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UNIVERSIDAD NORBERT WIENER

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

CURSO DE FARMACOBOTÁNICA y FARMACOGNOSIA

GUÍA DE PRÁCTICAS

Smallanthus sonchifolius

AUTORES: Q.F. Bertha Jurado Teixeira


Q.F. Eva Ramos LLica
Q.F. Elizabeth Consuelo Ortega Romero

LIMA, 2014

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007


INTRODUCCIÓN

La farmacobotánica es la ciencia que estudia las plantas desde diversos enfoques, ya sea de la
botánica pura o aplicada. La botánica pura estudia las plantas desde un enfoque teórico, desde los
aspectos de taxonomía y también de la fisiología y la citogenética de los vegetales. La botánica
aplicada está basada en lo anterior y también considera los usos prácticos que se le pueden dar a
las plantas para lograr su adecuada utilización, que pueden ser disciplinas como la forestal la
agrícola, la farmacéutica y la naturista.

La Farmacognosia es una ciencia que tiene por objeto el estudio científico de las drogas naturales
de origen vegetal y animal, de sus constituyentes químicos, principios activos y productos
relacionados.

En la presente asignatura se considera como Objetivo General; proporcionar al estudiante los


conocimientos básicos, necesarios para el estudio, investigación y manejo con calidad de las plantas
y de las drogas naturales utilizadas como recursos terapéuticos.

Como objeto específico se tiene en primer lugar que el estudiante desarrolle habilidades y destrezas
en el conocimiento de las estructuras internas y externas de las plantas que contribuyan a la
identificación de las mismas y en el manejo y utilización de los diferentes Métodos y Técnicas
Analíticas para la extracción, aislamiento, identificación y cuantificación de los principios activos
responsables de las acciones farmacológicas que se encuentran en las drogas; y en segundo
término motivar el interés del estudiante al estudio e investigación de las especies vegetales.
Con esta guía se pretende contribuir a un mejor desarrollo de las prácticas.

Las autoras.

F-CV3-3B-2 Rev. Junio


2 2007
PRÀCTICAS DE LABORATORIO

Semana Práctica Tema


Elaboración de diversos cortes y preparados microscópicos para la
1 1 caracterización de las drogas vegetales (Citología).

2 2 Elaboración de diversos cortes y preparados para la caracterización


microscópica de las drogas vegetales (Histología).

Reconocimiento de los caracteres macroscópicos en las drogas vegetales


3 3 (Morfología).

Control Botánico en una especie vegetal peruana. Procedimientos de


recolección, selección, secado, almacenamiento y conservación de
4 4
drogas. Análisis de drogas vegetales.

Control de calidad de drogas vegetales. Ensayos botánicos, Análisis


cualitativo de constituyentes químicos, tamizaje fitoquímico en extracto
5 5
acuoso. Preparación del extracto etanólico.

Análisis farmacognóstico y tamizaje fitoquímico preliminar en extractos


estandarizados. Método de separación y purificación de drogas vegetales.
6 6
Cromatografía en Capa Fina.

Extracción e identificación de carbohidratos simples, oligósidos y


7 polisacáridos a partir de drogas naturales. Reacciones generales y
7
particulares de carbohidratos.

8 Primera evaluación de práctica

Reconocimiento de Compuestos fenólicos simples y compuestos


8
9 antraquinónicos.
10
Reconocimiento de flavonoides, antocianinas y taninos. Valoración de
9
taninos en drogas vegetales.
11 10 Extracción y reconocimiento de aceites esenciales.

12 11 Drogas con alcaloides de núcleo tropánico, núcleo indólico, oxindólico y


núcleo fenantreno. Extracción ácida-alcalina, identificación, obtención y
valoración.

Investigación Farmacognóstica de los extractos de la planta medicinal


12 estudiada (Análisis Fitoquímico: Tamizaje fitoquímico, pH, Índice de
13
Refracción, densidad y cromatografía en capa fina).

14 Lípidos, identificación y control de calidad de aceites.


13

15 14 Vitaminas liposolubles e hidrosolubles, extracción, identificación y


cuantificación.

16 Segunda evaluación de práctica

F-CV3-3B-2 Rev. Junio


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PRÁCTICA N ° 1
CARACTERIZACIÓN MICROSCÓPICA DE LAS DROGAS VEGETALES.
CITOLOGÍA: CÉLULA VEGETAL, PARED CELULAR, NÚCLEO
Y COMPONENTES PROTOPLASMÁTICOS.

MARCO TEÓRICO:
El estudio de la estructura interna de las plantas requiere de adecuadas preparaciones
microscópicas de muestras que nos permitan la observación detallada de los diferentes tejidos y
estructuras vegetales; éstas se elaboran preparando láminas histológicas de diferentes tipos de
cortes hechos en plantas.
La célula vegetal presenta entre sus principales características una estructura celulósica compleja
(pared celular) y diferentes componentes no protoplasmáticos primarios (substancias que se
producen como consecuencia del metabolismo primario) y comprenden a los polisacáridos
(almidones) así como a los lípidos y proteínas de reserva (aleurona), mientras que los denominadas
inclusiones celulares (diversas formas drusas, rafidios, maclas, arenilla cristalífera) constituyen las
formaciones cristalinas de oxalatos(diversas formas drusas, rafidios, maclas, arenilla
cristalífera);todas estas sustancias tienen su importancia farmacognóstica en la identidad de la
droga vegetal.

COMPETENCIAS: Capacitar al estudiante para que adquiera habilidad en cortes histológicos


en órganos vegetales. Identificar la célula y paredes celulares, los
componentes de reserva, almidones y aleurona así como los cristales de
oxalato presentes en la célula vegetal.

MATERIAL VEGETAL:

Solanum tuberosum “papa” (tubérculo) Zebrina pendula “oreja de gato” (hoja)


Allium cepa “cebolla” (bulbo) Solanum tuberosum “papa” (tubérculo)
Capsicum pendulum “ají amarillo” (fruto) Phaseolus vulgaris“frejol”(fruto y/o semilla)
Ficus elástica “caucho” (hoja) Opuntia ficus “tuna” (tallo)
Daucuscarota “zanahoria” (raíz)
Muestra: raíces, tallos y hojas

OTROS MATERIALES:

Láminas y laminillas, Papel lente


Papel higiénico, Franela limpia
Placa petri, gotero, estiletes.
Hoja de afeitar nueva.
Reactivos: lugol, glicerina, hipoclorito de
sodio, safranina, azul de toluidina y otros
colorantes

Microscopios
Cámara Fotográfica

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4 2007
PROCEDIMIENTO:

Preparación de cortes: Los cortes se realizan a mano alzada, con una hoja de afeitar
a) Cortes que comúnmente se hacen en
hojas:
I. Corte superficial: Se secciona
paralelamente a la superficie de la
hoja.
II. Corte transversal: Se secciona
perpendicularmente a la vena
media.

b) Cortes que comúnmente se hacen en


tallos y raíces.
- Corte transversal: se hace
perpendicular al eje del cilindro del
tallo o de la raíz.
- Corte longitudinal: se hace Fig. 1. Tipos de corte a mano alzada
paralelo al eje del cilindro.

Confección de una preparación microscópica:


Sobre una lámina portaobjeto se deposita una gota de agua y luego se coloca mediante una pinza o
estilete el material a examinar, se recubre el material con una laminilla cubreobjeto.

Observación de las preparaciones:


Colocar su lámina preparada en la platina del microscopio para su observación, primero con el
objetivo de menor aumento (40x) luego en (100x) y después a mayor aumento (400x).

Corte transversal de tallo Corte longitudinal Corte paradermal

Fig. 2. Tipos de cortes usando colorantes


Células de epidermis en Célula pétrea en Cistolito en hoja de
catáfilo de cebolla fruto de membrillo caucho

Inclusiones celulares Sustancias de reserva: granos de almidón

Drusas Rafidios

A. Papa Solanum tuberosum, B. Arroz Oryza sativa


C. Frijol Phaseolus vulgaris D. Maíz Zea mays E.
Esferocristales de inulinaF.Granos de aleurona
Fig. 3 Citología e inclusiones citoplasmáticas

2. COLORACIÓN DE LOS CORTES SELECCIONADOS


Se usan los cortes más delgados realizados a mano libre o con micrótomo
Una vez realizados los cortes, se recogen en una placa petri con agua destilada; se selecciona bajo
la lupa los mejores cortes y se trata con hipoclorito de sodio para su clarificación. Se debe lavar
varias veces.

COLORACIÓN DIRECTA: SAFRANINA

TÉCNICA:
- Clarificar los cortes con hipoclorito de sodio al 50% hasta que se observen blancos o casi
transparentes (según el material).
- Lavar varias veces con agua destilada (5-6 veces).
- Pasar por alcohol 70º
- Colocar con safranina diluida al 15% durante 2-5 minutos según el material
- Lavar con agua destilada
- Montar en gelatina-glicerina
Las paredes secundarias lignificadas se tiñen de color rojo intenso y también la cutícula. Los
parénquimas toman color rosado.
3. CITOLOGÍA e INCLUSIONES CITOPLASMÁTICAS

A. Realizar cortes transversales muy delgados de la parte carnosa del membrillo o ají. Observe a
menor aumento las células pétreas. A mayor aumento, reconocer lapared secundaria lignificada,
el lumen y los canalículos porales.
B. Realizar un raspado del tubérculo de papa, semilla de frejol y depositarlo en una lámina con una
gota de agua, cubrir con la laminilla y observar con el objetivo de mayor aumento. Identifique los
diferentes tipos de granos de almidón: simples y compuestos, con sus estratificaciones e hilio
excéntrico. A mayor aumento dentro de las células algo redondeadas. Se identifican
amiloplastos de formas peculiarmente características luego añadir lugol y señalar lo ocurrido.
C. Realizar corte transversal de hoja de sábila y colocar en un portaobjeto, realizar el montaje con
una gota de agua.Observe: los rafidios.
D. Realice un corte transversal del tallo modificado de tuna o en corte transversal de peciolo de
begonia, realice el montaje con una gota de agua.Observe: células isodiamétricas conteniendo un
agregado cristalino de aspecto asteroideo: la drusa.
E. Realice el corte transversal de la raíz de “zanahoria” y montar con una gota de agua. Observar
células de contorno redondeado en cuyo interior presenta pequeños corpúsculos tubulares e
irregulares refringentes de color anaranjado (cromoplastos con predominio de carotenoides).
F. Corte superficial del envés de las hojas de “oreja de gato” y hacer el montaje respectivo. Observe
células de contorno poligonal, unos incoloros y otros de color morado púrpura; dicho color se
debe a que el contenido vacuolar (vacuoma) está conformado por antocianinas.

RESULTADOS:
Hacer esquemas de sus observaciones en la HOJA DE OBSERVACIONES y elaborar el informe de su
práctica mediante un PROTOCOLO DE ANÁLISIS BOTÁNICO según Formato.

ACTIVIDAD BIBLIOGRÁFICA:
1. ¿En qué consiste la Herborización de muestras vegetales? Desarrolle un mapa conceptual con
gráficos o dibujos.
2. Mencione mediante un cuadro 10 plantas medicinales endémicas o nativas del Perú, con los
siguientes datos:
Nombre Común Nombre Científico Familia Usos Medicinales Título, Autor y año de
publicación.
1.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

Libros
1. Pérez, E. 1999. Introducción a la Biología Vegetal. Impresiones David, Lima
2. Strasburger. 1994. Botánica. Ediciones Omega S.A. Barcelona.
3. Gola G.; Negri G.; Cappelletti C. 1965.Tratado de Botánica Barcelona,
6. Mostacero, J. Taxonomía de las Fanerógamas. 2002. Útiles del Perú. 1ra. Edición. Lima.
7. Greulach V.; Adams A. 1990. Las plantas: introducción a la botánica moderna. México
9. Reynaud, J. 2002. La flora del farmacéutico. España.

Revistas
1. Fieldmuseum: http://fm1.fieldmuseum.org/vrrc/
2. Flora de China: http://flora.huh.harvard.edu/china/
3. Raintree's Tropical Plant Database: http://www.rain-tree.com/plistbot.htm#.Ux9nDD95NPI
4. Revista peruana de biología: http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/rpb
5. The Plant List: www.theplantlist.org
6. Trópicos, Missouri Botanical Garden: www.tropicos.org
HOJA DE OBSERVACIONES DE PRÁCTICA N ° 1
CARACTERIZACIÓN MICROSCÓPICA DE LAS DROGAS VEGETALES.
CITOLOGÍA: CÉLULA VEGETAL, PARED CELULAR, NÚCLEO Y COMPONENTES
PROTOPLASMÁTICOS.
Dibuje o esquematice sus observaciones FECHA:......./.........../........

Muestra Muestra Muestra Muestra


Tipo de corte: Tipo de corte: Tipo de corte: Tipo de corte:
Observación Observación Observación Observación

Muestra Muestra Muestra Muestra


Tipo de corte: Tipo de corte: Tipo de corte: Tipo de corte:
Observación Observación Observación Observación

Muestra Muestra Muestra Muestra


Tipo de corte: Tipo de corte: Tipo de corte: Tipo de corte:
Observación Observación Observación Observación
FORMATO: PROTOCOLO DE ANÁLISIS BOTÁNICO
Analistas:
Nombre común:
Nombre científico:
TEMA:
Fecha: / /

FOTOGRAFÍAS DE CORTE ESQUEMA (DIBUJO A MANO


FOTOGRAFÍAS PLANTA COMPLETA SIN COLOREAR DE LA
OBSERVACIÓN DEL CORTE)

Nombre científico:

Familia:
Tipo de corte
Lugar de Origen:
Coloración
Habitad:
Aumento
Lugar de recolección:

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
PRÁCTICA N° 2

HISTOLOGÍA VEGETAL: Tejidos Meristemáticos, Parenquimáticos, Mecánicos, Protectores,


Conductores y Secretores

MARCO TEÓRICO:

Los tejidos vegetales encargados de la protección de la planta se caracterizan especialmente por carecer
de espacios intercelulares y conformar una capa uni o pluricelular en la parte externa del órgano vegetal,
se diferencian en su origen primario (Epidermis) o secundario (Peridermis). El tejido mecánico está
conformado por elcolénquima,de células vivas y paredes primarias desigualmente engrosadas y el
esclerénquima, conformado por célulasmuertas y paredes secundarias lignificadas, uniformemente
engrosadas. El xilema es un tejido vascular conformado por células muertas y de paredes secundarias
lignificadas con unaserie de engrosamientos característicos.Los diferentes subproductos del metabolismo
celular secundario que se producen en las plantas generalmente se encuentran localizados en células y
estructuras secretoras en los distintos órganos vegetales, por ejemplo los laticíferos y las cavidades
secretoras. Los diferentes órganos vegetales presentan una serie de tejidos vegetales que conforman
una estructura interna propia del desarrollo en las plantas, los cuales se describen como parte de la
caracterización botánica de las drogas vegetales.

TIPOS DE COLÉNQUIMA
A Colénquima angular
TEJIDO MERISTEMÁTICO B Colénquima laminar
CAMBIUM MODELO DE CRECIMIENTO SECUNDARIO C Colénquima anular
D Colénquima lagunar

HACES CONDUCTORES
TEJIDO SECRETOR A Haz conductor colateral cerrado
A Bolsa oleífera esquizógena B Haz conductor colateral abierto
B Bolsa oleífera lisígena
C Canal secretor
D Tubo laticífero no articulado ramificado
E Tubo laticífero articulado no ramificado
TIPOS DE
TRICOMAS
A Pluricelular
B Cónico unicelular
C Glandular largo
D Glandular corto
E Glandular pluricelular
F Mixto
G Estrellado
H Urticante

COMPETENCIAS: Reconocer y caracterizar los principales Tejidos Meristemáticos,


Parenquimáticos, Mecánicos, Protectores, Conductores y Secretores vegetales de valor
diagnóstico.

MATERIALES:

Material Vegetal
- Raíz fresca de Allium cepa “cebolla”
- Yemas del tallo de Ricinuscomunis “higuerilla”
- Pelargoniumhortorum “geranio” (hoja)
- Cucurbita pepo “zapallo” (tallo)o C. maxima “calabaza”
- Citrus aurantium “naranja” (fruto)
- Ficus elastica “caucho” (pecíolo)
- Sambucus peruviana “Saúco” (tallo)
- Tallo de Helianthus annus “girasol”
- Tallo de Zea mays “maíz”
- Tallo de Phoeniculum vulgare “hinojo”
- Fruto de Pyrus sp. “pera”
- Hojas de Iris florentina “lirio”
- Hojas de Nicotina sp. “tabaco”, Malva sp. “malva”, Olea europea “olivo”, Urtica urens “ortiga”.

Otros Materiales y Reactivos:


Láminas y laminillas, gotero, estiletes
Hoja de afeitar nueva, papel lente.
Safranina. Lugol, Fast Green, verde Janus, Rojo de metilo, azul de toluidina.
Microscopio
Cámara fotográfica

PROCEDIMIENTO:

TEJIDO EPIDÉRMICO:
1. Realizar cortes superficiales o paradermal de la hoja de geranio y de lirio, y en cortes paradermal de
hoja de olivo, ortiga, malva, geranio, tabaco hacer el montaje en una gota de agua.Observar células
de contorno sinuoso y la posición desordenada de los estomas: Además diferenciar los pelos o
Tricomas pluricelularescónicos y los: glandulares en geranio y células ordenadas en lirio, con
estomas ordenados.
TEJIDO MECÁNICO
2. Realizar cortes transversales del tallo de zapallo o calabaza o hinojo o sauco, hacer el montaje con
una gota de safranina y observe: debajo de la epidermis, reconocer células de forma poliédrica, con
engrosamiento en los ángulos y débilmente teñidas: Colénquima angular. En las mismas muestras,
por debajo del parénquima se presentan células con paredes engrosadas y teñidas intensamente,
fibras de Esclerénquima.

TEJIDO CONDUCTOR O VASCULAR


3. Realizar cortes longitudinales y transversaldel tallo de girasol,el montaje en una gota de safranina con
fast green o verde janus y observe: el xilema formado por las tráqueas con engrosamientos que los
tipifican en anillado, espiralado, helicoidal y reticulado. Y los haces vasculares ordenados.

TEJIDO SECRETOR
4. Realizar cortes longitudinales del pecíolo de la hoja de caucho, preparar el montaje con una gota de
agua y observar: amayor aumento células alargadas conteniendo látex: LATICÍFERO NO
ARTICULADO, reconocidos por su contenido de color gris. Y en corte paradermal de cáscara de
naranja se observará las cavidades lisígenas, y en pétalo de rosa las células papilosas.

ESTRUCTURA INTERNA DE TALLO Y HOJA


5. Realizar cortes transversales en sauco, hacer el montaje en una gota de safranina.
A mayor aumento reconocer la estructura secundaria de tallo (dicotiledónea) y los siguientes tejidos:
- Peridermis (con vestigios de epidermis) - Cambium vascular
- Parénquima cortical clorofiliano - Xilema primario y secundario.
- Líber primario (floema esclerosado) - Radios medulares, células de parénquima.
- Floema secundario -Médula, células de parénquima incoloro

RESULTADOS:

Hacer esquemas de sus observaciones en la Hoja de Observaciones y elaborar el informe de su práctica


mediante un Protocolo de análisis botánico según Formato.

ACTIVIDAD DE INVESTIGACIÓN BIBLIOGRÁFICA

1. En qué consiste la Taxonomía vegetal, de un ejemplo.


2. Qué función realizan los diferentes tipos de tejidos vegetales, grafique y señale el uso mediante un
cuadro.

Tipo de Tejido Función Presentes en especies vegetales.


Nombre común, científico y Familia.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. ALDAVE, A., MOSTACERO, J. 1998. Botánica Farmacéutica, Lima.


2. ANGULO, P., DIAZ, F. 1997. La medicina tradicional en el desarrollo de fitomedicamentos, el enfoque
etnofarmacológico. Lima.
3. BRACK E., A. 1999. Diccionario enciclopédico de las plantas útiles del Perú. Edit. PNUD – CBC,
Cusco – Perú.
4. CASTILLO, E. 2007. Manual de Fitoterapia. Primera Edición. Editorial Elsevier. Barcelona.
5. CULTURAL. 2005. Atlas de Botánica: El Mundo de las Plantas. USA.
6. DIAZ, T. 2004. Curso de Botánica.
7. ESAU, K. 2008. Anatomía vegetal. Tercera Edición. Editorial Omega. Barcelona.
8. FAHN, A. 1994. Anatomía vegetal. Edit. Blume, Madrid.
9. FONT QUER, Pío 1993. Diccionario Botánica, Edit. Labor, Barcelona.
OBSERVACIONES DE LA PRÁCTICA N° 2

HISTOLOGÍA VEGETAL: Tejidos Meristemáticos, Parenquimáticos, Mecánicos, Protectores,


Conductores y Secretores

Dibuje o esquematice sus observaciones FECHA:......./.........../........

Muestra Muestra Muestra Muestra


Tipo de corte: Tipo de corte: Tipo de corte: Tipo de corte:
Observación Observación Observación Observación

Muestra Muestra Muestra Muestra


Tipo de corte: Tipo de corte: Tipo de corte: Tipo de corte:
Observación Observación Observación Observación

Muestra Muestra Muestra Muestra


Tipo de corte: Tipo de corte: Tipo de corte: Tipo de corte:
Observación Observación Observación Observación
PRÁCTICA N° 3

MORGOLOGÍA VEGETAL (Raíz, Tallo, Hojas, Flor, Fruto y semilla)

MARCO TEÓRICO:
La morfología estudia los órganos de la planta y las partes que los forman. Estos órganos son la raíz, el
tallo y las hojas que llamamos órganos vegetativos y la flor y el fruto, que son los órganos reproductivos.
Las raíces se pueden clasificar de acuerdo a su origen, al medio en que viven por su forma, por su
duración y por su consistencia.A diferencia de las raíces, el tallo presenta geotropismo negativo, tiene
nudos (lugares donde se originan las hojas) y entrenudos (regiones entre dos nudos consecutivos),
yemas (áreas del tallo situadas justo por encima del punto de inserción de la hoja apical y axilares) y por
lo común hojas bien desarrolladas.Sus funciones básicas son de soporte, de conexión de hojas y yemas
entre sí y con la raíz y de conducción de la savia.

Las funciones primordiales de las hojas son la fotosíntesis (cloroplastos) y el intercambio gaseoso
(estomas), también asume las de protección, defensa, reserva y reproductora. Las hojas se clasifican por
el borde de la hoja, la forma del limbo, peciolo, vaina y nervadura.
La flor es un brote de crecimiento definido con hojas que producen órganos reproductores. De estas
hojas, las más apicales o internas son esporófilos y las más inferiores o externas son antófilos.Se llama
inflorescencia a una ramificación terminada en flores. Cada una de las ramitas del eje primario o caquis,
que sostiene una flor, se llama pedicelo. Cuando solo existe una flor en el ápice del tallo o en la axila de
una hoja, no hay inflorescencia y entonces se dice que la flor es solitaria, el tipo de inflorescencia tiene
importancia para la taxonomía botánica; es característico de cada familia.
El fruto es el conjunto de las piezas florales que persisten después de la fecundación y acompañan a la
semilla generalmente se dice que es el ovario desarrollado y maduro ya que este se engruesa
acumulando materias nutritivas y se transforman en fruto y contiene la semilla.
La semilla es el medio principal para perpetuar de generación en generación la mayoría de las plantas
(ya que algunas se regeneran vegetativamente) y gran parte de las especies leñosas.

COMPETENCIAS: Reconocer y caracterizar los principales órganos de la planta (Raíz, Tallo, Hojas,
Flor, Fruto y semilla)

MATERIALES:
Diferentes tipos de (Raíz, Tallo, Hojas, Flor, Fruto y Semilla)
Lupas
Hoja de afeitar
Reglas
Placas Petri

PROCEDIMIENTO:
Identificar según las características morfológicas los tipos de raíz, tallo, hoja, flor, fruto y semilla.
TALLO
RAÍZ

TIPOS DE RAÍZ
TIPOS DE RAÍZ
HOJAS

FLOR
INFLORESCENCIA

FRUTO
SEMILLA

RESULTADOS:
Hacer esquemas de sus observaciones en la Hoja de Observaciones y elaborar el informe de su práctica
mediante un Protocolo de análisis botánico según Formato PROTOCÓLO BOTÁNICO.

ACTIVIDAD DE INVESTIGACIÒN BIBLIOGRÀFICA


1. De 2 ejemplos de Raíces, Hojas, Tallos, Flores, Frutos y Semillas con usos medicinales mediante un
cuadro.

Nombre Común Nombre Científico Órgano de la planta Uso medicinal

Referencias Bibliográficas

1. The Plant List: www.theplantlist.org


2. The Plants Database: http://plants.usda.gov/java/
3. Trópicos, Missouri Botanical Garden: www.tropicos.org
4. Asociación Latinoamericana de Botánica: http://www.botanica-alb.org/links.php
5. Real Jardín Botánico: http://www.rjb.csic.es/jardinbotanico/jardin/index.php?Cab=111&len=es
OBSERVACIONES DE LA PRÁCTICA N° 3
MORGOLOGÍA VEGETAL (Raíz, Tallo, Hojas, Flor, Fruto y Semilla)

Dibuje o esquematice sus observaciones FECHA:......./.........../.......

Muestra Muestra Muestra Muestra


Tipo de Raíz Tipo de Raíz Tipo de Raíz Tipo de Raíz
Observación Observación Observación Observación

Muestra Muestra Muestra Muestra


Tipo de Tallo Tipo de Tallo Tipo de Tallo Tipo de Tallo
Observación Observación Observación Observación

Muestra Muestra Muestra Muestra


Tipo de hoja Tipo de hoja Tipo de hoja Tipo de hoja
Observación Observación Observación Observación
Muestra Muestra Muestra Muestra
Tipo de Flor Tipo de Flor Tipo de Flor Tipo de Flor
Observación Observación Observación Observación

Muestra Muestra Muestra Muestra


Tipo de Fruto Tipo de Fruto Tipo de Fruto Tipo de Fruto
Observación Observación Observación Observación

Muestra Muestra Muestra Muestra


Tipo de Semilla Tipo de Semilla Tipo de Semilla Tipo de Semilla
Observación Observación Observación Observación
PRÁCTICA N° 4
CONTROL BOTÁNICO EN UNA ESPECIE VEGETAL PERUANA A INVESTIGAR

MARCO TEÓRICO:
Las plantas constituyen un recurso valioso en los sistemas de salud de los países en desarrollo. La
Organización Mundial de la Salud (OMS) ha estimado que más del 80% de la población mundial utiliza,
rutinariamente, la medicina tradicional para satisfacer sus necesidades de atención primaria de salud y
que gran parte de los tratamientos tradicionales implica el uso de extractos de plantas o sus principios
activos (Akerele, 1993; Sheldon et al., 1997; Shrestha y Dhillion, 2003; Katewa et al., 2004). De acuerdo
a la OMS (1979) una planta medicinal es definida como cualquier especie vegetal que contiene
sustancias que pueden ser empleadas para propósitos terapéuticos o cuyos principios activos pueden
servir de precursores para la síntesis de nuevos fármacos.

Estas plantas también tienen importantes aplicaciones en la medicina moderna. Entre otras, son fuente
directa de agentes terapéuticos, se emplean como materia prima para la fabricación de medicamentos
semisintéticos más complejos, la estructura química de sus principios activos puede servir de modelo
para la elaboración de drogas sintéticas y tales principios se pueden utilizar como marcadores
taxonómicos en la búsqueda de nuevos medicamentos (Akerele, 1993).

La investigación sobre el uso de plantas medicinales forma parte de la etnobotánica, que ha sido definida
como el estudio de las interrelaciones entre los grupos humanos y las plantas (Ford, 1978; Martin, 2001;
Gómez-Veloz, 2002). Por su naturaleza interdisciplinaria abarca muchas áreas, incluyendo: botánica,
química, medicina, farmacología, toxicología, nutrición, agronomía, ecología, sociología, antropología,
lingüística, historia y arqueología, entre otras; lo cual permite un amplio rango de enfoques y aplicaciones
(Alexiades, 1996a; Martin, 2001)

A pesar de todas estas innovaciones, Zent (1999) plantea que la filosofía de la etnobotánica no ha
cambiado mucho, pues en la mayoría de las investigaciones sobre plantas medicinales se sigue
enfatizando la documentación científica de las plantas y sus usos para beneficio casi exclusivo de
grandes transnacionales, con poco interés en la dinámica de los sistemas de conocimiento local y en la
compensación a las comunidades nativas. Se requiere entonces de más trabajo interdisciplinario, de una
mayor preocupación por los aspectos éticos de la comercialización de medicamentos desarrollados a
partir del conocimiento tradicional de ciertos grupos humanos (Prance, 1991) y por el retorno de los
resultados obtenidos, en ensayos biológicos de plantas tropicales, a los países y grupos humanos que
han colaborado en la colección de las plantas evaluadas (Ritcher y Carlson, 1998).

COMPETENCIAS: - Realizar el análisis Botánico Macroscópico de la especie vegetal a investigar,


Reconociendo morfológicamente los diferentes órganos de la especie.
- Reconocer y caracterizar los principales órganos de la planta a nivel
microscópico mediante cortes histológicos (Raíz, Tallo, Hojas, Flor, Fruto y
semilla) con ayuda de la histoquímica.
- Realizar el análisis organoléptico de los diferentes órganos de la especie
vegetal.

MATERIALES:
Especie vegetal a investigar conlosórganos de Láminas y laminillas, gotero, estiletes
laespecie a investigar . Hoja de afeitar nueva, papel lente.
Lupas Safranina. Lugol, Fast Green, verde Janus, Rojo
Hoja de afeitar de metilo, azul de toluidina, hipoclorito de Sodio,
Reglas Etanol al 50% y agua destilada.
Placas Petri Microscopio
Cámara Fotográfica
PROCEDIMIENTO:

1. Realizar el Análisis Macroscópico, organoléptico (olor, sabor, color, textura) de los diferentes órganos
de la especie.

Tabla Nro. 1. Análisis macroscópico, características organolépticas de


Raíz, Tallo, Hoja, Flor, Fruto y Semilla

Carácter
Organoléptico
Órgano Color Olor Sabor Textura Otras
de la especie Observaciones
Raíz
Tallo
Hoja
Flor
Fruto
Semilla

2. Realizar el análisis microscópico de la especie vegetal a estudiar con ayuda de la histoquímica y


identificar los diferentes tipos de tejido presentes en la especie.

Tabla Nro. 2. Análisis microscópico, Citología e Histología de


Raíz, Tallo, Hoja, Flor, Fruto y Semilla

Órgano de la Tipo de Corte Histoquímica Observación


Especie (Técnica de Tinción)
vegetal
Raíz C.T. Fresco, Safranina y Lugol

Tallo C.T. Fresco, Safranina y verde Janus


C.L.
Fresco, Safranina y verde Janus
Hoja C.P. Fresco, Safranina y Lugol
C.T.
Fresco, Safranina y verde Janus
Flor C.L. Fresco, Safranina
C.P. Lugol

Fruto C.P. Fresco,


C.T. Safranina y Lugol

Semilla Raspado Fresco y Lugol


ACTIVIDAD DE INVESTIGACIÒN BIBLIOGRÀFICA

1. Desarrolle un Flujograma de las etapas para realizar un estudio Botánico en especies vegetales con
uso medicinal.

Referencias Bibliográficas

1. SORIA, R., CARHUAPOMA, M. 2005. Manual de prácticas de Botánica General y Sistemática. Lima
2. SOUKUP, J. 1971. Vocabulario de Nombres Vulgares de Plantas Peruanas, Ed. Salesiana, Lima.
3. STRASBURGER, E. NOLL, F. 2004. Tratado de Botánica. 35ª ed. Ediciones Omega. Barcelona.
4. THOMAS-DOMÉNECH, J.M. 1997. Atlas Temático de Botánica. Barcelona.
5. TOSCO U. 1993 Atlas de Botánica. Edit. Barcelona.
6. VALDIZAN H.; MALDONADO A. 1922. La Medicina Popular Peruana Imp. Torres Aguirre, Lima.
7. VALLA, J. 2011. Botánica. Morfología de las plantas superiores. Primera Edición. Editorial Hemisferio Sur.
8. VENTURA, O. 2010. Las Plantas Aromáticas y Medicinales. Primera Edición. Lima
9. VILLAR, U. 2004. Fitoterapia. Primera Edición. Editorial Acribia. Zaragoza
10. WEBERBAUER A. 1945. El Mundo Vegetal de los Andes Peruanos. Ministerio de Agricultura. Lima.
11. Flora de China: http://flora.huh.harvard.edu/china/
12. Journal of Natural Products: http://www.journalofnaturalproducts.com/
13. Nature Medicine: http://www.nature.com/nm/index.html
14. Phytochemistry: http://www.journals.elsevier.com/phytochemistry/
15. Raintree's Tropical Plant Database: http://www.rain-tree.com/plistbot.htm#.Ux9nDD95NPI
16. Revista peruana de biología: http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/rpb
17. Revistas de investigación UNMSM: http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/
OBSERVACIONES DE LA PRÁCTICA N° 4
CONTROL BOTÁNICO DE LA ESPECIE VEGETAL MEDICINAL
MORGOLOGÍA VEGETAL CITOLOGÍA e HISTOLOGÍA, (Raíz, Tallo, Hojas, Flor, Fruto y Semilla),

Dibuje o esquematice sus observaciones FECHA:......./.........../........


Muestra Muestra Muestra Muestra
Raíz Raíz Raíz Raíz
Observación Observación Observación Observación

Muestra Muestra Muestra Muestra


Tallo Tallo Tallo Tallo
Observación Observación Observación Observación

Muestra Muestra Muestra Muestra


hoja hoja hoja hoja
Observación Observación Observación Observación
Muestra Muestra Muestra Muestra
Flor Flor Flor Flor
Observación Observación Observación Observación

Muestra Muestra Muestra Muestra


Fruto Fruto Fruto Fruto
Observación Observación Observación Observación

Muestra Muestra Muestra Muestra


Semilla Semilla Semilla Semilla
Observación Observación Observación Observación
PRÁCTICA N° 5

CONTROL DE CALIDAD DE DROGAS VEGETALES.


ENSAYOS BOTÁNICOS, ANÁLISIS CUALITATIVO DE CONSTITUYENTES QUÍMICOS, TAMIZAJE
FITOQUÍMICO EN EXTRACTO ACUOSO. PREPARACIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO.

MARCO TEÓRICO:

Las plantas a nivel mundial ocupan un lugar importante en el comercio de medicamentos y en los
preparados fitoterapéuticos y por ende es necesario garantizar su control de calidad con aplicaciones de
técnicas modernas y el uso de patrones adecuados que den seguridad y eficacia al utilizarlas.
Las Farmacopeas describen métodos de ensayos generales para evaluar o valorar las drogas oficiales.

La Organización Mundial de la Salud (OMS) ha recomendado la realización de monografías y la


implantación de normas o especificaciones de calidad, basadas en la experiencia de cada país, para
aquellas drogas no incluidas en las Farmacopeas y que son ampliamente utilizadas en Medicina
Tradicional.
Para evaluar o valorar las drogas es necesario identificarlas y determinar su calidad y pureza, lo cual se
traduce en su valor intrínseco, o lo que es lo mismo, en la cantidad de principios activos presentes en
ella.
Los ensayos botánicos son importantes y se deben realizar al inicio de la investigación de la planta
medicinal para determinar su identificación taxonómica y tener la certeza de la planta a investigar.

Plantas medicinales Medicamento

Materia prima
(Fórmula magistral)

CONTROL

Seguridad y eficacia

Identidad Calidad

El Control de Drogas Vegetales involucra:

 Ensayos Botánicos:

Control de identidad:
 Determinación de sus características macroscópicas y microscópicas.
 Determinación cualitativa de sus principios activos (histoquímico).

 Control de calidad:
 Determinación cualitativa de sus principios activos.
 Cuantificación de sus principios activos.
 Otras determinaciones cuantitativas
 Determinación de su actividad farmacológica.

 Estos ensayos se realizan de acuerdo a las Farmacopeas.


COMPETENCIAS:
-Realizar el análisis botánico macroscópico de la especie vegetal a investigar,
reconociendo morfológicamente los diferentes órganos de la especie.
-Reconocer y caracterizar los principales órganos de la planta a nivel microscópico mediante cortes
histológicos (Raíz, Tallo, Hojas, Flor, Fruto y semilla) con ayuda de la histoquímica.
-Realizar el análisis organoléptico de los diferentes órganos de la especie vegetal.
-Preparar el extracto acuoso y etanólico de la especie a investigar para hacer los análisis cualitativos
correspondientes.

MATERIALES:

 Especie vegetal a investigar con los órganos de la especie a investigar.


 Lupas
 Hoja de afeitar
 Reglas
 Placas Petri
 Láminas y laminillas, gotero, estiletes
 Hoja de afeitar nueva, papel lente.
 Safranina. Lugol, Fast Green, verde Janus, Rojo de metilo, azul de toluidina, hipoclorito de Sodio,
Etanol al 50% y agua destilada.
 Microscopio
 Reactivos para el análisis cualitativo. (tamizaje fitoquimico)

PROCEDIMIENTO:

1. Realizar el Análisis macroscópico, organoléptico (olor, sabor, color, textura) de los diferentes órganos
de la especie.

Tabla Nro. 1. Análisis macroscópico, características organolépticas de


Raíz, Tallo, Hoja, Flor, Fruto y Semilla
Carácter
Organoléptico
Órgano Color Olor Sabor Textura Otras
de la especie Observaciones

Raíz
Tallo
Hoja
Flor
Fruto
Semilla

2. Hacer el Análisis microscópico de los diferentes órganos de la especie y de la droga vegetal.


3. Identificar los principios activos en los cortes histológicos mediante reacciones histoquímicas.
Tabla Nro. 2. Análisis microscópico, Citología e Histología de
Raíz, Tallo, Hoja, Flor, Fruto y Semilla

Órgano de la Tipo de Corte Histoquímica Presencia de Principios Activos


Especie (Técnica de Tinción) (- Negativo, + leve,
vegetal ++ moderado y +++ abundante)
Raíz C.T. Fresco, Safranina y Lugol

Tallo C.T. Fresco, Safranina y Tricloruro de


Hierro

Hoja C.P. Fresco, Safranina y Tricloruro de


Hierro

Fresco, Safranina y Tricloruro de


C.T. Hierro
Flor C.P. Fresco, Safranina

Fruto C.P. Fresco, Safranina y Lugol


C.T. Fresco, Safranina y Lugol

Semilla Raspado Fresco y Lugol

Preparación del extracto acuoso y etanólico de la especie a investigar para hacer los análisis cualitativos
correspondientes:

1. Preparar el extracto acuoso de 20 g de la especie medicinal en 100 mL de agua destilada y llevar


a decocción en BM por 15 minutos y realizar el tamizaje fitoquímico.

2. Preparar con 20 g de la especie medicinal el extracto etanólico en 100 mL (etanol de 96°) en


maceración por 7 días para realizar el tamizaje fitoquímico.

TAMIZAJE FITOQUÍMICO

El tamizaje fitoquímico o “Screening fitoquímico” es una de las etapas iniciales de la investigación


fitoquímica, que permite determinar cualitativamente los principales grupos de constituyentes químicos de
la planta, a partir del cual se puede orientar las extracciones y/o el fraccionamiento de los extractos
eligiendo los grupos de mayor interés para el investigador.

EXTRACTO ACUOSO:

CARBOHIDRATOS:
- Reacción de Molisch
Gotas de muestra problema + gotas de S. R. de Molisch “A” (alfa naftol 2% en alcohol), agitar + H2SO4
conc. por las paredes del tubo…anillo color violeta. (+) para carbohidratos (azúcares).

- Reacción de Antrona
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. de Antrona (antrona en H2SO4 conc. al 2%) …anillo verde.
(+) para carbohidratos (azúcares).

-Reacción de Fehling
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Fehling A + gotas S. R. Felhing B+ calor por 5-7 minutos en
baño maría…pp color rojo ladrillo. (+) para carbohidratos (azúcares reductores).
-Reacción de Benedict
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. de Benedict + calor por 5-7 minutos en baño maría…pp
color rojo ladrillo. (+) para carbohidratos (azúcares reductores).

-Reacción de Brown
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Hidróxido de sodio al 10% + calor hasta obtener coloración
amarilla, luego agregar 1 gota de + ácido pícrico 2%, se obtendrá una coloración parda por formación de
ácido picrámico. (+) para carbohidratos (azúcares reductores).

Compuestos fenólicos:
Gotas de muestra problema + gotas de FeCl3 (Sol. al 1% en agua o alcohol) …color verde o azul.
(+) presencia de compuestos fenólicos, taninos.

TANINOS:
-Reacción de Gelatina
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. gelatina…pp blanco (+) Taninos

-Reacción de Agua de Bromo


Gotas de muestra problema + gotas de agua de bromo…pp. taninos condensados y no pp taninos
hidrolizables. (+) Taninos

AMINOÁCIDOS Y PROTEINAS
-Reacción de Ninhidrina
Gotas de muestra problema + S.R. de Ninhidrina (Ninhidrina al 1% en etanol) + calor BM 10
minutos…color violáceo. (+) Para aminoácidos libres y amino grupos (calentar en algunos casos).

FLAVONOIDES
-Reacción de Shinoda
Gotas de muestra problema + S.R. Shinoda (Mg metálico + gotas de HClconc). … color rojo.
(+) presencia de flavonoides, chalconas, auronas; catequina e isoflavona no dan color.

ESTEROIDES Y/O TRITERPENOIDES


-Reacción de Lieberman-Burchard
Gotas de muestra problema + S.R. de Lieberman-Burchard (gotas de cloroformo + gotas de anhídrido
acético + gotas de H2SO4 conc)….color verde, azul, naranja, rojo. (+) presencia de esteroides y
triterpenoides.

QUINONAS
-Reacción de Borntrager
Gotas de muestra problema + S.R. Borntrager (gotas de hidróxido de sodio 5%)…color rojo. (+)
quinonas

ALCALOIDES
-Reacción de Dragendorff
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Dragendorff… pp naranja o rojo naranja (+) alcaloides
(medio ligeramente ácido).

-Reacción de Mayer Gotas de muestra problema + gotas de R. Mayer…pp. blanco.(+) alcaloides

-Reacción de Sonnenschein Gotas de muestra problema (+) alcaloides

-Reacción de Bertrand Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Bertrand… pp blanco (+) alcaloides

ANTOCIANINAS
-Reacción de Rosenheim Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Rosenheim (S.R. Yodo
Yodurada)…rojo oscuro. (+) antocianinas y flavonoides catéquicos.
GRUPO CARBONILO
-Reacción de Hidroxilamina
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. hidroxilamina…pp coloreado (+) presencia de grupo
carbonilo.

SAPONINAS
-Reacción para Saponinas
1 g de muestra problema + 10 mL de agua destilada. Agitar fuertemente por 1 minuto…producción de
espuma por 15 minutos de 0.5 a 1 cm (+) presencia de saponinas.

GLICÓSIDOS
.-Reacción de Vainillín sulfúrico
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Vainillín sulfúrico…color rojizo violáceo en anillo de
interfase. (+) Glicósidos.

**Los resultados de los tamizajes fitoquímicos nos dan una referencia de la composición química de
un planta que se está investigando (no es determinante), lo cual nos ayudará a profundizar en la
investigación al realizar el fraccionamiento y el aislamiento de los constituyentes químicos.

ACTIVIDAD DE INVESTIGACIÒN BIBLIOGRÀFICA

1. Que análisis según las Farmacopeas se realizan para el Control de Calidad de Productos
Fitoterapeúticos.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Libros:
1. Bruneton, J. Farmacognosia – Fitoquímica – Plantas Medicinales. 3ra. Ed. Acribia, Zaragoza,
España 2001.
2. Treasse, G., Evans, W. Pharmacognosy. Ed. BailliereTindall, Londres 1994.
3. Reynaud, Joël. La flora del farmacéutico. España, 2002.
4. Lock de Ugaz O. Colorantes naturales. 1ra Edición. Lima, 1997.
5. USP, Pharmacopeia, National Formulary (USP NF).XVII, XIX, XX, XXI, XXII, XXIII, XXIX, XXX.

Revistas
Journal of Natural Products – USA
Lloydia – Asoc. Americana de Farmacognosia de USA.
Pharmacognosy Titles – Londres – Inglaterra
Phytochemistry – Londres - Inglaterra
Biblioteca virtual EBSCO HOST ResearchDatabases(http://search.ebscohost.com/)
Journal of Analytical Chemistry
Chemical Biology & Drug Desig
RESULTADOS DE LA PRÁCTICA Nro. 5

A. Realice el análisis organoléptico:


Color:
Olor:
Sabor:

B. Complete el Cuadro según las Reacciones del Tamizaje fitoquímico

MUESTRA PROBLEMA REACCIÓN RESULTADOS TIPO DE AZUCAR

LEYENDA: (-) Nulo (-) poco (+) Leve (++) moderado (+++) abundante
PRÁCTICA N° 6

ANÁLISIS FARMACOGNÓSTICO Y TAMIZAJE FITOQUÍMICO PRELIMINAR EN EXTRACTOS


ESTANDARIZADOS (EXTRACTO ETANÓLICO)
MÉTODO DE SEPARACIÓN Y PURIFICACIÓN DE DROGAS VEGETALES
(CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA)

MARCO TEÓRICO:

EXTRACTO ESTANDARIZADO Y TAMIZAJE FITOQUÍMICO


Muchos principios activos presentan una estructura química perfectamente definida, mientras que otros,
al formar parte de mezclas complejas resulta difícil determinar cuál es el compuesto activo.

La Extracción obtiene porciones medicinalmente activas a partir de los tejidos de las plantas y animales,
de los componentes inertes de los mismos, mediante el uso de solventes selectivos, utilizando
procedimientos establecidos y correctamente estandarizados.

Para poder realizar el aislamiento de un principio natural en condiciones óptimas, se debe tener en
cuenta una serie de dificultades, inherentes a la propia planta o materia prima como al tipo de compuesto
a extraer.
Por esta razón la planta se somete a una serie de operaciones previas que facilitan y mejoran el
rendimiento de la extracción.
Existen una serie de métodos que han sido desarrollados y aplicados para una detección de los
diferentes constituyentes químicos en las plantas, basadas en la extracción de éstos con solventes
apropiados y en la aplicación de pruebas de coloración o precipitación llamado Tamizaje Fitoquímico.

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (CCF o TLC)


La cromatografía en capa fina (en inglés thinlayerchromatography o TLC) es una técnica analítica rápida
y sencilla que permite:
• Determinar el grado de pureza de un compuesto. Se puede determinar así, por ejemplo, la
efectividad de una etapa de purificación.
• Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa podrían ser idénticas. Si, por el
contrario, corren distinto entonces no son la misma sustancia.
• Realizar el seguimiento de una reacción. Es posible estudiar cómo desaparecen los reactivos y
cómo aparecen los productos finales o, lo que es lo mismo, saber cuándo la reacción ha
acabado.
• La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una lámina de plástico o aluminio que
previamente ha sido recubierta de una fina capa de adsorbente (fase estacionaria). Entonces, la
lámina se coloca en una cubeta cerrada que contiene uno o varios disolventes mezclado
(eluyente o fase móvil).A medida que la mezcla de disolventes asciende por capilaridad a través
del adsorbente, se produce un reparto diferencial de los productos presentes en la muestra entre
el disolvente y el adsorbente.

Fig. 1. Preparación de la Cromatografía en Capa Fina


COMPETENCIAS:
- Realizar el Tamizaje Fitoquímico en el extracto etanólico de la especie a investigar.
- Realizar el análisis cualitativo mediante método de separación: Cromatografía en Capa Fina.

MATERIALES:
 Extracto etanólico de la Especie vegetal a investigar.
 Reactivos para el análisis cualitativo (Tamizaje Fitoquímico)
 Reactivos para el análisis cualitativo (Cromatografía en Capa Fina)

PROCEDIMIENTO:

1. Prueba de solubilidad frente a diferentes solventes de menor a mayor polaridad.


 Filtrar el extracto el extracto etanólico del método de maceración de 5 a 7 días y colocar 1 mL del
extracto fluido o filtrado en cada tubo de vidrio, luego llevarlo a Baño María hasta sequedad.
 Agregar 1 mL del solvente de menor a mayor polaridad (agua destilada, etanol, metanol, acetato
de etilo, cloroformo, diclorometano y éter de petróleo) sobre cada tubo del extracto seco. Agitar
por 5 minutos hasta disolver el extracto y anotar los resultados.

2. Tamizaje Fitoquímico en el extracto etanólico.


Realizar el tamizaje fitoquímico haciendo uso de Reactivos de coloración y precipitación para
identificar la presencia de los principios bioactivos presentes en el extracto y anotar los resultados en
el Cuadro correspondiente.

3. Análisis cualitativo mediante método de separación: Cromatografía en Capa Fina.


- Proceder a colocar el sistema de solvente (acetato de etilo: metanol: agua (100:13.5:10) o
Cloroformo: metanol (3:1), colocar una tira de papel filtro para crear el sistema, tapar la cuba.
- Sembrar el extracto etanólico con ayuda de capilares en los cromatofolios de silica gel F254 en
capa de aluminio, luego colocarla placa en la cuba cromatográfica, observar en luz visible, luz
ultravioleta, anotar sus observaciones y luego proceder a revelar la placa con solución etanolica
de Cloruro férrico, vainillin sulfúrico o vapores de Iodo.
- Calcular el Rf: La distancia recorrida por el compuesto se mide desde el centro de la mancha
Rf = distancia recorrida por el compuesto (X) / distancia recorrida por el eluyente (Y)

Fig. Cálculo del Rf


TAMIZAJE FITOQUÍMICO

METABOLITO REACCIÓN PROCEDIMIENTO REACCIÓN POSITIVA


Molish X gotas de MP+ III gotas de Molish agitar+ III
Anillo violeta
(alfa naftol 2% en alcohol) gotas de H2SO4 CC
Antrona
X gotas de MP + III gotas de Antrona Coloración verde
CARBOHIDRATOS (antrona en H2SO4 cc al 2% )
Fehling
(A: CuSO4; B: tartrato mixto X gotas de MP + III gotas de Fehling A+ III
Coloración rojo ladrillo
de potasio y sodio gotas de Fehling B + calentar en B.M
(KNaC4H4O6·4H2O))
COMPUESTOS
FeCl3 X gotas de MP + III gotas de FeCl3 10 % Coloración verde o azul
FENÓLICOS
TANINOS Gelatina X gotas de MP + III gotas de gelatina Precipitado denso blanco
Chalconas, auronas,
isoflavanonas: No hay
coloración.
X gotas de MP + 1-2 virutas de Mg metálico +
FLAVONOIDES Shinoda Isoflavanonas: Amarillo rojizo.
III gotas de HCl cc
Flavanonoles: Rojo a magenta.
Flavonas y flavonoles: Amarillo
a rojo
ANTOCIANINAS Y
Rosenheim
FLAVONOIDES X gotas de MP + III gotas de Rosenheim Coloraciónrojo oscuro
(Sol. Yodo Yodurada)
CATÉQUICOS
AMINOÁCIDOS
X gotas de MP + III gotas de ninhidrina +
LIBRES Y GRUPOS Ninhidrina(0.1% en etanol) Coloración violácea
calentar en B.M 10 min.
AMINO
Dragendorff X gotas de MP + evaporar el solvente B.M + V
Precipitadonaranja
(yoduro potásico- bismútico ) gotas de HCl 10%+ III gotas de Dragendorff
Mayer (yoduro potásico X gotas de MP + evaporar el solvente B.M + V
Precipitado blanco
mercúrico) gotas de HCl 10%+ + III gotas de Mayer
ALCALOIDES
Bertrand (ácido silíco- X gotas de MP + evaporar el solvente B.M + V Precipitado blanco
túngstico) gotas de HCl 10%+ + III gotas de Bertrand
Sonnenschein X gotas de MP + evaporar el solvente B.M + V Precipitado amarillo-verdoso
(ácido fosfomolíbdico) gotas de HCl 10%++ III gotas de Sonnenschein
NAFTAQUINONAS,
Borntrager
ANTRAQUINONAS X gotas de MP + III gotas de Borntrager Coloraciónroja
(NaOH 5%)
Y ANTRANONAS
X gotas de MP + llevar a sequedad en B.M +
TRITERPENOIDES X gotas de cloroformo+ III gotas de anhídrido Esteroides: verde-azul
Lieberman-Burchard
Y ESTEROIDES acético+ H2SO4 cc en zona (por las paredes de Triterpenoides: rojo-naranja
tubo) sin agitar.
1 mL de MP + 5 mL de agua destilada + agitar Formación de 0.5 a 1 cm de
SAPONINAS Generación de espuma
fuertemente por 1 min. espuma estable por 15 min.
X gotas de MP + V gotas de ácido pícrico 1 %
GLICÓSIDOS Baljet Coloración anaranjada
+ V gotas de NaOH al 5 %.
X gotas de MP + V gotas de denitroprusiato
LACTONAS Legal Coloración rojo oscuro
de sodio 0.5% + V gotas de KOH 2N.
X gotas de MP + papel humedecido con
NH4OH cc ó
CUMARINAS NH4OH cc ó NaOH 10% en boca de tubo + Fluorescencia celeste
NaOH 10%
calentar por 5 min a
ACTIVIDAD DE INVESTIGACIÓN BIBLIOGRÁFICA

1. Que reacciones químicas se dan en el Tamizaje Fitoquímico.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Villar del Fresno, A. Farmacognosia General. Ed. Síntesis, SA. Madrid, España 1999.
2. Treasse, G., Evans, W. Pharmacognosy. Ed. BailliereTindall, Londres 1994.
3. Gattuso, Gattuso. Manual de Procedimientos para el Análisis de Drogas en Polvo. 1ra ed. Argentina:
Editorial Universidad Nacional de Rosario Urquiza.1999.
4. Bruneton, J. Farmacognosia, Fitoquímica, Plantas medicinales 2ª Ed. Acribia, Zaragoza, España.
2001.
5. Kuklinski, C. Farmacognosia, Estudio de las drogas y sustancias medicamentosas de origen natural.
Ed. Omega, Barcelona, España 2003.
6. Sharapin N. Fundamentos de Tecnología de Productos Fitoterapéuticos Santa fe Bogota Colombia
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7. Miranda M. Métodos de Análisis de Drogas y Extractos, Habana Cuba 2002.
8. Lock de Ugaz. Investigación Fitoquímica, Métodos en el estudio de productos naturales [en línea].
Perú: Editorial Pontificia Universidad Católica del Perú; 1994. [Fecha de acceso 27 de junio de 2013].
URL disponible en:
http://books.google.com.pe/books?id=N36g2QOccXkC&pg=PA287&dq=prueba+con+dragendorff&hl=
es&sa=X&ei=d7bNUazRHsjX4AS9oYBQ&ved=0CEAQ6AEwBA#v=onepage&q=prueba%20con%20d
ragendorff&f=false.
PROTOCOLO
RESULTADOS DE LA PRÁCTICA Nro. 6

 Prueba de solubilidad

Solventes Extracto seco (mg)

Agua destilada
Etanol
Metanol
n-butanol
Acetato de etilo
Diclorometano
Cloroformo
Eter de petróleo
LEYENDA: (-) Insoluble (+) ligeramente soluble (+++) Soluble (+++) Muy soluble

 Tamizaje fitoquímico

CAMBIOS RESULTADOS
METABOLITO REACCIÓN
OBSERVADOS
CARBOHIDRATOS
Fehling
O AZUCARES

COMPUESTOS FeCl3
FENÓLICOS

TANINOS Gelatina

FLAVONOIDES Shinoda

AMINOÁCIDOS
LIBRES Y GRUPOS Ninhidrina
AMINO

Dragendorff

ALCALOIDES Mayer

Bertrand

NAFTAQUINONAS,
ANTRAQUINONAS Y Borntrager
ANTRANONAS
TRITERPENOIDES Y
Lieberman-Burchard
ESTEROIDES

SAPONINAS Generación de espuma

LEYENDA: (-) Nulo (-) poco (+) Leve (++) moderado (+++) abundante
 Huella Cromatográfica

Preparación de muestra: Pesar 0.1 g de extracto seco y solubilizar en 5 mL de solvente (o


sembrar el filtrado del extracto).

Fase estacionaria: Sílica gel

Fase móvil:

Detección
O Revelador:

Esquema de resultado

Calculo de Rf

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
PRÁCTICA N° 7

EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS SIMPLES Y OLIGÓSIDOS


A PARTIR DE DROGAS NATURALES.
REACCIONES GENERALES Y PARTICULARES DE CARBOHIDRATOS

MARCO TEÓRICO:

Glúcidos o azúcares, son compuestos orgánicos constituidos por carbono, hidrógeno y oxígeno.
Constituyen la clase de compuestos que se encuentran en las plantas en mayor cantidad. Son
aldehídos o cetonas polihidroxilados; bajo peso molecular, tienen muchas propiedades en común:
son alifáticos, ópticamente activos, de sabor dulce, muy solubles en agua. Difíciles de cristalizar aún
cuando estén puros. Son importantes en el metabolismo vegetal, son fuente de energía en forma de
almidones, sirven para el transporte de energía en forma de sacarosa, intervienen en la formación de
paredes celulares (celulosa) y destacan en el aspecto ecológico por medio de la relación planta –
animal.
Se pueden detectar en cantidades muy pequeñas, por medio de reactivos cromógenos. Detectados
por cromatografía CCF, usando reactivos que contienen fenoles o aminas, como el resorcinol con
ácido sulfúrico o el ftalato de anilina.La CCF y CP, son sustituidos de preferencia por otras técnicas
de separación, la CC de baja presión, HPLC, cromatografía de gases o electroforesis.

Los azúcares no reductores no funcionan con estos reactivos y generalmente se detectan por su
rápida oxidación con per yodato o tetra acetato de plomo.

MONOSACÁRIDOS
osas simples
OLIGOSACÁRIDOS
menos de 10 osas

HOLÓSIDOS
HOMOGÉNEOS
varias osas osas iguales
POLISACÁRIDOS
más de 10 osas

HETEROGÉNEOS
osas diferentes

HETERÓSIDOS
osa + aglicón

Clasificación de Carbohidratos

DROGAS QUE CONTIENEN CARBOHIDRATOS


-Disacáridos: Sacarosa, lactosa.
-Polisacáridos: Almidones, dextranos, celulosa, pectinas.
-Gomas: Goma arábica, goma tragacanto, goma guar.
-Mucílagos: Agar, carragaen, alginatos, algas marinas de la costa patagónica.
-Monosacáridos y derivados: Glucosa, fructosa, manitol, sorbitol, xilitol, lactulosa.
COMPETENCIAS: Capacitar al estudiante para que adquiera habilidad de realizar el análisis cualitativo y
el Tamizaje Fitoquímico en el extracto etanólico de la especie a investigar y en drogas vegetales para
determinar la presencia de los Carbohidratos. Identificar y diferenciar los carbohidratos.

MATERIALES y REACTIVOS:
 Extracto etanólico de la Especie vegetal a investigar.
 Reactivos para el análisis cualitativo (Tamizaje Fitoquímico:Molish, Antrona, Fehling, Benedict,
Tollens, Selivanoff, NaOH, Fenilhidrazina, Yodo 2.5%, H2SO4 cc, KOH 5%, Etanol absoluto,
Ba(OH)2 10%, HCl diluido, Acetato de plomo neutro y básico, lugol)
 Otros materiales necesarios (Tubos de ensayo, gradillas, embudo, cocinilla, beackers grande y
chicos, baguetas, goteros, pipetas, papel filtro, capsula de porcelana, mechero y balanza)
 Miel de abeja, Azúcar, Papa, Algodón, Manzana, Linaza

PROCEDIMIENTO:

4. Preparación de las muestras Problema

2.1 Especie a Investigar: Filtrar el extracto hidroalcohólico al 10 o 20% P/V macerado de 7 días de
hojas, tallos o semillas de la especie a investigar. Si es muy concentrado diluir 1:10 ml con el solvente
donde es soluble el extracto.

2.2 Las Muestras Problemas conteniendo los diferentes tipos de Carbohidratos


PROCEDIMIENTO
Muestra Problema
Azúcar Disolver 2 g en 20 mL de agua destilada

Miel de abeja Disolver 2 g en 20 mL de agua destilada

Papa (ALMIDON) Rallar el tubérculo en un beacker conteniendo agua, luego exprimir a través de la
gasa, recogiendo el líquido en un beacker, dejar sedimentar y lavar por decantación
varias veces. Utilizar la solución de almidón de papa para las reacciones.

Algodón (CELULOSA) Sin tratamiento

Manzana (PECTINAS) Pesar 2 g de manzana trozada o rallada, secar en estufa x 15 min a 150 C, luego lavar
la muestra con 10 mL alcohol 3 veces, Al residuo agregar 10 mL HCl al 10% x 15
minutos. Filtrar y trabajar con la solución.

Linaza (MUCÍLAGOS) Pesar 10 gramos de semillas de linaza, agregar 50 mL de agua destilada y someter a
ebullición x 15 minutos, decantar y trabajar con los mucílagos de linaza.

5. Tamizaje Fitoquímico en el extracto etanólico.


 Realizar el tamizaje fitoquímico haciendo uso de Reactivos de coloración y precipitación para
identificar la presencia de CARBOHIDRATOS presentes en el extracto y anotar los resultados en
el Cuadro correspondiente.
 Realizar el tamizaje Fitoquímico con los extractos acuosos de las Muestras Problemas:
Miel de abeja, Azúcar, Almidón de Papa, Algodón, Pectinas de Manzana y mucílagos de Linaza.
TAMIZAJE FITOQUÍMICO

Realizar las siguientes reacciones según el tipo de Muestra Problema

REACCIÓN PROCEDIMIENTO REACCIÓN POSITIVA


REACCIONES GENERALES
X gotas de MP+ III gotas de Molish Anillo violeta
Molish
agitar+ III gotas de H2SO4 CC
(alfa naftol 2% en alcohol)
Antrona
X gotas de MP + III gotas de Antrona Coloración verde - azulada
(antrona en H2SO4 cc al 2% )

REACCIÓN DE AZUCARES
REDUCTORES
Fehling X gotas de MP + X gotas de solución de Precipitado rojo ladrillo
(A: CuSO4; B: tartrato mixto de potasio Fehling+ calentar en B.M
y sodio (KNaC4H4O6·4H2O)

Benedict
(Citrato de Na + CuSO4 + X gotas de MP + X gotas de Benedict+ Precipitado amarillo-verdoso
NaCO3) calentar en B.M

Tollens X gotas de MP + X gotas de Tollens+


Formación de espejo de plata
(AgNO3 + NH4OH) calentar en B.M
REACCIÓN PROCEDIMIENTO REACCIÓN POSITIVA

REACCIONES DE
ALDOSAS Y CETOSAS Precipitado rojo (CETOSA)
X gotas de MP + III gotas de Selivanoff
Selivanoff
+ calentar en B.M
(Resorcina + HCl)
REACCIONES DE
SACAROSA X gotas de MP + X gotas de solución
Herail Herail Color violeta -azulada
(1 ml Nitrato cobaltoso + 1 ml
NaOH 50%)
X gotas de MP + X gotas de Reactivo+
Pozzi-scott
H2SO4 cc en zona Formación anillo azul
(Molibdato de Amonio 15%)
X gotas de MP + X gotas NaOH 10% +
Pelouze
calentar Color amarillo
(NaOH 10%)

POLISACÁRIDOS
HOMOGÉNEOS Complejo azul desaparece por
X gotas de MP (ALMIDON DE PAPA)
Solución de yodo 2.5% calor y reaparece por
+ V gotas de Yodo 2.5%
enfriamiento.
Fibras de ALGODÓN + V gotas lugol,
Yodo en ácido sulfúrico Observar color azul
secar + gotas de H2SO4 cc
Fibras de ALGODÓN + V gotas de
Solubilidad en H2SO4 Soluble
H2SO4 cc
Fibras de ALGODÓN + V gotas de Insoluble
Solubilidad en KOH 5%
KOH 5%
POLISACÁRIDOS
HETEROGÉNEOS
Precipitado amarillo gelatinoso
NaOH 3N X gotas de MP (PECTINAS) + X gotas
NaOH 3N

X gotas de MP (PECTINAS) + 2.5 mL


Formación de gel de alcohol Formación de gel incoloro

X gotas de MP (MUCÍLAGOS) + V
Acetato de Plomo básico gotas de reactivo Precipitado gelatinoso blanco

X gotas de MP (MUCÍLAGOS) + V
Presencia de almidones (azul) y
Lugol gotas de reactivo
dextrinas (rojo)

ACTIVIDAD DE INVESTIGACIÓN BIBLIOGRÁFICA

1. Explique la Reacción química para la determinación de Carbohidratos mediante el Tamizaje


Fitoquímico Mencione 4

2. Mediante una Tabla mencione 8 especies medicinales endémicas o nativas del Perù, que
contengan Carbohidratos

Nombre Común Nombre Familia Fotografía Usos y Tipo de


Científico Carbohidrato presentes.
1.
2
….

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Bruneton, J. Farmacognosia, Fitoquímica, Plantas medicinales 2ª Ed. Acribia, Zaragoza,


España. 2001
2. Gattuso, G. Manual de Procedimientos para el Análisis de Drogas en Polvo. 1ra ed. Argentina:
Editorial Universidad Nacional de Rosario Urquiza.1999.
3. Kuklinski, C. Farmacognosia, Estudio de las drogas y sustancias medicamentosas de origen
natural. Ed. Omega, Barcelona, España 2003
4. Miranda M. Métodos de Análisis de Drogas y Extractos, Habana Cuba 2002.
5. Obregón, L. Maca. Planta medicinal y nutritiva del Perú. Lima 1988.
6. Sharapin N. Fundamentos de Tecnología de Productos Fitoterapéuticos Santa fe Bogota
Colombia 2000.
7. Treasse, G., Evans, W. Pharmacognosy. Ed. BailliereTindall, Londres 1994.
8. Villar del Fresno, A. Farmacognosia General. Ed. Síntesis, SA. Madrid, España 1999.
9. Wallis, T. Manual de Farmacognosia. Ed. Ceosa, México. 1991.
10. Libro rojo de plantas endémicas
http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/biologia/v13n2/contenido.htm
RESULTADOS DE LA PRÁCTICA Nro. 7

A. Realice el análisis organoléptico:


Color:
Olor:
Sabor:

B. Complete el Cuadro según las Reacciones del Tamizaje fitoquímico

MUESTRA PROBLEMA REACCIÓN RESULTADOS TIPO DE AZUCAR

LEYENDA: (-) Nulo (-) poco (+) Leve (++) moderado (+++) abundante

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
PRÁCTICA N° 8

RECONOCIMIENTO DE COMPUESTOS FENÓLICOS SIMPLES Y


COMPUESTOS ANTRAQUINÓNICOS.

MARCO TEÓRICO:

Compuestos fenólicos simples


Los fenoles simples consisten en un anillo fenólico sustituido por gruposhidroxilos,aldehídicos o
carboxílicos, son relativamente raros en plantas. El fenol, catecol (fenol divalente),resorcinol (fenol
divalente), floroglucinol (fenol trihidroxilado) y pirogalol han sido reportados raras veces. 1 En contraste, la
hidroquinona se distribuye en muchas familias y se halla como arbutina (hidroquinona-Oβ-glucósido).
Drogas con Compuestos fenólicos
Sauce Uva ursi
(Salix alba) (Arctostaphylos uva ursi)
Árbol caducifolio Arbusto de hojas perennes, produce bayas rojas.

Salicina
Droga : hojas Arbutina
Droga : hojas

Compuestos antraquinónicos
Poseen una molécula de azúcar unida a un derivado del antraceno. El constituyente químico
representativo es la antraquinona o 9,10-dioxoantraceno. Se encuentra en especies como el ruibarbo,
sen, cáscara sagrada, etc. Las antraquinonasse utilizan para la fabricación de colorantes, plaguicidas y
aditivos para procesos químicos de la industria del papel y pulpa. Los extractos de plantas que contienen
antraquinonas, son utilizados para cosméticos, alimentos y productos farmacéuticos debido a sus
propiedades terapéuticas y farmacológicas.
Drogas con Compuestos antraquinónicos
Ruibarbo Sen Cáscara Sagrada
(Rheumpalmatum) (Cassia angustifolia) (Rhamnuspurshiana)
Planta herbácea perenne con Arbusto Árbol de 6-12 m, con ramas
hojas basales, palmeado-partidas redondas y pubescentes.

. Senósido A,B,C,D y aloe-


Emodina emodina Aloínas A y B,
Droga: raiz Droga : hojas Droga: corteza
Sábila
(Aloe vera)
Planta de forma arrosetada, hojas grandes, carnosas, anchas, sésiles, con una fuerte espina en el ápice
y espinas más pequeñas a lo largo de los márgenes Las hojas de color verde pálido con manchas
blancas en la superficie, estriadas; a veces el verde pálido cambia a rojizo, exhalan olor característico.
En el parénquima se forma un jugo viscoso y espeso de sabor amargo, denominado acíbar o aloe, cuyo
principio activo es la aloína que posee propiedades terapéuticas

Aloínas
Aloe-emodina
Droga: hojas

COMPETENCIAS: Capacitar al estudiante para que adquiera habilidad de realizar el análisis cualitativo y
el Tamizaje Fitoquímico en drogas vegetales para determinar la presencia decompuestos fenólicos y
antraquinónicos

MATERIALES y REACTIVOS:
 Extracto etanólico de la Especie vegetal a investigar.
 Reactivos para el análisis cualitativo (Tamizaje Fitoquímico)
 Otros materiales necesarios (Tubos de ensayo, gradillas, embudo, morteros, cocinilla, beackers
grande y chicos, Baguetas, goteros, pipetas, papel filtro, capsula de porcelana, mechero y
balanza)

PARTE EXPERIMENTAL
I. Análisis cualitativo

Fenoles simples
 Sauce (Salix alba)
OBTENCIÓN DE SALICINA
Extracción: Pesar 1 g de corteza pulverizada, agregar 20 mL de agua y someter a decocción por 30
min. Filtrar y concentrar.
IDENTIFICACIÓN
Reacción Procedimiento Resultado
Ácido sulfúrico 5 mg de salicina + V gotas de H2SO4 Coloración roja
FeCl3 5 mLde extracto + V gotas de FeCl3 Coloración azul-verde
Rx. Fehling 5 mL de extracto + V gotas de Fehling A y B+ Precipitado rojo ladrillo
calor
 Uva ursi (Arctostaphylos uva ursi)

OBTENCIÓN DE ARBUTINA
Extracción: Pesar 1 g de corteza pulverizada, agregar 10 mL de agua y someter a decocción por 30
min. Filtrar y concentrar.
IDENTIFICACIÓN
Reacción Procedimiento Resultado
Microsublimación Colocar en cápsula, 5 mg de droga en polvo.
Cubrir con luna de reloj y calentar hasta
desprendimiento gaseoso.
Al residuo enfriado agregar:
II gotas de NH4OH Coloración pardo rojiza

FeCl3 0.5 mLde extracto + V gotas de FeCl3 Coloración azul-verde


NH4OH conc. 0.5 mLde extracto + V gotas de NH4OH conc. Coloración pardo rojiza
Vainillín clorhídrico 0.5 mLde extracto + V gotas de Vainillín Coloración azul
clorhídrico
Taninos 0.5 mLde extracto + V gotas de gelatina Precipitado blanco

Compuestos antraquinónicos
 Identificación
cáscara
Procedimiento ruibarbo sen sábila
sagrada
Microsublimación Coloración Coloración Coloración -
Colocar en cápsula, 5 mg de droga roja intensa roja pardo naranja
en polvo. Cubrir con luna de reloj y
calentar hasta desprendimiento
gaseoso. Al residuo enfriado agregar
II gotas de NH4OH.

R. Borntrager Fase polar: Coloración Fase polar Fase polar:


1g MP+ 10 mL agua+III gotas de Rojo rosada rojo naranja rojo cereza
NaOH. Filtrar + X gotas de HClconc. cereza rojiza Fase
Agregar 2 mL de cloroformo y Fase apolar:
separar la fase cloroformo y agregar apolar: amarillo
X gotas de NH4OH cc. Agitar amarillo

Sol. alcohólica amoniacal - Coloración - -


0.5 g de MP+ 5 mL de etanol+ roja pardo
decocción por 5 min.+V gotas
NH4OH cc.

R. Schonteten - - - Fluorescen
mL del ensayo anterior (Sol. cia a luz
alcohólica amoniacal )+ borato de UV
sodio saturado.

R. Klunge - - - Coloración
0.5 g MP+ 5 mL de agua + BM a 40° rojo
C x 15 min.+ mg de talco. Filtrar.Al grosella
filtrado añadir II gotas de CuSO4 + II
gotas de NaCl + 5 mL etanol.
Iridoides

Muestras Problemas:
* Filtrado del extracto de la especie a investigar 10-20% P/V
* Macerado alcohólico de Plantagomajor L. (llantén).- pesar 10 g de hojas de llantén. Colocar en un
matraz y agregar 50 mL de alcohol de 70°. Macerar 48 h.
* Decocción por 10 minutos (Extracto acuoso) de la droga vegetal con Iridoides.

Identificación de iridoides Procedimiento Resultado


Reacción con vainillin Sembrar en papel filtro 40 veces, previo Coloración grosella
clorhídrico secado entre cada siembra. Secar y
agregar IV gotas de reactivo
Vainillínclorhídrico (secar entre gota y
gota)

CUESTIONARIO

1. Describa el fundamento de las reacciones de coloración para la identificación de compuestos


fenólicos y antraquinónicos.

2. Mediante una Tabla mencione 10 especies nativas del Perú, que presenten compuestos fenólicos
y antraquinónicos.

Nombre Común Nombre Familia Fotografía Usos y Tipo de


Científico compuestos fenólicos y
antraquinónicos.
1.
2….

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Kuklinski, C., Farmacognosia., Ed. Omega SA, Barcelona, España (2000)


2. Bruneton, J. Farmacognosia – Fitoquímica – Plantas Medicinales. 3ra. Ed. Acribia, Zaragoza,
España (2001)
3. Gibaja Oviedo S. Pigmentos naturales. Quinónicos. Lima (1998).
4. Villar Del Fresno, A. Farmacognosia general. Madrid (2010)
PROTOCOLO Nº 8

COMPUESTOS FENÓLICOS SIMPLES Y ANTRAQUINÓNICOS

FECHA……………………………….

MESA DE TRABAJO …………………………….. MUESTRA:………………………………

RESULTADOS

I. ANÁLISIS CUALITATIVO COMPUESTOS FENÓLICOS SIMPLES Y ANTRAQUINÓNICOS

Nro. Reacción Muestra Problema 1: Muestra Problema 2: Observaciones

1 Ácido sulfúrico

2 FeCl3

3 NH4OH conc.

4 Vainillín clorhídrico

5 Rx. Fehling

6 Microsublimación

7 R. Borntrager

8 Alcohólica
amoniacal
9 R. Schonteten

10 R. Klunge

LEYENDA: (-) Nulo (-) poco (+) Leve (++) moderado (+++) abundante

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
PRÁCTICA N° 9

RECONOCIMIENTO DE FLAVONOIDES Y TANINOS

MARCO TEÓRICO:

FLAVONOIDES

Los flavonoides son compuestos polifenólicos ubicuos en


la naturaleza, se clasifican, de acuerdo a su estructura
química, en: flavonoles, flavonas, flavanonas,
isoflavonas, catequinas, antocianidinas y chalconas. Más
de 4 000 flavonoides han sido identificados muchos de
ellos en frutas y verduras. Los flavonoides han
despertado un considerable interés por sus potenciales
efectos beneficiosos sobre la salud. Se ha reportado
actividad antiviral, antialérgica, antiplaquetaria,
antitumoral antiinflamatoria, y antioxidantes.
Fig.1 Estructura general de flavonoides

Los flavonoides pertenecen a un grupo de compuestos naturales dispuestos en un sistema C6-C3-C6, en


el que dos anillos aromáticos A y B están unidos por una unidad de tres carbonos que pueden o no
formar un tercer anillo C. Los flavonoides pueden hallarse como aglicón o bajo la forma de glicósidos con
una o tres unidades de azúcar, generalmente en el carbono 3 ó 7, siendo los azúcares más comunes:
glucosa, galactosa, ramnosa, xilosa y arabinosa.
Estos compuestos poseen las siguientes características: solubilidad en agua y etanol, carácter fenólico
e intensa absorción en la región UV-Vis del espectro por la presencia de sistemas aromáticos
conjugados.

Extracción de flavonoides
Los flavonoides (en particular heterósidos) pueden ser degradados por la acción de enzimas, siendo
necesario utilizar muestras secas, liofilizadas o congeladas. Para la extracción, el disolvente se elige en
función del tipo de flavonoide a extraer. La polaridad es un factor muy importante. Flavonoides de baja
polaridad (por ejemplo, las isoflavonas, flavanonas, flavonas metiladas, y flavonoles) se extraen con
cloroformo, diclorometano, éter dietílico, o acetato de etilo, mientras que los heterósidos flavonoides y
agliconas más polares se extraen con alcoholes o mezclas de alcohol-agua. En el caso de los
heterósidos la presencia de la porción de azúcar incrementa la solubilidad en agua y alcohol, por lo que
soluciones hidroalcohólicas son las más adecuadas.

La mayor parte de las extracciones de especies que contiene flavonoides se realizan por extracción
directa con solventes y también pueden ser extraídos en Soxhlet, primero con hexano, para eliminar
lípidos seguido de acetato de etilo o etanol para extraer compuestos fenólicos, sin embargo este método
no es adecuado para compuestos sensibles al calor.

TANINOS

Los taninos son compuestos polifenólicos de peso molecular alto que se encuentran en las plantas
superiores, incluyendo muchas plantas utilizadas como alimentos, el peso molecular oscila entre 500 y
3 000, de estructura amorfa, sabor astringente y débilmente ácidos. La mayoría de ellos solubles en
agua; pueden ser amarillos, rojos o marrones, y se localizan en el citoplasma o en las vacuolas de las
células; conformados principalmente por restos de ácido gálico unidos a glucosa a través de enlaces
glucosídicos.

Los taninos ingeridos en la dieta pueden afectar la asimilación de proteínas y hierro, al formar complejos
insolubles. En las especies vegetales los taninos actúan como defensas químicas que reducen el daño
por insectos y mamíferos. En medicina, especialmente en Asia (Japón y China), los extractos de especies
vegetales que contienen taninos se utilizan como astringentes, diuréticos, antiinflamatorios y antisépticos.
Por su capacidad de precipitar metales pesados y alcaloides (excepto morfina), los taninos se pueden
utilizar como antídotos de estas sustancias. Los taninos se utilizan en la industria de colorantes como
colorantes catiónicos (tanino), y en la producción de tintas (galato de hierro). En la industria alimentaria
los taninos se utilizan para clarificar el vino, la cerveza y jugos de frutas.

Actualmente, los taninos han atraído el interés científico, debido a la mayor incidencia de enfermedades
como el VIH y varios tipos de cáncer. La búsqueda de nuevos compuestos prometedores para el
desarrollo de nuevos productos farmacéuticos es cada vez más importante, especialmente por la acción
biológica que se les atribuye.

COMPETENCIAS
 Conoce la importancia de flavonoides y Taninos en Farmacognosia
 Identifica flavonoides y Taninos cualitativamente
 Cuantificar taninos en muestras de tara (Caesalpinia spinosa)

METODOLOGÍA
 Cromatografía en capa fina
 Método volumétrico : Yodometría
 Reacciones de precipitación
 Reacciones de coloración

MATERIAL Y EQUIPOS
 Material de vidrio
 Reactivos de coloración
 Material de vidrio
 Estufa
 Mortero pilón

I. Análisis cualitativo de FLANONOIDES

PARTE EXPERIMENTAL
I. Análisis cualitativo de FLAVONOIDES
Heterósidos flavonoides DROGA REACCIÓN PROCEDIMIENTO REACCIÓN
POSITIVA
Hesperidósido Naranja H2SO4 cc mg de hesperidina+ gotas Coloración
Citrus sinensis de H2SO4 cc naranja
Fam. HCl cc mg de hesperidina+ gotas Precipitado
Rutaceae de HCl cc blanco
HNO3 mg de hesperidina+ gotas Coloración
de HNO3 pardo rojizo
NaOH 30% mg de hesperidina+ gotas Coloración
de NaOH 30% amarillo naranja
Rutinósido Ruda Wilson 0.5mLWilson A + Coloración
Ruta (Ác.borico+citrato 0.5mLWilson B+0.5mL de amarilla.
graveolens de sodio) extracto (30 min. en Observación en
Fam. oscuridad) UV:
Rutaceae Fluorescencia
verde
Shinoda 0.5mL de extracto+ virutas Coloración
de Mg +gotas HCl cc rosada
FeCl3 0.5mL de extracto +gotas Coloración
FeCl3 verde

Quercetinósido Cebolla Pb(CH3COO)2 0.5mL de extracto +gotas Precipitado


Allium cepa L. Pb(CH3COO)2 color amarillo
Familia
Liliaceae FeCl3 0.5mL de extracto +gotas Coloración
FeCl3 verde en frio,
rojo oscuro en
caliente

Antocianósido Maíz morado H2SO4 cc 0.5mL de extracto + gotas Coloración roja


Zea Mays L H2SO4 cc
Fam. Poaceae

NaOH 30% 0.5mL de extracto + gotas Coloración


NaOH 30% verde

Preparación de extractos de Flavonoides y Taninos

Pesar 5 g de droga vegetal, agregar 50 mL de agua destilada y llevar a decocción x 10 minutos, filtrar.
Con el extracto de la droga vegetal que presenta Flavonoides según bibliografía realizar el Análisis
Cualitativo de Flavonoides y con el extracto de Tara realizar el análisis cualitativo de Taninos.

II. Análisis Cualitativo de TANINOS

a) Reacción de diferenciación
Reactivo Procedimiento Reacción positiva
FeCl3 10% 0.5 ml MP + gotas deFeCl3 10% T. hidrolizables: azul
T. condensados: verde

b) Reacciones de identificación
REACTIVO PROCEDIMIENTO REACCIÓN POSITIVA
FeCl3 0.5 mL MP+ gotas de FeCl3 coloración azul/verde
K2Cr2O7 5% 0.5 mL MP+ gotas de K2Cr2O7 5% pp. pardo
Pb(CH3COO)2 0.5 mL MP+ gotas de Pb(CH3COO)2 pp. blanco lechoso
Agua de cal 0.5 mL MP+ gotas de agua de cal pp. amarillo pálido
KCN 5% 0.5 mL MP+ gotas de KCN 5% pp. amarillo
Hipoclorito de sodio 0.5 mL MP+ gotas de hipoclorito de sodio coloración naranja
K4[Fe(CN)6] + NH4OH 0.5 mL MP+ gotas de K4[Fe(CN)6] + gotas de NH4OH coloración rojiza
Gelatina 0.5 mL MP+ gotas de gelatina pp. blanco
KMnO4 0.5 mL MP+ gotas de KMnO4 pp. pardo
Alcaloide 0.5 mL MP+ gotas de alcaloide pp. lechoso blanco
III. Análisis cuantitativo

Pesar 1 g de tara, llevar a decocción con 20 mL de agua destilada. Filtrar, y completar el


volumen de 100 mL en fiola y medir 10 mL para la titulación.

 Preparación de patrón  Preparación del blanco


GASTO: “A” GASTO: “B”

Yodo 2.5% Yodo 2.5%

10 mL solución de ácido 2mL de NaHCO3


tánico 1% + 2mL de + c.s.p para 20
NaHCO3+ c.s.p para 20 mL mL con agua
con agua destilada destilada

 Preparación de la muestra
GASTO: “C”

Yodo 2.5%

10 mL solución nuestra
problema+ 2mL de
NaHCO3+c.s.p para 20 mL con
agua destilada

Nota: El punto final de la valoración se determina con tiras de papel almidonado (indicador externo),
vira a violeta intenso en el punto de equivalencia.

a) Cálculos

PATRÓN =GASTO: “A”


BLANCO =GASTO: “B”
MUESTRA =GASTO: “C”

A-B 0.1 g
C-B X

X= contenido de taninos (g) en 10 mL de muestra problema

Nota: expresar los resultados en porcentaje de taninos en la muestra.

CUESTIONARIO

1. Explique el fundamento de la valoración de taninos realizada en práctica.


2. Mediante una Tabla mencione 10 especies nativas del Perú, que presenten flavonoides y
Taninos
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Khanbabaee K, Van Ree T. Tannins: Classification and Definition. Nat. Prod. Rep., 2001; 18. p.
641–649. Disponible en: http://siba.unipv.it/farmacia/art/Marrubini/Nat%20Prod%20Rep%202001.pdf
[citado 22 de marzo 2013]
2. Chung KT, Wong TY, Wei CI, Huang YW, Lin Y. Tannins and human health: a review.Crit Rev
Food Sci Nutr. 1998 Aug;38(6):421-64.
3. Reed JD. Nutritional Toxicology of Tannins and Related Polyphenols in Forage Legumes. J Anim
Sci 1995, 73:1516-1528. Disponible en: http://www.journalofanimalscience.org/content/73/5/1516.full.pdf
[citado 22 de marzo 2013].
4. Hartzfeld PW, Forkner R, Hunter MD, Hagerman AE. Determination of Hydrolyzable Tannins
(Gallotannins and Ellagitannins) after Reaction with Potassium Iodate. J. Agric. Food Chem. 2002,
50, 1785−1790. Disponible en: http://mdhunter.myweb.uga.edu/publications/HAGERMAN.PDF [citado
22 de marzo 2013].
5. Clinton C. Plant tannins: A novel approach to the treatment of ulcerative colitis. Nat Med J. 2009;
1:(3). p. 1-3. Disponible en: http://naturalmedicinejournal.net/pdf/nmj_nov09to_clinton.pdf [citado 22 de
marzo2013].
6. Tamilselvi N, Krishnamoorthy P, Dhamotharan R, Arumugam P, Sagadevan E. Analysis of total
phenols,total tannins and screening of phytocomponents in Indigofera aspalathoides (Shivanar
Vembu) Vahl EX DC. J. Chem. Pharm. Res., 2012, 4(6):3259-3262. Disponible en:
http://jocpr.com/vol4-iss6-2012/JCPR-2012-4-6-3259-3262.pdf [citado 22 de marzo 2013].
7. Garro G J et al. Analytical Studies on Tara Tannins. Holzforschung. 1997; 51(3). Disponible en:
http://www.fpl.fs.fed.us/documnts/pdf1997/galve97a.pdf [citado 22 de marzo 2013].
8. Cabello LI. Monografía para el cultivo de la tara Caesalpinia spinosa (Molina)
Kuntze.Perúbiodiverso. Lima, Perú.2009
9. U.S. Department of Agriculture. USDA Database for the Flavonoid Content of Selected
Foods.March 2003. Disponible en:http://www.nal.usda.gov/fnic/foodcomp/Data/Flav/flav.pdf [citado 22
de marzo 2013]
PROTOCOLO Nº 09

RECONOCIMIENTO DE FLAVONOIDES Y TANINOS

HORARIO………………………………………….. FECHA……………………………….
MESA DE TRABAJO ……………………………..
RESULTADOS

ANÁLISIS CUALITATIVO DE FLAVONOIDES

Muestras Droga Droga


Estándar Estándar Vegetal con Vegetal
Problemas
Hesperidina Rutina Flavonoides con
REACCIÓN Taninos
H2SO4 cc
HCl cc
HNO3
NaOH 30%
Wilson
Shinoda
FeCl3
Pb(CH3COO)2
FeCl3
K2Cr2O7 5%
Agua de cal
KCN 5%
Hipoclorito de sodio
K4[Fe(CN)6] + NH4OH
Zn(CH3COO)2
Gelatina
KMnO4
Braemer

LEYENDA: (-) Nulo (-) poco (+) Leve (++) moderado (+++) abundante

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
PRÁCTICA Nº 10
EXTRACCIÓN Y RECONOCIMIENTO DE ACEITES ESENCIALES.

INTRODUCCIÓN

Aceites Esenciales

Los aceites esenciales son compuestos formados por sustancias orgánicas volátiles, como alcoholes,
cetonas, éteres y aldehídos, se producen y almacenan en los canales secretores de las plantas y
normalmente son líquidos a temperatura ambiente, y por su volatilidad, son extraídos por destilación en
corriente de vapor de agua.

Fuentes: Coníferas (pino, abeto), Mirtáceas (eucalipto), Rutáceas (Citrus spp), Asteraceae (manzanilla),
Labiadas (menta, lavanda, tomillo, espliego, romero) y umbelíferas (anís, hinojo).Pueden estar en
diferentes órganos: raíz, rizoma (jengibre), leño (alcanfor), hoja (eucalipto), fruto (anís) y sumidades
floridas (clavo de olor).

Propiedades terapéuticas: antiséptica (conservación de alimentos), antiespasmódica, expectorante;


carminativa y eupéptica. Sin embargo a dosis elevadas son tóxicos, principalmente a nivel del sistema
nervioso central y pueden ocasionar alergias e irritación.

Características físicas
Los aceites esenciales son volátiles, líquidos a temperatura ambiente (a excepción del alcanfor y el
mentol), recién destilados son incoloros o ligeramente amarillos, de densidad inferior a la del agua. Son
solubles en alcohol y disolventes orgánicos (éter, cloroformo), poco solubles en agua pero arrastrables
por el vapor de agua. Poseen poder rotatorio e índice de refracción característico.

Características químicas
Los aceites esenciales contienen compuestos:
-No terpenoides: sustancias alifáticas de cadena corta, sustancias aromáticas, sustancias con azufre y
sustancias nitrogenadas.
-Terpenoides: derivan del isopreno (C5) unidas en cadena, principalmente monoterpenos (C10),
sesquiterpenos (C15) y los diterpenos (C20) que pueden ser alifáticos, cíclicos o aromáticos. 1,2

COMPETENCIAS
 Conoce la extracción de aceites esenciales
 Evalúa las características físico-químicas de los aceites esenciales

METODOLOGÍA
 Destilación por arrastre de vapor
 Reacciones de coloración

MATERIAL Y EQUIPOS
 Equipo de destilación.
 Picnómetro
 Material de vidrio: matraz, beacker, tubos de ensayo, baguetas.
 Reactivos: cloroformo, acido acético, ácido sulfúrico.
 Lámpara ultravioleta
 Cubas cromatográficas
PARTE EXPERIMENTAL

Extracción de Aceites Esenciales

-Expresión en frío: presenta la ventaja de no someter los aceites esenciales a temperaturas elevadas y se
toma directamente la muestra problema.

-Destilación: colocar la muestra problema sobre la criba ubicada a cierta distancia del fondo del
alambique, el calentamiento se produce con vapor saturado proveniente de una fuente de calor que
componen el equipo, fluye y a presión baja, penetrando a través del material vegetal, los componentes se
volatilizan, y condensan en un refrigerante, se acumulan y se separan el agua del aceite por diferencia de
densidad.

I. ANÁLISIS CUALITATIVO

Análisis organoléptico:
 Color
 Olor
 Sabor
 Textura

Peso específico
a) Pesar el picnómetro vacío y seco (P)
b) Llenar el picnómetro con la MP a 20ºC por 15 min., ajustar el volumen si es necesario y pesar
cuidadosamente (P1)
c) Repetir la operación con agua destilada a 20 ºC (P2)

El peso específico a 20º C se calcula de la siguiente manera:

P.E 20 = (P1-P)/(P2-P)

Índice de refracción
a) Calibrar el refractómetro con I gota de agua destilada (inyectable) a 1.333
b) Secar el equipo con papel tissu
c) Colocar I gota de muestra problema sobre el prisma de medición y realice la lectura.
Análisis cromatográfico
Fase estacionaria: Cromatofolios de silica gel 60 F254 de 6.5 cm por 2.5 cm
Fase móvil: Tolueno: acetato de etilo (9 : 1)
Luz UV
Revelador: Vainillina – Ac. Sulfúrico

REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN DE TERPENOS


REACCIÓN PROCEDIMIENTO RESULTADO
Lieberman -Buchard X gotas de MP + llevar a Esteroides: verde -azul
sequedad en B.M + X gotas de Triterpenoides: rojo-
cloroformo+ III gotas de naranja
anhídrido acético+ H2SO4 cc en
zona (por las paredes de tubo)
sin agitar.

CUESTIONARIO

1. Mediante un diagrama de Flujo esquematice y describa el proceso de control de calidad para


aceites esenciales y describa sus análisis.

2. ¿Qué otras técnicas de extracción de aceites esenciales conoce?.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Varro, E., Tyler, L. Farmacognosia. Ed. El Ateneo, Bs. As, Argentina (1993)
2. Kuklinski, C., Farmacognosia., Ed. Omega SA, Barcelona, España (2000)
3. Bruneton, J. Farmacognosia – Fitoquímica – Plantas Medicinales. 3ra. Ed. Acribia, Zaragoza,
España (2001)
4. Bravo Díaz, L. Farmacognosia. Ed. Elsevier SA. Madrid, España. (2003)
5. Marco,J. Alberto. Química de los productos naturales. Aspectos fundamentales del metabolismo
secundario. 1a ed. Madrid ( 2006)
6. Gibaja Oviedo S. Pigmentos naturales. Quinónicos. Lima (1998).
7. Villar Del Fresno, A. Farmacognosia general. Madrid (2010)
8. López MT. Los aceites esenciales: Aplicaciones farmacológicas, cosméticas y alimentarias.
OFFARM.2004; 23: (7).
9. Albaladejo QM. El Aceite Esencial de limón producido en España. Contribución a su evaluación
por Organismos Internacionales. Universidad de Murcia. 1999. Disponible en:
http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/11059/Albaladejo.pdf;jsessionid=239F1DE9B45434C34798AEEB
F0F07002.tdx2?sequence=1[citado 23 de marzo de 2013]
10. Segovia B. et al. Composición química del aceite esencial de Tagetes elliptica Smith “chincho” y
actividades antioxidante, antibacteriana y antifúngica. Ciencia e Investigación 2010; 13(2): 81-86.
11. UNIDO, FAO. Herbs, spices and essential oils. Austria, 2005.Disponible en
http://www.unido.org/fileadmin/user_media/Publications/Pub_free/Herbs_spices_and_essential_oils.pdf [cita
do 23 de marzo de 2013]
PROTOCOLO Nº 10

EXTRACCIÓN Y RECONOCIMIENTO DE ACEITES ESENCIALES.

HORARIO………………………………………….. FECHA……………………………….

MESA DE TRABAJO ……………………………..

I. ANÁLISIS CUALITATIVO ACEITES ESENCIALES

Ensayo Resultado
Análisis organoléptico Olor
Color
Sabor
Textura
Peso especifico

Índice de refracción

REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN

REACCIÓN RESULTADO

Lieberman -Buchard

LEYENDA: (-) Nulo (-) poco (+) Leve (++) moderado (+++) abundante

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

Descripción Rf

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
PRÁCTICA N° 11

DROGAS CON ALCALOIDES DE NÚCLEO TROPÁNICO,


INDÓLICO, OXINDÓLICO, FENANTRENO.
EXTRACCIÓN ÁCIDA-ALCALINA, IDENTIFICACIÓN, OBTENCIÓN Y VALORACIÓN.

Los alcaloides son sustancias orgánicas nitrogenadas con carácter básico y mayoritariamente de origen
vegetal. Son compuestos orgánicos. Se forman generalmente a partir de aminoácidos. De origen vegetal.
Sustancias nitrogenadas. Contienen nitrógeno heterocíclico. Tienen estructura compleja. Son tóxicos.
Con actividad fisiológicas incluso a dosis muy bajas. Los alcaloides son un grupo muy heterogéneo de
compuestos con estructuras muy variadas y generalmente complejas, contienen C, H, N.
La mayoría de los alcaloides tienen reacciones que se aprovechan para su detección. Hay reactivos
generales que detectan alcaloides en general y hay otros que detentan un grupo específico. Estas
reacciones se pueden clasificar en reacciones de precipitación, cristalización y de color.

CLASIFICACIÓN DE ALACALOIDES
 Alcaloides derivados de ornitina
 Alcaloides derivados de lisina
 Alcaloides derivados del triptófano
 Alcaloides derivados de fenilalanina y tirosina
 Alcaloides de núcleo purínico o bases xánticas

(Erythroxylum coca “coca”: cocaína)

COMPETENCIAS
 Extrae los alcaloides a partir de un polvo seco pulverizado por medio ácido y alcalino.
 Identifica cuali-cuantitativamente los alcaloides.
 Reconoce el origen biológico de los alcaloides.

MATERIALES

Materiales de vidrios y otros

Balón de 250 mL
Pera de separación de 500 mL
Fiola de 500 mL
Tubos de ensayo de 10 mL
Pipetas de 1 mL, 5 mL

Reactivos
Agua destilada Acetona Etanol Etilacetona
Butanol Alcohol amílico Metanol Cloroformo
Éter etílico Éter de petróleo Benceno n-Hexano
Ácido clorhídrico Diclorometano Hidróxido de sodio Hidróxido de amonio
Reactivo Dragendorff Ácido perclórico 0.02 N Ácido acético glacial Cristal violeta
Ácido clorhídrico Agua destilada
Hidróxido de sodio Diclorometano
Metanol Cloroformo
Hidróxido de amonio.

Equipo

Molino manual Agitador con magneto Centrífuga Rotavapor


Pera de bromo Balanza analítica

PROCEDIMIENTO

1. Sensorial
Se verifica el aspecto, color y olor del polvo fino de acuerdo a las partes de la planta.

2. Fisicoquímico
2.1. Prueba de solubilidad
Se pesan 10 mg del extracto seco y se introduce en un tubo al cual se le adiciona 1 mL de solvente
en orden de polaridad decreciente (agua destilada, metanol, etanol, n-propanol, acetona, acetato de etilo,
cloroformo, tolueno, éter)
La finalidad del ensayo de solubilidad es determinar el comportamiento del extracto en soluciones de
diferente polaridad, permitiendo encontrar el sistema apropiado para el análisis cromatográfico.

3. Extracción y Aislamiento

Muestra en estudio
Drogas vegetales que contienen alta cantidad de alcaloides

Proceso de Extracción
Fundamento
La extracción se realiza previamente en un medio ácido formando sales de clorhidrato, y
posteriormente se alcaliniza con la finalidad de convertir los alcaloides en bases libres y poder
extraerlos con un solvente no polar.

Método alcalino: la droga se humedece con agua y se mezcla con cal y amoniaco. Los
alcaloides se extraen con solventes orgánicos (éter de petróleo, cloroformo, benceno). La fase
orgánica se separa y evapora. El residuo de la droga también se puede agitar con agua
acidulada, se añade solvente orgánico, luego dejar reposar para su separación en capas. Las
sales de alcaloides están en la fase acuosa y en la fase orgánica las impurezas.

Método ácido, la droga se extrae con agua o alcohol, en medio ácido. Se agrega un solvente
orgánico, otros productos indeseables se eliminan en la agitación con cloroformo u otros
solventes orgánicos. Luego los alcaloides libres son precipitados por adición en exceso de
bicarbonato de sódico o amoniaco, separándose por filtración o extracción con disolventes
orgánicos.

Procedimiento:
Pesar 5 g de la droga vegetal en un matraz y añadir 50 mL de HCl 10%, someter a BM por 30’
agitar, enfriar y filtrar. Transvasar a pera de decantación y alcalinizar con NH 4OH, extraer con
cloroformo 3 veces y separar las fases. Concentrar la fase clorofórmica a casi sequedad añadir
HCl 10% y reconocer con reacciones generales y específicas.
Cromatografía en capa fina

Sistema de solventes: A. Cloroformo: metanol: ácido acético glacial (47.5:47.5:5)


Cloroformo: metanol: amoniaco (9:10:1)

Detección: Revelador Dragendorff modificado


A. 17 g de subnitrato de bismuto, 200 g de ácido tartárico csp 800 mL agua.
B. 160 g de Yoduro de potasio csp 400 mL de agua.
Se mezclan solución A + Sol B (1:1)

Cromatografía en capa fina de Bases Xánticas


Muestra Extracto clorofórmico
Estándar Sol. Cafeína: 0.1% en cloroformo
Sol. Teofilina: 0.2 % en amoniaco
Sol. Teobromina: 0.2 % en hidróxido de sodio
Solventes tetracloruro de carbono: cloroformo: metanol (10:90:40)
Revelador vapores de yodo (antes de revelar, calentar la placa)

I. REACCIONES GENERALES
Realizar las reacciones generales y particulares

REACCIÓN PROCEDIMIENTO REACCIÓN POSITIVA


Yodados poliyodatos complejos
Dragendorff (yoduro potásico- bismútico ) 0.5 mL del extracto Precipitado naranja
Mayer (yoduro potásico mercúrico) llevar a sequedad a Precipitado blanco
Bouchardat o Wagner (yodo en yoduro potásico) BM, luego agregar Precipitado pardo oscuro
Poliácidos minerales complejos 1mL de HCl 1%,
Bertrand (ácido silíco-túngstico) disolver + III gotas Precipitado blanco
Sonnenschein (ácido fosfomolíbdico) de reactivo. Precipitado amarillo-verdoso
Reactivo orgánicos
Popoff (ácido pícrico ) Cristales característicos
Taninos Precipitado blanco

II. REACCIONES PARTICULARES

ATROPINA (Datura stramonium L, Brugmansia arborea L.)

REACCIÓN PROCEDIMIENTO REACCIÓN POSITIVA


Reacción de Vitali mg de MP + HNO3 conc.+ calentar en coloración violeta
B.M hasta residuo amarillo, enfriar y
agregar gotas de KOH alcohólico 10%

Reacción de Wasicky mg de MP + gotas de Rvo. Wasicky + coloración violeta


(p-dimetilaminobenzaldehido+ calentamiento suave rojiza brillante
H2SO4cc)
Reacción de Arnold mg de MP+ gotas de H2SO4 + NaNO2 + violeta rojizo (fugaz).
KOH al 10%
COCAÍNA (Erythroxylum coca L.)

REACCIÓN PROCEDIMIENTO REACCIÓN POSITIVA


Cloruro de bario Disolver mg de muestra en agua destilada, medir Precipitado blanco
10% el pH y acidificar con gotas de HCl 10% Agregar I-
II gotas del reactivo BaCl2 10%

Reacción de mg de extracto desecado + II gotas de tiocianato de Coloración turquesa


Young cobalto. (tiocianato de cocaína)

Nitrato de Disolver mg de muestra en agua destilada, medir Precipitado blanco


plata 10% pH y acidificar (si es necesario) con gotas de ácido
nítrico. Agregar I-II gotas de AgNO3
KMnO4 mg de extracto desecado + II gotas de KMnO4 Cristales
característicos

NÚCLEO INDÓLICO Y OXINDÓLICO

Reacción Procedimiento Reacción positiva


Van Urk mg de MP+ III gotas de reactivo de coloración azul
(dimetilaminobenzaldehido + ácido sulfúrico) Van Urk

BASES XANTICAS

REACCIÓN PROCEDIMIENTO REACCIÓN POSITIVA


Ácido Solución saturada de cafeína + V gotas de Formación de precipitado, soluble
tánico ácido tánico 5% en exceso de reactivo
Solución saturada de cafeína + V gotas de Precipitado café rojizo que en
Yodo reactivo de yodo (no precipita), se añade III exceso de NaOH desaparece.
gotas de HCl 10%
mg de muestra + HNO3 fumante. Calentar a Cambio de amarillo a violeta y al
sequedad en baño maría y observar la agregar NaOH la coloración violeta
Murexida formación de un residuo amarillo. Someter el desaparece.
residuo a vapores de amoniaco.
mg de muestra + mg de KClO3 (clorato de Formación de residuo amarillo.
potasio) + agregar HCl conc, calentar hasta Someter el residuo a vapores de
Weidel
sequedad en baño maría amoniaco y observar el cambio de
amarillo a violeta.
mg de muestra + gotas de NaOH 10% + gotas Formación de precipitado.
Gerard de amoníaco conc. + gotas de AgNO3 10%

REACCIÓN DE DIFERENCIACIÓN
RESIDUO DE LA REACCIÓN DE Cafeína: azul violeta
MUREXIDA O WEIDEL, someter a completa Teobromina: rojo violeta
Ekkert
evaporación el amoniaco + mg de codeína+ Teofilina: violeta
H2SO4 conc.
CUESTIONARIO

1. Mencione las especies en que se distribuyen los alcaloides

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Andújar I, Recio MC, Giner RM, Ríos JL. Cocoa polyphenols and their potential benefits for
human health. Oxid Med Cell Longev. 2012;2012:906252.
2. Ashihara H, Kato M, Crozier A. Distribution, biosynthesis and catabolism of methylxanthines
in plants. Handb Exp Pharmacol. 2011;(200):11-31.
3. Ashihara H, Sano H, Crozier A. Caffeine and related purine alkaloids: biosynthesis,
catabolism, function and genetic engineering. Phytochemistry. febrero de 2008;69(4):841-56.
4. Bruneton, J. Farmacognosia – Fitoquímica – Plantas Medicinales. 3ra. Ed. Acribia,
Zaragoza.2001.
5. Butt MS, Sultan MT. Coffee and its consumption: benefits and risks. Crit Rev Food Sci Nutr.
abril de 2011;51(4):363-73.
6. Ferrazzano GF, Amato I, Ingenito A, De Natale A, Pollio A. Anti-cariogenic effects of
polyphenols from plant stimulant beverages (cocoa, coffee, tea). Fitoterapia. julio de
2009;80(5):255-62.
7. Hooper L, Kay C, Abdelhamid A, Kroon PA, Cohn JS, Rimm EB, et al. Effects of chocolate,
cocoa, and flavan-3-ols on cardiovascular health: a systematic review and meta-analysis of
randomized trials. Am J Clin Nutr. marzo de 2012;95(3):740-51.
8. Kuklinski, C. Farmacognosia, 1era edición, Barcelona, 2000
9. Obregón Vilchez L.Uña de Gato "Cat's Claw": género uncaria, estudios botánicos, químicos y
farmacológicos de Uncaria tomentosa y Uncaria guianensis. Ed. Inst. de Fitoterapia
Americano. Lima 1997
10. Selecciones del Reader's Digest. Secretos y virtudes de las plantas medicinales. Madrid,
1982.
11. Varro, E., Tyler, L. Farmacognosia. Ed. El Ateneo, Bs. As, Argentina 1993.
12. Wink M, Meibner C, Witte L. Patterns of quinolizidina alkaloids in 56 species of the genus
Lupinus. Phytochemistry 1995; 38:139-153.
DROGAS CON ALCALOIDES

HORARIO………………………………………….. FECHA……………………………….

MESA DE TRABAJO ……………………………..

I.- MÉTODO DE EXTRACCIÓN:

II. ANÁLISIS CUALITATIVO:

REACCIONES GENERALES
REACCIÓN RESULTADO
DRAGENDORFF
BERTRAND
BOUCHARDAT O WAGNER
MAYER
SONNENSCHEIN
POPOFF
TANINOS

REACCIONES PARTICULARES

ATROPINA

REACCIÓN RESULTADO
VITALI
WASICKY
ARNOLD
COCAÍNA

REACCIÓN RESULTADO
CLORURO DE BARIO
REACCIÓN DE YOUNG
NITRATO DE PLATA 10%
KMnO4

NÚCLEO INDÓLICO Y OXINDÓLICO

REACCIÓN RESULTADO
VAN URK

BASES XÁNTICAS
Reacción Cafeína Teofilina Teobromina
R. Murexida
R. Weidel
R. Gerard
R. Yodo
R. ácido
tánico
ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO
Rf:

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
PRÁCTICA N° 12

INVESTIGACIÓN FARMACOGNÓSTICA DE LOS EXTRACTOS DE LA PLANTA MEDICINAL


ESTUDIADA (ANÁLISIS FITOQUÍMICO: TAMIZAJE FITOQUÍMICO, PH, ÍNDICE DE REFRACCIÓN,
DENSIDAD Y CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA).

La investigación de plantas medicinales es muy importante porque se utilizan en la elaboración de


medicamentos y también y como materia prima para formulaciones magistrales. Por esta razón se deben
trabajar con extractos estandarizados que tengan un control de calidad en cuanto al control de identidad
mediante una certificación taxonómica y de calidad mediante ensayos microbiológicos, fisicoquímicos y
farmacológicas que aseguren su calidad, seguridad y eficacia.

FASE I: Recolección, conservación de drogas y elaboración de extractos


EXTRACCIÓN

Recolección, estabilización Certificación


taxonómica

Selección

Desecación

Molienda

Preparación del extracto


acuoso

Prueba de Screening Análisis cromatográfico Ensayos en


solubilidad fitoquímico laboratorio

Cromatografía Cromatografía en Aislamiento y Cristalización


En capa fina columna purificación

Análisis espectroscópico uv/visible Análisis espectroscópico IR

FASE II: Elaboración de extractos estandarizados

 Parámetros físico-químicos
Propiedad Extracto

Olor
Color Análisis organoléptico
Sabor
pH Papel Indicador
Densidad relativa Picnómetro
Índice de refracción Refractómetro

 Prueba de solubilidad
LEYENDA: (-) Insoluble (+) ligeramente soluble (++) soluble (+++) Muy soluble

Solventes Extracto seco (mg)


Agua destilada Distribuir equitativamente mg de
Etanol extracto seco en cada tubo de
Metanol ensayo y agregar X gotas de
n-butanol cada solvente, agitar por 1 min y
Acetato de etilo evaluar solubilidad.
Diclorometano
Cloroformo

 Huella Cromatográfica
1. Preparación de muestra: Pesar 0.1 g de extracto seco y solubilizar en 5 mL de
solvente.
2. Fase estacionaria: Sílica gel F 254 (cromatofolios)
3. Fase móvil: Solventes polares y apolares
4. Detección: Vapores de yodo / Luz UV

Muestra Extracto clorofórmico


Solventes Tolueno: acetato de etilo: dietilamina (7:2:1)
Revelador Dragendorff

 Tamizaje fitoquímico
LEYENDA: (-) Nulo (+) Leve (++) moderado (+++) abundante
METABOLITO REACCIÓN PROCEDIMIENTO REACCIÓN POSITIVA
CARBOHIDRATOS Molish X gotas de MP+ III gotas de Molish
Anillo violeta
(alfa naftol 2% en alcohol) agitar+ III gotas de H2SO4 CC
Antrona
X gotas de MP + III gotas de Antrona Coloración verde
(antrona en H2SO4 cc al 2% )
Fehling
X gotas de MP + III gotas de Fehling
(A: CuSO4; B: tartrato mixto
A+ III gotas de Fehling B + calentar Coloración rojo ladrillo
de potasio y sodio
en B.M
(KNaC4H4O6·4H2O))
COMPUESTOS X gotas de MP + III gotas de FeCl3
FeCl3 Coloración verde o azul
FENÓLICOS 10 %
TANINOS Gelatina X gotas de MP + III gotas de gelatina Precipitado denso blanco
Chalconas, auronas, isoflavanonas:
No hay coloración.
X gotas de MP + 1-2 virutas de Mg Isoflavanonas: Amarillo rojizo.
FLAVONOIDES Shinoda
metálico + III gotas de HCl cc Flavanonoles: Rojo a magenta.
Flavonas y flavonoles: Amarillo a
rojo
ANTOCIANINAS Y
Rosenheim X gotas de MP + III gotas de
FLAVONOIDES Coloraciónrojo oscuro
(Sol. Yodo Yodurada) Rosenheim
CATÉQUICOS
AMINOÁCIDOS
X gotas de MP + III gotas de
LIBRES Y GRUPOS Ninhidrina(0.1% en etanol) Coloración violácea
ninhidrina + calentar en B.M 10 min.
AMINO
X gotas de MP + evaporar el solvente
Dragendorff
B.M + V gotas de HCl 10%+ III Precipitado naranja
(yoduro potásico- bismútico )
gotas de Dragendorff
X gotas de MP + evaporar el solvente
Mayer (yoduro potásico
B.M + V gotas de HCl 10%+ + III Precipitado blanco
mercúrico)
gotas de Mayer
ALCALOIDES
X gotas de MP + evaporar el solvente
Bertrand (ácido silíco- Precipitado blanco
B.M + V gotas de HCl 10%+ + III
túngstico)
gotas de Bertrand
X gotas de MP + evaporar el solvente
Sonnenschein Precipitado amarillo-verdoso
B.M + V gotas de HCl 10%++ III
(ácido fosfomolíbdico)
gotas de Sonnenschein
NAFTAQUINONAS,
Borntrager X gotas de MP + III gotas de
ANTRAQUINONAS Coloración roja
(NaOH 5%) Borntrager
Y ANTRANONAS
X gotas de MP + llevar a sequedad en
B.M + X gotas de cloroformo+ III
TRITERPENOIDES Esteroides: verde-azul
Lieberman - Bourchard gotas de anhídrido acético+ H2SO4 cc
Y ESTEROIDES Triterpenoides: rojo-naranja
en zona (por las paredes de tubo) sin
agitar.
1 mL de MP + 5 mL de agua
Formación de 0.5 a 1 cm de espuma
SAPONINAS Generación de espuma destilada + agitar fuertemente por 1
estable por 15 min.
min.
X gotas de MP + V gotas de ácido
GLICÓSIDOS Baljet pícrico 1 % + V gotas de NaOH al 5 Coloración anaranjada
%.
X gotas de MP + V gotas de de
LACTONAS Legal nitroprusiato de sodio 0.5% + V gotas Coloración rojo oscuro
de KOH 2N.
X gotas de MP + papel humedecido
NH4OH cc ó
CUMARINAS con NH4OH cc ó NaOH 10% en Fluorescencia celeste
NaOH 10%
boca de tubo + calentar por 5 min a
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Villar del Fresno, A. Farmacognosia General. Ed. Síntesis, SA. Madrid, España (1999).

2. Treasse, G., Evans, W. Pharmacognosy. Ed. BailliereTindall, Londres 1994.

3. Wallis, T. Manual de Farmacognosia. Ed. Ceosa, México. 1991.

4. Bruneton, J. Farmacognosia – Fitoquímica – Plantas Medicinales. 3ra. Ed. Acribia, Zaragoza, España
2001.

5. Obregón, L.Maca. Planta medicinal y nutritiva del Perú.Lima 1988.


PROTOCOLO TRABAJO DE INVESTIGACIÓN
RESULTADOS
MESA DE TRABAJO: ………………….. DIA DE LABORATORIO:……………….

FASE I: Conservación de drogas y elaboración de extractos


 Obtención y conservación de la droga

(Diagrama de Flujo)

FASE II: Elaboración de extractos estandarizados

 Parámetros
Propiedad Extracto etanólico

Olor
Color
pH
Densidad relativa
Índice de refracción

 Prueba de solubilidad
Solventes Extracto seco (mg)

Agua destilada
Etanol
Metanol
n-butanol
Acetato de etilo
Diclorometano
Cloroformo
Leyenda: (-) Insoluble (+) ligeramente soluble (++) soluble (+++) Muy soluble
 Tamizaje fitoquímico
METABOLITO REACCIÓN CAMBIOS OBSERVADOS INTERPRETACIÓN RESULTADOS
CARBOHIDRATO Molish

S Antrona

Fehling

COMPUESTOS FeCl3
FENÓLICOS

TANINOS Gelatina

FLAVONOIDES Shinoda

ANTOCIANINAS
Rosenheim
Y FLAVONOIDES
CATÉQUICOS

AMINOÁCIDOS
Ninhidrina
LIBRES Y
GRUPOS AMINO

Dragendorff

Mayer
ALCALOIDES
Bertrand

Sonnenschein

NAFTAQUINONA
S,
ANTRAQUINONA
SY Borntrager
ANTRANONAS
TRITERPENOIDE
Lieberman-Burchard
S Y ESTEROIDES

SAPONINAS Generación de espuma

GLICÓSIDOS Baljet

LACTONAS Legal

CUMARINAS NH4OH cc ó
NaOH 10%

LEYENDA:(-) Nul o(+) Leve (++) moderado (+++) abundante


 Huella Cromatográfica

Preparación de muestra: Pesar 0.1 g de extracto seco y solubilizar en 5 mL de solvente.


Fase estacionaria: Sílica gel

Fase móvil:

Detección:

Análisis
HPLC
Calculo de Rf

Esquema de resultado
PRÁCTICA N° 13
LÍPIDOS, IDENTIFICACIÓN Y CONTROL DE CALIDAD DE ACEITES

El aceite vegetal es un compuesto orgánico obtenido a partir de semillas u otras partes de las plantas en
cuyos tejidos se acumulan como fuente de energía. Están conformados por lípidos definidos como grupo
heterogéneo de compuestos insolubles en agua, y solubles en solventes apolares como: éter, cloroformo,
benceno o acetona. Las grasas y aceites son ésteres formados por la condensación de ácidos grasos
con glicerol.1-5

Métodos de extracción de aceites


Usualmente en la extracción de aceites se aplican procesos mixtos y se elige según la naturaleza de la
materia prima.

Tabla 1. Procesos de extracción de aceites.1


Refinación,
Proceso de
Ventajas Desventajas deodorización Ejemplos
extracción y blanqueo
Prensado en Retiene compuestos Bajo rendimiento de aceite NO Aceite de oliva
frio o menores virgen, aceite
centrifugación como volátiles, de palta,
compuestos aceite de
fenólicos y clorofila. cáñamo
Extracción Proceso no tóxico y más Los rendimientos opcional Aceite de
mediante seguro que la extracción pueden ser menores a los avena
fluidos con hexano. No requiere obtenidos con hexano
supercríticos eliminar
(CO2) solventes de la miscela
o harina residual.
Extracción con Solvente menos tóxico y Difícil de remover SI Aceite de
Etanol más seguro que el extractos no lipídicos de la grano de maíz
hexano miscela y la harina
Prensado Tecnológicamente Menor rendimiento que la SI Aceites
estándar simple y extracción con hexano, las comunes
económico para altas temperaturas causan
producción a algunos cambios químicos en
gran escala industrial el aceite y la harina.

Extracción con Bajo costo, altos Problemas para la salud y de SI Aceites


hexano rendimientos Seguridad. comunes

Pre-prensado Bueno para semillas con Requiere más equipamiento SI Aceites


+ >20% aceite. comunes
extracción con
hexano
Extracción Técnica suave, Altos costos de las enzimas, Opcional En desarrollo
acuosa ambientalmente limpia rendimiento menor a la
enzimática extracción con hexano.
Extracción de aceites

Extracción por solventes orgánicos


La extracción con solventes, principalmente hexano, es uno de los
procesos más tradicionales empleados en la obtención de aceites de
semillas oleaginosas. El principio de extracción con solvente se basa
en el hecho que un componente (soluto) se distribuye entre dos fases
según la relación de equilibrio determinada por la naturaleza del
componente y las dos fases. A fin de facilitar el proceso de extracción,
es necesario reducir el tamaño de la semilla o grano mediante el
quebrado e inclusive el laminado. La aplicación de un tratamiento
térmico antes o durante la extracción produce la rotura de la emulsión
celular, reduce la viscosidad del aceite facilitando su fluidez y
desplazamiento así como disminuye la tensión superficial del aceite.
No obstante, dicho tratamiento puede afectar negativamente la calidad
química del mismo incrementando los parámetros de oxidación. 1,3

Extracción por prensado en frio 1-3


En el prensado en frío la materia prima no se somete a calentamiento previo o durante la extracción, que
permite la retención de una mayor cantidad de compuestos fitoquímicos de interés como algunos
antioxidantes naturales. La prensa utilizada comúnmente es la de tornillo helicoidal, aplicando una
presión de molienda a las semillas. Otro tipo de técnica es la de aplicar presión directamente sobre las
semillas ubicadas en un barril con orificios a los costados lo cual permite el escurrimiento del aceite.
La extracción por prensado mecánico, no aplica calor y se recomienda como método de extracción de
aceites vírgenes y extra vírgenes ya que conservan las propiedades químicas y constituyentes del
aceite.

Clasificación de aceites
Según el codex alimentarius 2 los aceites vegetales se pueden clasificar como:
Los aceites vegetales comestibles: productos alimenticios constituidos principalmente por glicéridos de
ácidos grasos obtenidos únicamente de fuentes vegetales. Podrán contener pequeñas cantidades de
otros lípidos, tales como fosfátidos, de constituyentes insaponificables y de ácidos grasos libres
naturalmente presentes en la grasa o el aceite.
Los aceites vírgenes: se obtienen, sin modificar el aceite, por procedimientos mecánicos y por aplicar
sólo calor. Se puede purificar por lavado, sedimentación, filtración y centrifugación únicamente.
Los aceites prensados en frío: se obtienen por procedimientos mecánicos únicamente, sin la aplicación
de calor. Podrán haber sido purificados por lavado, sedimentación, filtración y centrifugación únicamente.

COMPETENCIAS
 Conoce los métodos de extracción de aceites
 Identifica cualitativamente los aceites vegetales
 Analiza la calidad de los aceites

METODOLOGÍA
 Extracción por prensado en frio
 Extracción por solventes orgánicos
 Análisis cualitativo
 Índice de acidez

MATERIALES Y EQUIPOS
 Materiales de vidrio
 Solventes orgánicos
 Reactivos de precipitación
PARTE EXPERIMENTAL
I. Reacciones generales de caracterización

REACCIÓN PROCEDIMIENTO RESULTADOS


Heidenreich Tomar V gotas de H2SO4 concentrado en tubo Observar coloración parda-
de ensayo y verter por las paredes gotas del rojiza.
aceite.
Hauchercorne Colocar V gotas de aceite y añadir reactivo Observar color, luego someter
de Hauchercorne, agitar por 2 min. a baño maría por 20 minutos.
Observar coloración parda-
rojiza.
Bellier Colocar V gotas de aceite en un tubo de Los aceites vegetales dan
ensayo, V gotas de HNO3 concentrado y V coloraciones rojas, verdes o
gotas de solución saturada de resorcina en violetas.
benzol, agitar por 10 segundos,
Elaidínica Colocar en un tubo de ensayo seco 1 mL de Observar.
aceite más X gotas de HNO3 concentrado,
agitar por 2 minutos, añadir mg de mercurio
metálico, agitar y dejar en reposo.

PARTE EXPERIMENTAL
ACEITE PROCEDIMIENTO RESULTADO POSITIVO
MANÍ Reacción de Blarez o araquidato de Formación de precipitado
potasio: tomar 1.5 mL de aceite de maní en
un matraz de 250 mL, adicionar 15 mL de
potasa alcohólica al 5%, adaptarle un
refrigerante de reflujo, colocar a baño maría
por 20 min, enfriar el matraz.
OLIVA Reacción de Hauchercorne: tomar 1 mL de Luego someter a baño maría
aceite y agregar 1mL de HNO3 y V gotas por 20 min. Observar la
de agua, agitar por 2 minutos y después de coloración: el aceite de oliva
15 minutos en reposo, observar el color. puro permanece inalterable
mientras que los demás aceites
varían del amarillo al pardo.
Reacción de Fluorescencia: tomar V gotas Observar fluorescencia azulada
de aceite y diluir en 1mL de cloroformo
ALMENDRA Reacción de Bieber: mezclar V gotas de Si el aceite de almendras es
H2SO4 concentrado, V gotas de HNO3 puro, se forma una emulsión
concentrado y V gotas de agua con 1 mL de amarilla que al cabo de algún
aceite de almendras. tiempo pasa a color rojizo.

AJONJOLÍ O Reacción de Behrens: mezclar en un tubo Coloración verde.


SÉSAMO de ensayo V gotas de H2SO4 concentrado y
V gotas de HNO3 concentrado, luego añadir
V gotas de aceite.
Reacción de Bellier: colocar V gotas de Coloración verde que persiste
aceite en un tubo de ensayo, V gotas de algunos minutos.
HNO3 concentrado y V gotas de solución
saturada de resorcina en benzol, agitar por
10 min y observar.
Reacción Baudovin: Colocar V gotas de Coloración rojiza.
aceite en un tubo de ensayo, miligramos de
sacarosa y V gotas de H2SO4 concentrado,
agitar y dejar en reposo por 5 a 10 minutos.
R. Villavecchia y Fabris (detecta hasta Coloración del rosado al rojo.
0.25-0.5% de aceite): colocar II a III gotas de
una solución alcohólica de furfurol, V gotas
de aceite y V gotas de H2SO4 concentrado,
agitar y dejar en reposo.
LINAZA R. Heidenreich: colocar en una cápsula de Coloración anaranjada y luego
porcelana, V gotas de H2SO4 concentrado y se forma una película negra.
verter por las paredes gotas del aceite.
R. Hauchercorne: colocar 1 mLde aceite y Coloración rojo castaño.
añadir HNO3: agua (3:1), agitar y después de
2 minutos observar el color, luego someter a
baño maría por 20 minutos.
RICINO R. Brulle: colocar 10mL de aceite de ricino, Coloración amarilla.
3 mL de HNO3 diluido más 0.1 g de albúmina
en polvo, someter a calentamiento, al llegar a
ebullición agitar, calentar nuevamente y dejar
en reposo 30 min.
Solubilidad: colocar V gotasde aceite y Observar solubilidad de aceites
añadir alcohol 96° y agitar.
colocar V gotasde aceite y añadir ácido
acético y agitar.
Fusión potásica: tomar 2 mL de aceite y Observar precipitado de ácido
agregar 2 pastillas de KOH, calentar (se sebásico.
percibe olor característico), hasta no percibir
olor, enfriar y disolver en agua, adicionar
MgCl210%, observar precipitado de ácidos
grasos, filtrar y tratar el líquido filtrado con
HCl 10%.
BACALAO Disolver III gotas del aceite en el cloroformo, Coloración violeta que pasa a
añadir III gotas de H2SO4 cc pardo.

I. Índice de yodo - Método de Hanus


Es el peso de yodo absorbido por la muestra, se expresa en gramos de yodo por 100 g de muestra. El
índice de yodo indica la proporción de dobles enlaces en los ácidos grasos que constituyen la grasa o
aceite y se expresa como miligramos de yodo que se fijan por adición en 100 g de aceite.

Reactivos
 Solvente: cloroformo
 Yoduro de potasio al 30%
 Reactivo de Hanus: solución reactivo de yodo bromuro
 Titulante: tiosulfato de sodio Na2S2O3 0.1N
 Indicador: S. R. engrudo de almidón

Técnica operatoria

1. Pesar 0.2 – 0.3 g de la muestra problema en un matraz con tapa esmerilada.


2. Añadir 10 mL del solvente y agitar hasta completa disolución y agregar exactamente 25 mL del
reactivo de Hanus; tapar, agitar y colocar el matraz al abrigo de la luz 30 min.
3. Agregar 10 mL de solución de yoduro de potasio al 30% y 100 mL de agua.
4. Valorar con la disolución de tiosulfato sódico 0.1 N hasta la decoloración del color amarillo producido
por el yodo, añadir gotas de S.R engrudo de almidón y continuar la valoración con agitación intensa
hasta que desaparezca la coloración azul.
5. Se efectúa paralelamente el ensayo en blanco

El índice de yodo se expresa:

II =

II. Determinación de la acidez

La acidez de un producto natural se considera como su contenido en sustancias ácidas. Habitualmente


se determina mediante técnicas de valoración ácido-base y se puede expresar como la cantidad
equivalente de un ácido característico de ese producto natural.
En el caso de aceites fijos y grasas el índice de acidez puede expresar como el número de mL de álcali
0.1N requerido para neutralizar los ácidos libres en 10 gramos de sustancia

R-COOH + KOH 3R-COOK + H2O

Índice de acidez (ácidos grasos libres)

Definición: mg de hidróxido de potasio necesarios para neutralizar los ácidos grasos libres contenidos en
1.0 gramos de aceite o grasa.

Dónde:

Reactivos V1: mililitros de la


solución
 Titulante : KOHde0,1tiosulfato
N
sódico utilizada para el
 Indicador: fenolftaleína al 0,1% en etanol.
ensayo en blanco.
 Mezcla disolvente: alcohol : cloroformo (1:1)
V2: mililitros de la
solución de tiosulfato
Técnica Operatoria
sódico utilizada para la
1. Pesar de 2 ó 3 g de aceite en un matraz Erlenmeyer, previamente tarado.
determinación.
2. Tomar 30 mL mezcla disolvente (alcohol-cloroformo 2:1) y neutralizar con KOH 0,01 hasta
P: peso en gramos de
coloración rosada persistente del indicador.
la muestra problema.
3. Cargar la bureta con la disolución de KOH 0,1 N, enrasar e iniciar la valoración, agitando
continuamente, hasta viraje del indicador. Anotar los mL de KOH gastados.

1.27 (V1 -

P: peso de la
muestra
V: volumen en mL
de hidróxido de
sodio gastado
CUESTIONARIO

1. ¿Qué recursos naturales son fuente promisoria de aceites vegetales?

2. Describa otros métodos para el análisis en aceites.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Azócar L, Ciudad G, Heipieper HJ, Navia R. Biotechnological processes for biodiesel


production using alternative oils. Appl Microbiol Biotechnol. octubre de 2010;88(3):621-36.
2. Codex alimentarius: Fats, oils and related products. Volume 8. Food & Agriculture Org.; 2001.
3. Español CA. Análisis. Métodos Oficiales de aceites, grasas, cereales y derivados, productos
lácteos y derivados de la uva. Boletín Oficial del Estado, BOE, del. 17.
4. FAO. Grasas y ácidos grasos en nutrición humana Consulta de expertos [Internet]. FAO;
2012. Recuperado a partir de: http://www.fao.org/docrep/017/i1953s/i1953s.pdf
5. Hernández N, Codony Salcedo R, Rafecas Martínez M, Boatella Riera J. Contenidos de
isomeros trans de los acidos grasos en productos carnicos (I). Embutidos. Grasas y Aceites,
1991, vol 42, num 2, p 143-147 [Internet]. 1991 [citado 23 de agosto de 2013]; Recuperado a
partir de: http://diposit.ub.edu/dspace/handle/2445/32261
6. Ixtaina V. Caracterización de la semilla y el aceite de Chía (Salvia hispanica L.)obtenido
mediante distintos procesos. Aplicación en tecnología de alimentos. Universidad Nacional de
La Plata; 2010. p. 39–50.
7. Lafont JJ, Portacio AA. Extracción y Caracterización Fisicoquímica del Aceite de la Semilla
(Almendra) del Marañón (Anacardium occidentale L). Información tecnológica. 2011;22(1):51-
8.
8. Li Q, Du W, Liu D. Perspectives of microbial oils for biodiesel production. Appl Microbiol
Biotechnol. octubre de 2008;80(5):749-56.
9. Lu C, Napier JA, Clemente TE, Cahoon EB. New frontiers in oilseed biotechnology: meeting
the global demand for vegetable oils for food, feed, biofuel, and industrial applications. Curr
Opin Biotechnol. abril de 2011;22(2):252-9.
10. Panreac Química SA. Métodos Analíticos en Alimentarias. Métodos Oficiales de Análisis
Aceites y Grasas. 1999;15.
PROTOCOLO N° 13

LÍPIDOS, IDENTIFICACIÓN Y CONTROL DE CALIDAD DE ACEITES

HORARIO………………………………………….. FECHA……………………………….

MESA DE TRABAJO ……………………………..

DROGAS CON LIPIDOS

I. RESULTADOS

MUESTRAS:………………….

REACCIONES GENERALES

REACCIÓN RESULTADOS
R. Heidenreich
R. Hauchercorne
R. Bellier
R. Elaidínica

ÍNDICE DE YODO
CÁLCULOS RESULTADOS

ÍNDICE DE ACIDEZ

CÁLCULOS RESULTADOS

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
IDENTIFICACIÓN DE ACEITES

1.Aceite de maní: 5. Aceite de linaza


Reacción Observación
Reacción de
Blarez
Reacción Observación
2. Aceite de oliva
R. Heidenreich
Reacción Observación
R. R. Hauchercorne
Hauchercorne
6. Aceite de ricino
3. Aceite de almendras Reacción Observación
Reacción Observación Solubilidad
R. Bieber R. fusión
potásica
1. Aceite de sésamo
R. Brulle

REACCIÓN OBSERVACIÓN
7. Aceite de bacalao
R. Villavecchia y
Fabris Reacción Observación
R. Behrens cloroformo

R. Baudovin
R. Bellier

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
PRÁCTICA Nº 14
ANÁLISIS DE VITAMINAS
INTRODUCCIÓN
Las vitaminas son compuestos orgánicos que cumplen funciones vitales relacionadas con el metabolismo
y con la fabricación de hormonas, neurotransmisores, células sanguíneas o material genético. Poseen
función enzimática acelerando reacciones químicas.

Según su solubilidad se clasifican en:

Vitaminas hidrosolubles.
 Vitamina B1
 Vitamina B2
 Vitamina B3
 Vitamina B6
 Ácido fólico
 Vitamina B12.
 Vitamina C.
 Ácido pantoténico
 Biotina

Vitaminas liposolubles.
 Vitamina A
 Vitamina D
 Vitamina E
 Vitamina K
COMPETENCIA
 Analiza cualitativamente vitaminas liposolubles e hidrosolubles

METODOLOGÍA
 Reacciones de coloración

MATERIALES Y EQUIPOS
 Materiales de vidrio
 Solventes orgánicos
 Reactivos de precipitación

PARTE EXPERIMENTAL
I. Análisis cualitativo

VITAMINA LIPOSOLUBLES
procedimiento Reacción positiva
vitamina A R. de Carr-Price: evaporar 3 mL del Coloración azul fugaz.
extracto etéreo, disolver en cloroformo y
adicionar gotas de S.R SbCl3.

vitamina D R. de Liebermann: evaporar 0.5 mL del Coloración roja que


extracto etéreo, adicionar 1 mL de pasa al violeta, azul y
cloroformo, 1 mL de anhidro acético y finalmente al verde.
gotas de H2SO4 cc en zona.

VITAMINAS HIDROSOLUBLES
Vitamina C Tratar V gotas de filtrado con V gotas mL de Precipitado rojo de óxido
S.R Fehling o Benedict, calentar. cuproso

Diluir 1 mL de ácido ascórbico al 2% con Decoloración del reactivo


pocos mL de 2,6 diclorofenolindofenol.

Tratar V gotas del filtrado con S.R. Yodo. Decoloración del reactivo

Complejo B R. del tiocromo: disolver mg de la muestra en Da fluorescencia azul que


VIII gotas de NaOH 0.5 N adicionar 1 mL de se observa en la luz
Vitamina B 1 o Tiamina Ferrocianuro de potasio al 10%, 1 mL de ultravioleta que
alcohol isobutílico y agitar por 2 min. desaparece al adicionar
gotas de ácidos diluidos y
se regenera al adicionar
gotas de soluciones
alcalinas.
Precipitación con el ácido silicotúngstico: Precipitado característico.
Tratar mg de muestra con agua, adicionar HCl
diluido y calentar ligeramente, adicionar gotas
de S.R ácido silicotúngstico.
Tratando una solución de vitamina B1 con Precipitado blanco.
HgCl2.
Tratando una solución de vitamina B1.con Precipitado rojo pardo
S.R. Yodo.
Vitamina B2 o Riboflavina Disolver mg de muestra con agua, da una Fluorescencia verde.
coloración amarilla.
Vitamina B6 o Piridoxina Tratar 1 mL de solución de vitamina B6 con Coloración rosada que
S.R FeCl3. pasa al rojo

CUESTIONARIO
1. Mencione especies que presentan vitaminas
2. Describa otros métodos de cuantificación de vitamina C.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Alonso P, Salucci M, Lázaro R, Malani G, Ferro-Luzzi A. Capacidad antioxidante y potencial de
sinergismo entre los principales constituyentes antioxidantes de algunos alimentos. Rev Cubana
Alim Nutric. 1999;13(2):104-11.
2. Flórez J. Vitaminas liposolubles e hidrosolubles. Farmacología humana (3rd ed), Editorial
Masson, SA, Barcelona. 1999;991-1005.
3. Benítez Zequeira DE. Vitaminas y oxidorreductasas antioxidantes: defensa ante el estrés
oxidativo. Revista cubana de investigaciones biomédicas. 2006;25(2):0-0.

PROTOCOLO Nº 14

ANÁLISIS DE VITAMINAS

HORARIO………………………………………….. FECHA……………………………….

MESA DE TRABAJO ……………………………..

I. RESULTADOS

 ANÁLISIS CUALITATIVO

REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN

REACCIÓN vitamina A vitamina D vitamina C vitamina B MUESTRA


PROBLEMA

INTERPRETE SUS RESULTADOS