FASE 1 PONENCIA ARGUMENTATIVA UNIDAD 1

BIOTECNOLOGIA

1. Realice el laboratorio virtual N. 1. Estudie los conceptos clave: Crecimiento microbiano, curva
de crecimiento, modelos matemáticos y ejemplo, luego realice el procedimiento y responda las
preguntas del cuestionario del laboratorio. El link del laboratorio virtual se encuentra en el
entorno de conocimiento práctico y en el entorno de conocimiento de la Unidad 1.

Que fases de crecimiento puede diferenciar en la grafica

Fase de aceleración positiva, fase exponencial, fase de aceleración negativa, fase estacionaria

Explique el comportamiento de la gráfica, desde el punto de vista metabólico.

Fase de latencia: en esta fase las células sintetizan las enzimas necesarias para la actividad
metabólica.

Fase de aceleración positiva: conduce a la siguiente fase.

Fase exponencial: las células están dividiéndose por lo que crecen de manera exponencial, esto
depende de la composición del medio, temperatura, ph, osmolaridad, entre otros.

Fase de aceleración negativa: crecimiento desequilibrado.

Fase estacionaria: los nutrientes se agotan y el crecimiento exponencial cesa, hay actividad
metabólica y síntesis de energía.

Muerte: las células ya no crecen ni realizan actividades metabólicas. Hay lisis celular

En el grafico es posible observar todas las fases de crecimiento? Explique su respuesta

Se observa desde la fase de aceleración positiva, pasando por la fase exponencial, fase de
aceleración negativa y por ultimo fase estacionaria.

Investigue otros métodos con los cuales se puede observar la curva de crecimiento.

Medida de consumo de nutrientes o de producción de algún metabolito por unidad de tiempo.

Ejemplos: consumo de oxígeno (QO2) y consumo de carbónico (QCO2), determinados por el
respirómetro de Warburg. Producción de ácidos.
Cuál es la aplicación industrial de conocer la cuerva de crecimiento de un microorganismo?

Permitir la predicción de crecimiento microbiano

Que entiende por absorbancia

Es la cantidad de luz que absorbe una muestra

Porque es necesario utilizar una solución blanco, cada vez que se hace una nueva lectura en el
espectrofotómetro

La solución blanco es un patrón que el equipo sigue como guía.

Que es lo que mide realmente el espectrofotómetro y como se relaciona esto con las fases de
crecimiento microbiano.

La cantidad de luz que atraviesa en una suspensión de microorganismos. Cuanto mayor es el

número de células en suspensión, tanto menor es el porcentaje de luz que atraviesa el medio.

Para relacionar la transmitancia con la densidad bacteriana se requiere de hacer curvas patrón de
densidad conocida.

2. Una vez realizado el laboratorio virtual y siguiendo el ejemplo Calcule el valor de g (tiempo de
generación) y de k (Velocidad de crecimiento) en un experimento de crecimiento en el que se
inoculó un medio con 3 x 10 6 Células /ml de E. Coli y que después de un período de latencia de
una hora creció exponencialmente durante 8 horas, alcanzando una población de 8,4 x 10 9
células / ml

𝑁 = 8,4 × 109

𝑁0 = 3 × 106
log 𝑁 − log 𝑁0
=
log(2)
log(8,4 × 109 ) − log(3 × 106 )
𝑛= = 11,4521
log(2)
𝑡
𝐺=
𝑛
8ℎ𝑟𝑠
𝐺=
11,4521 𝑔𝑒𝑛𝑒𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛𝑒𝑠
𝐺 = 0,6985
ln(2)
𝑚=
𝑡𝑑
0,6931
𝑚=
0,6985
𝑚 = 0,9922

3. Compare y señale las diferencias entre metabolitos secundarios y primarios, y dé un ejemplo

de cada uno de ellos. Incluya al menos dos explicaciones de las bases moleculares por las que
algunos metabolitos son secundarios, envés de primarios.

Metabolitos primarios se refiere a los procesos fotosintéticos que dan lugar a los ácidos
carboxílicos del ciclo de Krebs que son de bajo peso molecular y que están ampliamente
distribuidos, alfa-aminoácidos, carbohidratos, grasas, proteínas y ácidos nucleicos implicados en
los procesos vitales.

Se caracterizan por:

Tener una función metabólica primaria

Ser compuestos esenciales intermedios en las vías catabólica y anabólica

Se encuentran en todas las plantas

Tratarse de carbohidratos, lípidos, proteínas, ácidos nucleicos, clorofila

Los metabolitos secundarios son, en principio, no esenciales para la vida pero contribuyen
definitivamente a la adaptación de las especies y su supervivencia. Son más característicos para un
grupo biológico particular, tal como una familia o un género, y aparentemente, la maquinaria
sintética puesta en juego aquí está relacionada con la evolución de las especies.

4. De acuerdo a la ova sobre fermentación. Determine por medio de un esquema las etapas de
un proceso fermentativo a nivel industrial y explique cada uno de los pasos.
 Ingredientes del medio

Formulación del medio

Cultivo madre
Esterilización

Matraz de agitación Preparación del inoculo

para fermentar

Fermentador en producción

Cultivo liquido

Separación de células

Biomasa Sobrenadante sin células

Recogida del producto Tratamiento de Tratamiento del Recogida del producto

efluentes afluente
5. Estudie la ova sobre fermentación, que se encuentra en el entorno de conocimiento de la
unidad uno y describa los problemas que se presentan en el escalado desde el punto de vista de
la aireación, la esterilización y el control del proceso de fermentación. Por qué están importante
la estabilidad en un fermentador industrial?

El mantenimiento de un ambiente aséptico y unas condiciones aeróbicas son, probablemente, los

dos puntos de mayor relevancia que hay que considerar. Los fermentadores más ampliamente
utilizados a nivel industrial están provistos de mecanismos de agitación, dispersión y aireación así
como de sistemas para el control de la temperatura, pH y formación de espuma.
En los reactores de tipo "air lift“, el mismo aire inyectado promueve la agitación. Básicamente
consiste en dos cilindros concéntricos y por la base de uno de ellos, por ejemplo el interior, se
inyecta aire. De este modo se genera una circulación de líquido ascendente en el compartimento
interno y descendiente en el externo, lo que favorece el mezclado.

Factores fisicoquímicos que afectan al rendimiento de las fermentaciones industriales

1.- Oxígeno
2.-Temperatura
3.- pH

Una adecuada agitación de un cultivo microbiano es esencial para la fermentación ya que produce
los siguientes efectos en las tres fases

a. Incrementar la velocidad de transferencia de oxígeno desde las burbujas de aire al medio

líquido; los microorganismos no pueden utilizar oxígeno gaseoso, sino solamente el que se
encuentra en disolución.
b. Aumentar la velocidad de transferencia de oxígeno y nutrientes desde el medio a las células.
Debido al movimiento se evita que las células creen áreas estancadas con bajos niveles de oxígeno
y nutrientes.3 Impedir la formación de agregados celulares.
c. Aumentar la velocidad de transferencia de productos metabólicos de las células al medio.
d. Aumentar la tasa o la eficiencia de la transferencia de calor entre el medio y las superficies de
refrigeración del fermentador
 6. De acuerdo a la ova sobre fermentación Realice un cuadro comparativo donde diferencie los
tipos de fermentación industrial y los mecanismos de obtención de productos fermentativo.
BATCH O DISCOTINUA
Sistema cerrado
A lo largo de toda la fermentación
no se añade nada, excepto oxígeno
(en forma de aire), una gente
antiespumante y ácidos o bases para
controlar el pH.
Cuando se ha alcanzado el nivel
deseado de reacción, se vacía el
reactor, se limpia y el proceso se
repite
En los procesos comerciales la
fermentación frecuentemente se
interrumpe al final de la fase
logarítmica (metabolitos primarios)
o antes de que comience la fase de
muerte (metabolitos secundarios)
Dificultad de controlar la velocidad
de crecimiento, excepto variando la
composición del medio o las
condiciones de proceso
Alta demanda de oxígeno puede
generar una limitación debido a una
insuficiente capacidad del reactor
para transferir O2 al medio
ALIMENTADO O FED-BATCH COTINUO O QUIMIOSTATO
Una mejora del proceso cerrado sistema abierto
discontinuo es la fermentación
alimentada
En los procesos alimentados, los La solución nutritiva estéril se
sustratos se añaden añade continuamente al
escalonadamente a medida que biorreactor y una cantidad
progresa la fermentación equivalente de solución utilizada
de los nutrientes, con los
microorganismos
a formación de muchos Opera por periodos largos;
metabolitos secundarios está tiempos muertos bajos.
sometida a represión catabólica
(efecto glucosa)
Los elementos críticos de la El medio nutriente es inoculado
solución de nutrientes se añaden con el cultivo microbiano al
en pequeñas concentraciones al entrar al reactor y los organismos
principio de la fermentación y llevan a cabo su actividad a
continúan añadiéndose a medida que el líquido fluye a
pequeñas dosis durante la fase de través del sistema y salen del
producción. sistema junto con el medio.
útil en procesos en los que el Los organismos pueden separarse
crecimiento celular y/o la de la corriente que lleva al
formación de producto son producto y reciclarse para inocular
sensibles a la concentración del el líquido de alimentación
sustrato limitante
Se emplea cuando se quieren Alto costo por alta calidad de
evitar fenómenos de inhibición equipos y accesorios.-Requiere
por sustrato y se requiere alcanzar gran reservorio para
una alta concentración de almacenamiento de medio o
biomasa. suministro continuado de sustrato
Inconvenientes para remover calor.
Limitar la demanda de O2 del El cultivo se mantiene con
cultivo coeficientes de crecimiento
constante, crecimiento
balanceado, composición celular
constante.
Tiempos muertos entre procesos Obtener altas concentraciones de Generación de biomasa constante
disminuye la productividad sustrato evitando el efecto como productividad y conversión.-
osmótico y tóxico de nutrientes
Maximizar el crecimiento celular Volumen de reactor reducido en
(efectoCrabtree en levaduras) comparación a la productividad
similar en proceso por lotes

7. En la ova sobre fermentación. Identifique los factores que pueden alterar la producción de
enzimas de interés económico a partir de microorganismos en un proceso industrial, explique a
través de un ejemplo cada uno de ellos.

Existen varios problemas en el control de la temperatura, de la aireación y de la humedad, por ello

se prefieren los cultivos sumergidos a los cultivos en superficie. Los cultivos en medio líquido,
profundos, agitados, son mejor adaptados a los diferentes controles mediante métodos modernos
y reducen los riesgos de contaminación. Además se prestan mejor a las operaciones de
extrapolación y de optimización necesarias para el paso del fermentador piloto de laboratorio al
fermentador industrial.

Los factores que pueden afectar la producción de enzimas a partir de un proceso industrial son:

- La baja especificidad: Aunque en la industria las enzimas sean utilizadas para la hidrólisis de
macromoléculas complejas en las cuales los sitios de acoplamiento con, frecuencia se desconocen,
el efecto global que se busca involucra, generalmente, la utilización de un tipo preciso de enzima.

- El valor de pH: Este factor tiene una influencia variable según las enzimas; algunas de ellas, como
la proteasa alcalina aún son activas a pH = 10, en tanto que las enzimas fúngicas funcionan aún a pH
= 3.

- El valor de la temperatura: Generalmente, quienes utilizan enzimas se interesan en poder disponer

de enzimas que soporten temperaturas elevadas, ya que estas temperaturas conservan en parte la
esterilidad del medio de fermentación.

 pH
 Temperatura
 Transporte de oxigeno
 Interacciones alostéricas
 Inhibición competitiva
  Inhibición no competitiva
 Inhibición irreversible

HIPÓTESIS 3.

LAS VARIACIONES EN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA SE DEBEN A LAS DIFERENCIAS DEL PH FINAL

DEL MEDIO DE CULTIVO.

Las enzimas son catalizadores biológicos es decir proteínas especializadas capaces de acelerar la
velocidad de una reacción química, promoviendo así la transformación de diferentes moléculas en
productos específicos; muy activos en medios acuosos; cada enzima actúa bajo condiciones
específicas de temperatura, pH, entre otros. (Afirmación) estudios realizados demuestran que las
enzimas se consideran como aditivos en la industria de alimentos que pueden modificar la
apariencia, textura, valor nutricional, generar aromas y sabores, además de disminuir el tiempo de
proceso;(Revista iberoamericana de ciencias; 2015) por esto los procesos catalizados por enzimas
en la industria son cada día más numerosos, ya que presentan ventajas frente a los catalizadores
no biológicos (Montes; 2002) (Datos).

Este tipo de enzimas se utilizan en la industria alimentaria ya que mejoran las características de un
proceso y su aceleración; mejoran el producto, al utilizar un proceso enzimático nos ayudan a
cambiar el sabor o la textura de un alimento.

Argumentos que respaldan la hipótesis

(Garantía) el desarrollo de las enzimas como catalizadores ha dado paso a las diferentes
aplicaciones en la vida cotidiana como son la producción de edulcorantes, preparación de
productos con bajo contenido de lactosa, obtención de biocombustibles etc. Como también en la
industria farmacológica, industria cosmética, industria de alimentos. (Respaldo)Las enzimas
pueden ser de origen vegetal, animal y microbiano; la producción de enzimas microbianas se
realiza mediante cultivos aeróbicos. En general las enzimas se producen en pequeñas cantidades
durante la fase de crecimiento activo, pero se acumulan en grandes cantidades en la fase
estacionaria del crecimiento.

Durante la producción es importante el control de temperatura, pH y la presencia de compuestos

químicos inactivantes para así obtener una excelente actividad enzimática.

Estos factores son muy importantes ya que las enzimas actúan dentro de un PH óptimo y este
debe ser constante de tal manera que el PH del medio de cultivo sea el mismo en todo el
fermentador; las fermentaciones deben ser llevadas a cabo en un margen estrecho de
temperatura y constante en lo posible; los microorganismos que crecen a una temperatura
inferior a la óptima tienen retardado su crecimiento, si la temperatura es demasiado alta, se
puede inducir una respuesta de estrés al choque térmico con la consiguiente producción de
proteasas celulares que ocasionan una disminución en el rendimiento de los productos proteicos
(Reserva).

B. Analice la evidencia

Pregunta 1. ¿Cuál de los microorganismos es más efectivo? Fundamente su respuesta de acuerdo

al experimento realizado.

A partir de la realización de los experimentos se llega a la conclusión de que el microorganismo

más efectivo es el de la muestra del grupo C, ya que esta produjo más biomasa en comparación
con las otras muestras.

Al realizar los 63 pasos que contiene el laboratorio virtual 2 concluyo que de las 3 muestras (A, B,
C) que se analizaron, la C resulto más efectiva ya que produjo claramente más biomasa al final del
proceso.

C1: caldo 1= 27,50 gr/l

C2: caldo 2=31,50 gr/l

C3: caldo 3=30,00 gr/l

Con la realización del laboratorio y el análisis de los resultados obtenidos llego a la conclusión de
que la hipótesis para explicar dichos resultados es:

Hipótesis 3. Las variaciones en la actividad enzimática se deben a las diferencias del pH final del
medio de cultivo.

Ya que cada enzima funciona de una manera más efectiva a cierta temperatura y PH y como
consecuencia, su actividad disminuye cuando alcanza valores por encima o por debajo de dichos
puntos. Los enlaces de hidrogeno son fácilmente destruido por el aumento de la temperatura, lo
cual a su vez puede perjudicar la estructura terciaria de la enzima que son de gran importancia
para la unión con el sustrato. Los cambios de PH alteran el estado de ionización de los
aminoácidos con carga eléctrica.

Las enzimas se inactivan por el calor esto sucede ya que por ser proteínas pueden desnaturalizarse
completamente si se someten a temperaturas altas, otra de las características es que las enzimas
funcionan más eficientemente a ciertas temperaturas optimas, es decir a ciertas temperaturas las
enzimas realizan una actividad catalizadora, de tal manera que permiten la continuación de la
reacción catalizada a la mayor velocidad. A temperaturas por encima o por debajo de la
temperatura óptima para la actividad de la enzima esta disminuye o se detiene. De esta manera la
enzima trabaja con mayor eficiencia a una temperatura de 37 °C (Baker, 1972).

Las enzimas son de gran importancia en todos los aspectos de los organismos vivos pues nos dan
la facilidad de acelerar o facilitar las reacciones que se producen en el interior del organismo; por
otra parte las enzimas ayudan a funciones de nuestro organismo como favorecer la digestión y
absorción de los nutrientes, efecto antiinflamatorio, reduce el daño que produce las toxinas entre
otras.

3. EVALUACION DE LA HIPOTESIS

Hipótesis

Las variaciones en la actividad enzimática se deben a la diferencia del PH final del medio de
cultivo.

Argumentos a favor

(Garantía) el desarrollo de las enzimas como catalizadores ha dado paso a las diferentes
aplicaciones en la vida cotidiana como son la producción de edulcorantes, preparación de
productos con bajo contenido de lactosa, obtención de biocombustibles etc. Como también en la
industria farmacológica, industria cosmética, industria de alimentos. (Respaldo)Las enzimas
pueden ser de origen vegetal, animal y microbiano; la producción de enzimas microbianas se
realiza mediante cultivos aeróbicos. En general las enzimas se producen en pequeñas cantidades
durante la fase de crecimiento activo, pero se acumulan en grandes cantidades en la fase
estacionaria del crecimiento.

Durante la producción es importante el control de temperatura, pH y la presencia de compuestos

químicos inactivantes para así obtener una excelente actividad enzimática.

Argumentos en contra

El alfa-amilasa es un enzima termoestable, su promedio de temperatura es de entre 55 y 80°c,

trabaja con un PH menor a 6 y con una concentración de calcio de calcio de entre 50ppm y
100ppm para su mejor rendimiento

La hipótesis de la compañera asegura que la actividad enzimática varia por el PH final del medio de
cultivo, los PH de los medios de cultivo están entre 5,2 y 5,7, ninguno de los cultivos sobre pasa un
PH mayor de seis, por tanto considero este punto como principal debilidad de la hipótesis ya que
en la documentación obtenida como material de apoyo que da la universidad (Ortiz, F.) asegura
que el PH debe ser menor de seis y en ningún momento del experimento se demuestra que el PH
sobrepase el valor nombrado

EXCEPCIÓN

No hay reacción productiva mientras el inhibidor se une a la enzima, por lo que la actividad de la
enzima declina.

CUALIFICADOR MODAL

¨Deberia¨

REFERENCIAS

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http://www.uhu.es/08007/documentos%20de%20texto/apuntes/2005/pdf/tema_08_enzimas_2.
pdf

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Ortiz, F. OVA de Fermentaciones. (2012). Universidad Nacional Abierta y a Distancia. Recuperado

de http://hdl.handle.net/10596/9950
Ortiz, F. Tutorial 1. Biotecnología de las enzimas (2014). Universidad Nacional Abierta y a Distancia.
Recuperado de: Tutorial Biotecnología.

Battaner, E. (2013) Compendio de enzimología. Salamanca, ES: Ediciones Universidad de

Salamanca. Pag: 47-65 Recuperado de
http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2077/lib/unadsp/reader.action?ppg=1&docID=10853641&tm
=1479512703653

Dos santos Eduardo. 2007. Estudio de comportamiento cinético de microorganismos de interés en

seguridad alimentaria con modelos matemáticos. Universidad autónoma de Barcelona.
Recuperado de: http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/5691/ajse1de1.pdf

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https://www.academia.edu/2766150/Introducci%C3%B3n_a_la_Microbiolog%C3%ADa_Predictiva
_-_Manual_de_pr%C3%A1cticas_de_laboratorio