Flujograma

Bioquímica

Practica N°2

Grupo: Miercoles de 10 am – 2 pm Mesa 4

Alumna: Joselyn Mishel Arellano Quintanilla

Obtencion de Fracciones Celulares y Determinación del Contenido Proteico

HOMOGENIZACIÓN SEPARACIÓN SUBCELULAR EXTRACCIÓN DE PROTEINAS

1. Colocar el 1. Medir y colocar en un
homogeneizador de tubo de centrifuga 10
Potter-Elvejehm sobre ml. de solución buffer
hielo. STM 2M (seráñ como un
2. Pesar en papel glasé cojín).
aproximadamente 1.5 g 2. Medir 10 ml de
de tejido. Anotar y homogenizado y añadir
colocar el tejido en un por las paredes sobre el
beacker (50ml). buffer medido
3. Picar el tejido con una anteriormente,
tijera, trabajar sobre centrifugar por 10 min. a
hielo. 2000 rpm.
4. Poner el tejido picado al 3. Decantar el
homogeneizador y sobrenadante y separar
agregar 9 ml de buffer el pellet.
STM 250 mM. 4. Resolubilizar el pellet en
5. Homogenizar por 2 min. 5 ml de buffer STM 2M
con interrupciones cada por pipeteo repetido.
min. para enfriar el 5. Filtra la suspensión.
medio. Dejar sobre hielo. 6. Centrifugar a 2000 rpm
por 15 min.
7. Decantar el
sobrenadante, guardar
el pellet(núcleos)
NUCLEARES
1. Resuspender los núcleos
en 2ml de buffer NE para
extracción de proteínas.
2. Incubar a 4°C por 30 min
agitando con cuidado
3. Hacer pasar la solución
por una aguja N°16 con
una jeringa, guardar.
4. Lisar los nucleos
mediante 10 pasajes de
la solución anterior por
una aguja N° 18
5. Centrifugar el lisado a
7000 rpm por 15 min.
6. Guardar el
sobrenadante(Nuc- S)
que tiene proteínas
solubles del nucleo y
aquellas no ligadas
fuertemente al ADN.

Determinación de proteínas según Bradford

*Determinación de proteína:

*Curva de calibración: