PRACTICA DE LABORATORIO

GRUPO: 305689_43

WILMER ALEXANDER ROBLES MEDINA

COD: 7709826

EMILIO MENDOZA PAEZ

CODIGO:1.118.20016

GRUPO 305689_46

TUTORA

IBETH RODRIGUEZ GONZALEZ

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

INGENIERIA DE ALIMENTOS
 BIOTECNOLOGIA

NEIVA

2017

INTRODUCCION

El presente informe desarrolla el procedimiento respectivo para la determinación de azucares a

partir de una solución patrón de glucosa de concentración, que permite realizar y ajustar una
curva de calibración, y una solución desconocida por DNS.

Este es un proceso biotecnológico en el cual se detalla el aumento de la población de los

microorganismos a la cual se da a entender como biomasa, por la obtención de un producto
secundario o resultante.

Para que los microorganismos crezcan es necesario que cuenten con condiciones ambientales
óptimas, por la cual tienen un metabolismo cambiante y poco predecible esto demuestra que si
hay cambios en condiciones de temperatura, ph, velocidad de agitación y otros elementos del
medio ambiente.

Se realizo unos métodos de calibración procediendo a realizar una serie de soluciones analítica,
registrando los resultados. Esta señal se corrigió por medio de un blanco en el que se establece el
cero de absorbancia, por lo cual contiene todos los componentes de la matriz de análisis.
 OBJETIVOS

GENERALES

El objetivo principal de la práctica fue determinar la curva de calibración de azucares reductores

usando DNS, implementando métodos analíticos para conocer sus parámetros.

ESPECIFICOS

Manejar matemáticamente los datos del rastreo fotocolorimétrico par definir los parámetros de
crecimiento bacteriano.

Determinar los parámetros de crecimiento en función del incremento en el numero de células.

Cuantificar los azucares reductores presentes en el alimento.

 PRACTICA DE LABORACTORIO DE BIOCTENOLIGIA

PRACTICA No. 2. CURVA DE CRECIMIENTO MICROBIANO

ANÁLISIS

Se utilizo una solución patrón de glucosa 1g/l

En la tabla podemos observar de volúmenes de solución de glucosa, necesaria para la realización

para la toma de absorbancia en el espectrofotómetro para proceder a la toma de datos.

Dilución blanco 1 2 3 4 5
volumen de
solución I 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
(ml)

Para la concentración de la curva de calibración es necesario conocer las concentraciones de

azúcar en cada solución después de haber realizado la dilución con el agua destilada. Esta
concentración se puede determinar con la ecuación:

𝑉1 𝐶1 =𝑉2 𝐶2

Se despeja la ecuación la 𝐶2 se obtiene

V1 C1
𝐶2 =
V2

De esta ecuación se sabe que la 𝐶1 es la concentración de la solución patrón de glucosa 1g/L y el

volumen final 𝑉2 que es 0,3 que es el volumen obtenido después de agregar el agua en todas las
soluciones. A partir de esta ecuación se determinan las concentraciones de la siguiente manera:

Para la solución 1 se obtiene

0,1ml x 1g/L
𝐶2 = = 0,33g/L
0,3mL

Este proceso se repite hasta obtener las concentraciones de azúcar de las 5 soluciones a estudiar,
los cuales están registrados en la tabla.

Dilución blanco 1 2 3 4 5
concentración 0 0,3 0,6 0,9 1,2 1,5
 g/L

Ahora se mide la absorbancia con el espectrofotómetro y se obtiene la tabla que muestra las
absorbancias medidas con el espectrofotómetro, tomando como 0 la solución sin concentración
de glucosa (blanco).

Dilución blanco 1 2 3 4 5
Absorbancia 0 0,11 0,207 0,255 0,281

Con estos datos tomamos durante la práctica se fue construyendo la curva de calibración, que
relaciona las concentraciones de las diferentes soluciones y la absorbancia medida en cada una de
ellas.

CURVA DE CALIBRACION AZUCARES REDUCTORES

concentración 3 mg DE GLUCOSA/ml 0,003

volumen sin glucosa concentracion absorvancia adsorvancia 2

0 0 0 0
0,1 0,3 0,111 0,111
0,2 0,6 0,175
0,3 0,9 0,207 0,212
0,4 1,2 0,255 0,21
0,5 1,5 0,281
0,6 1,8
0,7 2,1 0,374
0,8 2,4 0,462 0,373
0,9 2,7 0,411
1 3 0,536 o,419
 absorvancia
0.6
y = 0.051x - 0.0149
0.5 R² = 0.985

0.4

absorvancia
0.3
Linear (absorvancia)
0.2 Linear (absorvancia)

0.1

0
0 2 4 6 8 10 12

El grafico se muestra la línea de tendencia, la formula obtenida y la R la cual demuestra que la

línea de tendencia predice de buena manera la sucesión de puntos. La relación de la
concentración con la absorbancia demuestra que hubo una buena relación entre la concentración
de proteínas lo cual demostró un cambio de la muestras utilizadas.

Se realizo el procedimiento para determinar la concentración, por el método DNS, la

determinación de estos azucares se realizo para obtener una curva de calibración, con el reactivo
DNS a la cual tiene función de oxidar a los azucares reductores dando resultado colorímetros que
se pudo medir con l longitud de onda en el espectrofotómetro.

El resultado de la grafica fue satisfactorio ya que el valor de R, obtenidos en la prueba de

azucares fueron de 0,051.

Podemos observar que la absorbencia de una solución es directamente proporcional a su

concentración a mayor numero de moléculas mayor interacción de la luz con ellas, también
depende de la distancia que recorre la luz por la solución a igual concentración cuando mayor
distancia recorre la luz por la muestra más moléculas se encontrara y por último, depende de una
constante de proporcionalidad denominada coeficiente de extinción que es especifica.

Cuando el DNS es reducido en presencia de calor, por los azucares reductores que entran en
contacto con él, se desarrolla un cambio de color parecido al café con variación a amarillo. El
cambio de coloración puede entonces determinar por lectura de densidad óptica, leídas por
espectrómetro a una determinada longitud de onda. la concentración de los azucares reductorres
totales liberados en la muestra se determina haciendo una interpolación en la curva patrón del
azúcar utilizando, graficando la absorbancia en función de la concentración.
El resultado fue en los medios de cultivos de crecimiento con concentraciones bajas del substrato,
sin embargo, los resultados no fueron los esperados, este fenómeno se explica por los cambios
observados en el medio, la viabilidad y liberación de azucares reductores obtenidas demostraron
que se requiere reconocimiento rápido con el sustrato en forma continúa para apoyar el aumento
del número de células de modo suficiente e iniciar la degradación.

La velocidad de reacción depende en gran medida de las enzimas, el tipo de microorganismo que
la produce, el tipo de sustrato y la temperatura.

CONCLUSIONES

En esta práctica podemos determinar de manera cuantitativa la concentración de azucares en la

muestra con concentraciones conocidas para poder obtener la curva patrón de la absorbancia en la
muestra y concentraciones o diluciones como observamos en la grafica.

Comprobamos también que la espectrofotometría es el método de análisis óptico más adecuado

para determinar la concentración de una muestra. Es un instrumento que compara la radiación
absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una
conocida que es glucosa.
 PRACTICA No. 3 CUANTIFICACION DE AZUCARES

Introducción

Los azúcares como la glucosa, fructosa y sacarosa se acumulan especialmente en el jugo celular;
los almidones son los carbohidratos de reserva y se encuentran en forma de plastidios; la
hemicelulosa y pectinas son los polisacáridos que conforman el material estructural. En todos
estos atributos de calidad los carbohidratos desempeñan un papel relevante, por ejemplo, el sabor
está dado básicamente por un balance entre azúcares y ácidos orgánicos. El sabor característico
de y diferente de las frutas se debe a la gran variación en composición y concentración de los
azúcares; el color atractivo se debe principalmente a los glucósidos y la firmeza está determinada
por los polisacáridos estructurales
 cuantificacion de azucares
absorbacia para cada azucar
grupo 1 grupo 2 grupo 3 grupo 4 grupo 5
numero de tubo fructosa glucosa lactosa glucosa sacarosa
blanco 0,668
0 0,263 0,19 0,39 0,885 0,169
1 0,254 0,456 0,458 0,605 0,101
2 0,288 0,455 0,334 0,586 0,077
3 0,301 0,573 0,169 0,476 0,077
4 0,695 0,413 0,219 0,188 0,095
5 0,688 0,578 0,176 0,186 0,074
6 0,716 0,207 0,177 0,182 0,073
7 0,68 0,357 0,202 0,168 0,08
8 0,695 0,476 0,192 0,162 0,109
9 0,645 0,23 0,198 0,155 0,077
10 0,67 0,346 0,19 0,153 0,095
 grupo 1 fructosa
1
0.9 y = 0.0731x
0.8
0.7
0.6 grupo 1 fructosa
0.5
0.4 Linear (grupo 1
0.3 fructosa )
0.2
0.1
0
0 5 10 15

grupo 2 glucosa
0.7
0.6
y = 0.0451x
0.5
0.4 grupo 2 glucosa

0.3
Linear (grupo 2
0.2 glucosa)

0.1
0
0 5 10 15

grupo 3 lactosa
0.5
0.45
0.4
0.35
0.3 y = 0.0254x
0.25 grupo 3 lactosa
0.2 Linear (grupo 3 lactosa)
0.15
0.1
0.05
0
0 5 10 15
 grupo 4 glucosa
1
0.9
0.8
0.7
0.6 grupo 4 glucosa
0.5
0.4 Linear (grupo 4 glucosa
y = 0.0291x
0.3 )
0.2
0.1
0
0 5 10 15

grupo 5 sacarosa
0.18
0.16
0.14
0.12
0.1
0.08 grupo 5 sacarosa
0.06
0.04
0.02
0
0 5 10 15
Conclusiones

Al calentar una mezcla de glucosa y fructosa a cierta temperatura con el reactivo alcalino de , la
velocidad de oxidación de la glucosa es considerablemente menor que la de fructosa. El
resultado obtenido es conocido como fructosa aparente. Ésta es ligeramente más alta que el
contenido real de fructosa en la muestra, la cual puede ser calculada usando las fórmulas
adecuadas. El procedimiento para la determinación de esta fructosa aparente es el mismo que
para el cálculo de los azúcares reductores totales
 PRACTICA No. 4 AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE
AMILASA

INTRODUCCION

Para llevar a cabo una validación de un método microbiológico es importante tener en cuenta la
evaluación de los medios de cultivo a utilizar, para la recuperación de la micro flora bacteriana
presente en el producto. También llevar a cabo la calibración y verificación de los equipos que se
utilizan en este tipo de técnicas como lo pueden ser incubadoras, balanzas y otras.

PROCEDIMIENTO

1. Se mesclo un gramo de tierra seca de la UNAD y se diluyó con 15 ml de agua estéril.

2. Se sembró en una superficie en una placa de agar.

3. Se rotulo las cajas petri.

4. Se incubo a 30ºC durante 48 horas.

5. Se realizo el reencuentro de todas las colonias.

6. Se vertió la dilución de yodo sobre las capas.

No se pudo observar o asilar los microorganismos productores de amilasas. No demostró superior

crecimiento sobre el almidón. En la figura se puede observar la reacción acomplejante del lugol
con el almidón dando coloración oscura. El microorganismo no presento una mayor capacidad de
hidrolizar almidón debido a la ausencia de reacción, hecho que se confirmo con su crecimiento.

Análisis de resultados

Diámetro e halo de
No. Colonias con
Sitio de muestreo No. Colonias totales hidrolisis de col.
halos
Representativas
Tierra del suelo 0 0 col1 0

Del recuento de las colonias no logramos observar un crecimiento invasivo, pero aun así, se
puede realizar un recuento estimativo, ya que las colonias a las que fueron distribuidas fueron
muy pocas dentro de la placa, lo que permite observar el poco contacto de colonias.

Casi no se presento las técnicas apropiadas para el aislamiento de microorganismo productores de

amilasas. No se presento lo que queríamos la actividad enzimática por el crecimiento de los halos
de hidrólisis. A la cual los microorganismos son los encargados de la producción de encimas
celulosas y por tanto de la degradación de celulosa.

CONCLUSION

El estudio de la muestra del suelo de la UNAD no arrojo cantidad en UFC/ml. No logrando los
objetivos generales, desarrollados para un trabajo exitoso en la incubación de la muestra y su
posterior conteo, afrontándonos problemas como la diferencia en los duplicados, muestras
difusas, poca representatividad de las colonias entre otros.

Los valores obtenidos dependieron de una serie de factores como las corrientes de aire que se
produjo en distintos tiempos o el tamaño de las partículas en suspensión.

Se trato de lograr aislar microorganismos productores de amilasas, donde hubo una reacción del
almidón con el lugol, se presenta muy poco el almidón por la reacción con el lugol.

Las enzimas microbianas se consideran seguras porque son extractos naturales, además las
enzimas toxicas son muy raras.

Es necesario realizar una nueva selección de cepas a partir de excelentes prácticas, se recomienda
hacer siembra por punción asegurando datos más significativos referentes a la elección de
microorganismos. Paralelamente se debe utilizar pruebas cuantitativas para determinar la
actividad enzimática.

Gracias a esta práctica se pudo conocer los procedimientos y medios de cultivo para poder aislar
hongos del ambiente con capacidad de producir amilasa, enzimas que degradan el almidón.