados:
cultivo; la técnica para realizar este
procedimiento se describe en “Preparación Recuento en placa:
y dilución de muestras de alimentos para
su análisis microbiológico”. Medio: Plate count.

Número más probable: para coliformes Microorganismos: mesófilos aerobios.

totales se realizaron dos pruebas:
presuntiva y confirmativa.
Control del medio
- Prueba Presuntiva: de las
diluciones preparadas para
recuento en placa se pipeteo 1 mL
de cada una de ellas en tubos que
contenían 10 ml de Bilis verde
brillante lactosa, utilizando tres
tubos por dilución. Posteriormente,
se mezcló y seguidamente se
incubo por 24 horas a 37ºC, y por
último se leyeron los tubos
(positivos o negativos).
- Prueba Confirmativa: primero, se
sembró por estría una asada de los
tubos positivos en agar EMB;
segundo, se incubo a 35ºC por 24
horas y por último se anotaron
Control del diluyente. 10-2

10 -1 10-2

10 -1 10-3
 10-2
10-3

Número más probable NMP

- Prueba presuntiva:
10-3
Medio: Caldo Bilis verde brillante lactosa
10-1
 UFC EN CAJAS
CONSENTRACION #1 #2
CAJA 10 -1 3 1
CAJA 10 -2 2 0
CAJA 10 -3 1 0

Bibliografía

1- http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/TecnicBasicas-Cuenta-en-placa_6527.pdf
2- https://www.uprm.edu/biology/profs/massol/manual/p4-nmpenumeracion.pdf