Cromatografía en Columna y Capa Fina

Cruz, Jaqueline & Juárez, Gissell

ID: 4-808-1395, ID: 4-789-2287;
Laboratorio de Química Analítica II (QM 228), Escuela de Química, Facultad de Ciencias Naturales y Exactas,
Universidad Autónoma de Chiriquí, David, Chiriquí, República de Panamá.

Resumen:
La experiencia de laboratorio tuvo como objetivo principal conocer la cromatografía en columna y capa fina
como técnica de separación de mezclas de sustancias, sus características y los factores que en ella intervienen.
Se realizó la cromatografía en columna, donde se insertó un pedazo de fibra de vidrio en el fondo de la
columna, se llenó dicha columna hasta la mitad con HNO3 0.5 y se vertió la alúmina ácida en la columna de tal
forma que se empaco uniformemente, se dejó el absorbente a 10 cm de altura, se añadió 1.0 mL de la mezcla de
dicromato/permanganato en la parte superior de la columna con una pipeta granulada, luego; se ajustó el flujo
de elución, cuando el nivel del líquido alcanzo la alúmina se añadió HNO3 0.5M en pequeñas porciones hasta
que la primera banda coloreada haya sido eluída, se cambió el eluyente a H2SO4 0.1M y se tomó las muestra de
dicromato, se determinó su absorbancia en el espectrofotómetro de absorción de luz uv-visible y se repitió la
determinación de absorbancia con las fracciones de permanganato; teniendo como resultado 2.137 A para la
basica; 1.948 para la neutra y 2.313 A para la acida. Seguidamente se realizó el mismo procedimiento con
alúmina básica; teniendo como resultado 2. 644 A y luego con la alúmina neutra, teniendo como resultado
0.625A. Luego se realizó la cromatografía en capa fina, donde se preparó 90 ml de los eluyentes Hexano:
acetato de etilo 1:1 y NH4OH: etanol 7:3, se disolvieron las muestras de fármaco: Ibuprofeno, Aspirina y
ácido salicílico; y los aminoácidos: fenilalanina, triptófano y cisteína en acetona, luego; se colocó en las
cámaras cromatografías la mezcla de los eluyentes y una tira de papel filtro para saturarla de los vapores de los
eluyentes, se aplicó con el capilar sobre la placa de capa fina 3 aplicaciones de cada muestra y al terminar se
colocó dentro de la cámara, teniendo cuidado que el borde inferior hiciera contacto con el eluyente, seguido; se
esperó unos 10 a 30 min, se sacó la placa del eluyente cuando estuvo por encima de la línea cercana del borde
superior, se llevó al horno por 2 minutos, se revelaron con la lámpara UV y los aminoácidos con la ninhidrina,
se marcaron las manchas obtenidas en el cromatograma y se midió el Rf en cada mancha; teniendo como
resultado. Finalmente se concluye.

Palabras claves: elución, absorbancia, efectividad, fase estacionaria, fase móvil.

Objetivos:
 Conocer la cromatografía en columna como
técnica de separación de mezclas de
sustancias, sus características y los factores
que en ella intervienen.
 Separar los iones dicromato y permanganato
en una columna de alúmina, examinando la
absorbancia de las fracciones eluídas en el
calorímetro.
 Evaluar la separación de los componentes de
una mezcla, variando la naturaleza ácida,
básica o neutra del absorbente.
 Estudiar los principios de la cromatografía
en capa fina y sus aplicaciones.
 Aplicar las técnicas de cromatografía en
capa fina para la separación e identificación
de compuestos orgánicos.
Marco teórico:
La cromatografía en columna utiliza una columna
de vidrio vertical que se llena con un soporte sólido
adsorbente. La muestra que se quiere separar se
deposita en la parte superior de este soporte. El
resto de la columna se llena con el eluyente que
hace mover la muestra a través de la columna. Se
establece un equilibrio entre el soluto adsorbido en
la fase estacionaria y el disolvente eluyente que
fluye por la columna. (Abbott, D. 1973).
La cromatografía en capa fina (en inglés thin layer
chromatography o TLC) es una técnica analítica
rápida y sencilla, muy utilizada en un laboratorio de
Química Orgánica. Entre otras cosas permite: Contacto con ojos:
‐ Determinar el grado de pureza de un compuesto. es muy corrosivo.
Se puede determinar así, por ejemplo, la Contacto con la
efectividad de una etapa de purificación. piel: La irrita
‐ Comparar muestras. Si dos muestras corren igual Ingestión:
en placa podrían ser idénticas. Si, por el contrario, quemaduras en
corren distinto entonces no son la misma sustancia. tráquea y efectos
‐ Realizar el seguimiento de una reacción. Es gastrointestinales
posible estudiar cómo desaparecen los reactivos y HNO3 450mL Inhalación:
cómo aparecen los productos finales o, lo que es produce
lo mismo, saber cuándo la reacción ha acabado estornudos,
(Cases, et-al, 1988). ronquera,
laringitis,
La cromatografía en columna es quizás el método Contacto con ojos:
más general, utilizado para la separación, a la vez Produce irritación,
que para la purificación, de diferentes compuestos dolor, lagrimeo,
orgánicos que se encuentren en estado sólido o erosión de la
líquido (Harvey, et-al, 2002). córnea e incluso,
ceguera.
Materiales y Reactivos: Contacto con la
piel: Causa
Material Cantidad Capacidad quemaduras
Vaso químico 6 100 mL severas, la piel
Espectrofotómetro 1 adquiere un color
Columna de 1 amarillo y se
cromatografía presenta dolor y
Probeta 1 5mL dermatitis.
50mL Ingestión: Este
capilares 6 ácido es muy
Cámara 1 corrosivo y puede
cromatografica destruir los tejidos
Placas de capa 2 gastrointestinales.
fina H2SO4 Una gota Inhalación:
Lámpara UV 1 Irritación, causa
quemaduras, tos.
Ingestión:
Reactivo Cantidad Toxicidad Corrosivo
K2CrO7 2mL Inhalación: Contacto con la
provoca piel: causa
ulceración de la quemaduras
nariz. severas y
Contacto con ojos: profundas.
Causa quemaduras En contacto con
serias. los ojos es muy
KMnO4 2mL Inhalación: Causa corrosivo
irritación de nariz Ninhidrina Nocivo en caso de
y tracto ingestión.
respiratorio Provoca irritación
superior, tos, cutánea.
dolor de cabeza, Provoca irritación
náusea y vómito. ocular grave
Hexano: acetato 90mL Inhalación: Causa Procedimiento:
de etilo tos y cansancio a
concentraciones A. Cromatografía de Columna
bajas
Contacto con ojos:
Insertar un pedazo de fibra de vidrio en el fondo de
Causa irritación y
enrojecimiento. la columna y llene dicha columna hasta la mitad con
Contacto con la HNO3 0.5M. Con cuidado, vierta la alúmina en la
piel: Causa columna de tal forma que se empaque
irritación y uniformemente.
enrojecimiento.
Ingestión: Causa
náusea, vómito e El absorbente debe alcanzar cerca de 12 cm de altura,
irritación de la si la columna es de 1.5 cm de diámetro. En caso que
garganta sea mayor ajustar a la altura. Asegúrese de que el
NH4OH: etanol 90mL Ingestión causa nivel de ácido nítrico que justamente sobre el nivel de
quemaduras en el la alúmina.
sist. Digestivo.
contacto con los
ojos irritación Usando una pipeta graduada, añada 1.0 mL de la
intensa, mezcla de dicromato/permanganato en la parte
Contacto con la superior de la columna. Ajuste el flujo de elución.
piel provoca
Cuando el nivel del líquido alcance la alúmina, añada
severas
HNO3 0.5M en pequeñas porciones hasta que la
quemaduras.
primera banda coloreada haya sido eluída.
Inhalación
extremadamente
irritante al
respirar. Cambie el eluyente a H2SO4 0.1M y colecte porciones
Acetona Inhalación: En de 4 ml. Tome las muestra de dicromato y determine su
forma de vapor, absorbancia en el calorímetro. Repita el paso anterior
causa irritación de con las fracciones de permanganato.
ojos nariz y
tráquea.
Contacto con ojos: B. Cromatografía capa fina
En forma de
vapor, los irrita
causando lagrimeo
y fluido nasal;
Contacto con la
piel: Un contacto
prolongado y
constante con la
piel provoca
resequedad,
agrietamiento y
dermatitis.
Ingestión: Causa
irritación gástrica,
dolor y vómito.
 Cuadro 3. Placas con sustrato y el eluyente
Prepare 90 ml de los Disuelva las NH4OH- Etanol 7:3
eluyentes Hexano: muestras de farmaco Sustratos Recorrido del Recorrido del
acetato de etilo 1:1 y y los aminoácidos en Sustrato (cm) Solvente (cm)
NH4OH: etanol 7:3 acetona. Aspirina 4.3 5
Ibuprofeno 3 5
Ácido 4 5
Coloque en las cámaras Aplicar con el capilar Salicílico
cromatografícas la sobre la placa de Cisteína 5.2 5.8
mezcla de los eluyentes capa fina 3 Triptófano 5.5 5.8
y una tira de papel filtro aplicaciones de la
para saturarla. muestra. Fenilamina 5.2 5.8

Cuadro 4. Placas con sustrato y el eluyente

Hexano-Acetato de Etilo
Al terminar colocarlas Esperar unos 10 a 30
dentro de la cámara, min. sacar la placa Sustratos Recorrido del Recorrido del
teneindo cuidado que cuando el eluyente Sustrato (cm) Solvente (cm)
el borde inferior haga este por encima de la Aspirina 5.1 9.8
contacto con el línea cercana del Ibuprofeno No arrastro 9.8
eluyente. borde superior.
Ácido 5.5 9.8
salicílico
Colacar las placas en cisteína No arrastro 9.9
el horno por 2 min y Marcar las manchas Triptófano No arrastro 9.9
revelar con la obtenidas en el Fenilamina No arrastro 9.9
lámpara UV y las cromatograma y
que contienen medir el Rf en cada
aminoácidos con la mancha. Rf de las muestras teniendo como eluyente
ninhidrina. NH4OH- Etanol 7:3
a. Aspirina:
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 𝐴
Cálculos y Resultados 𝑅𝑓 =
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 𝐵
4.3
Cuadro 1. Cromatografía en Columna con HNO3 𝑅𝑓 =
5
Alúmina Muestra Absorbancia 𝑅𝑓 = 0.86
Básica Muestra 1 2.137
Muestra 2 0.618 b. Ibuprofeno
Neutra Muestra 1 1.948 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 𝐴
𝑅𝑓 =
Muestra 2 0.799 𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 𝐵
Acida Muestra 1 2.313 3
Muestra 2 0.625 𝑅𝑓 =
5
𝑅𝑓 = 0.6
Cuadro 2. Cromatografía en Columna Con H2SO4 c. Ácido salicílico
Alúmina Muestra Absorbancia 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 𝐴
𝑅𝑓 =
Neutra Muestra 1 0.625 𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 𝐵
Muestra 2 0.427 4
𝑅𝑓 =
Básica Muestra 1 2.644 5
Muestra 2 1.505 𝑅𝑓 = 0.8
Acida Muestra 1 1.645 d. cisteína:
Muestra 2 1.578 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 𝐴
𝑅𝑓 =
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 𝐵
5.2
𝑅𝑓 =
5.8
𝑅𝑓 = 0.89
 0
e. Triptófano 𝑅𝑓 =
9.9
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 𝐴 𝑅𝑓 = 0
𝑅𝑓 =
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 𝐵
5.5
𝑅𝑓 = Discusión de Resultados:
5.8
𝑅𝑓 = 0.94 El término cromatografía es difícil de definir de
f. Fenilamina: manera rigurosa debido a que el nombre ha sido
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 𝐴 aplicado a varios sistemas y técnicas. No obstante,
𝑅𝑓 = todos estos métodos tienen en común el uso de una
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 𝐵
5.2 fase estacionaria y el de una fase móvil. Los
𝑅𝑓 = componentes de una mezcla son llevados a través de
5.8
𝑅𝑓 = 0.89 la fase estacionaria por la fase móvil, y la
Rf de las muestras teniendo como eluyente Hexano- separación se basa sobre las diferencias de las
Acetato de Etilo velocidades de migración entre los componentes de
a. Aspirina: la fase móvil. (Skoog, D. et al. 2008). La
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 𝐴 experiencia de laboratorio tuvo como objetivo
𝑅𝑓 = principal conocer la cromatografía en columna y
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 𝐵
5.1 capa fina como técnica de separación de mezclas de
𝑅𝑓 = sustancias, sus características y los factores que en
9.8 ella intervienen. Se realizó la cromatografía en
𝑅𝑓 = 0.52
columna, donde se insertó un pedazo de fibra de
vidrio en el fondo de la columna, se vertió la
b. Ibuprofeno
alúmina ácida en la columna de tal forma que se
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 𝐴
𝑅𝑓 = empaco uniformemente, se dejó el absorbente a 10
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 𝐵 cm de altura y se llenó dicha columna hasta cubrir
0 la alúmina con HNO3 0.5, se añadió 1.0 mL de la
𝑅𝑓 =
9.8 mezcla de Dicromato/permanganato en la parte
𝑅𝑓 = 0 superior de la columna con una pipeta granulada,
c. Ácido salicílico luego; se ajustó el flujo de elución, cuando el nivel
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 𝐴 del líquido alcanzo la alúmina se añadió HNO3
𝑅𝑓 =
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 𝐵 0.5M en pequeñas porciones hasta que la primera
5.5 banda coloreada haya sido eluída, se cambió el
𝑅𝑓 =
9.8 eluyente a H2SO4 0.1M y se tomó las muestra de
𝑅𝑓 = 0.56 dicromato, Se realizó la medición de la absorbancia
d. cisteína: en el espectrofotómetro de absorción de luz uv-
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 𝐴 visible delas muestras de concentración 0.1M de
𝑅𝑓 =
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 𝐵 KMnO4/ K2Cr 2O7. Se tomaron 6 mediciones de la
0 mezcla con HNO3, el cual extrajo el color morado
𝑅𝑓 =
9.9 del Permanganato y 6 mediciones con H2SO4 el
𝑅𝑓 = 0 cual extrajo el color amarillo del Dicromato. De las
6 mediciones que se tomaron para ambas soluciones
e. Triptófano donde 2 eran para la alúmina acida, 2 para la básica
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 𝐴 y 2 para la neutra. Se logró observar que la alúmina
𝑅𝑓 =
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 𝐵 acida logro extraer mayor absorbancia para el
0 permanganato la cual fue de 2.313 A mostrando su
𝑅𝑓 = espectro en la región violeta, mismo color del
9.9
𝑅𝑓 = 0 compuesto que era morado. Y su punto más bajo
f. Fenilamina: también en la alúmina acida a 0.6185(ver cuadro 1)
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 𝐴 en una longitud de 540nm. Para el Dicromato el
𝑅𝑓 = valor más alto se obtuvo en la alumina basica, 2,644
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 𝐵
A, mostrando su espectro en la región amarilla,
mismo color del compuesto que era naranja. Y su
punto más bajo en la alumina neutra a 0.427A en
una longitud de 378,5nm (ver cuadro 2)
La retención que ocurre del soluto de la fase
estacionaria, se debe generalmente a la diferencia de
polaridades entre las fases estacionarias y la móvil,
promoviendo que el soluto se reparta entre ellas
según su coeficiente de distribución. De esta manera
al separarse una mezcla que contenga solutos con
polaridad distinta, y por lo mismo coeficiente de
distribución distintos, la retención será diferente
para cada uno de ellos. (UNAM, 2007) Mientras
realizábamos la experiencia pudimos notar que el
soluto en la alumina acida demoro mucho mas
tiempo en eluir que los solutos presentes en las otras
aluminas esto se debe a que las aluminas se utilizan
para eluir diversos compuestos: La alúmina WB, o
alúmina básica, es la forma habitual, y es adecuada
para la cromatografía de bases y compuestos
neutros que son estables a los álcalis, así como
también a los alcoholes, hidrocarburos, esteroides,
alcaloides y pigmentos naturales Puede causar
reacciones de polimerización, condensación y
deshidratación. Ni la acetona ni el acetato de etilo
deben usarse como eluyentes, este último sujeto a
saponificación.
La Alúmina WN, o alúmina neutral, (menos activa
que la forma básica) es útil para la separación de
aldehídos, cetonas, quinonas, ésteres, lactonas y
glucósidos.
La alúmina WA, o la alúmina ácida, es el tipo más
débil y menos utilizado. Es útil para la separación
de ácido pigmentos y ácidos fuertes.
Debido a que cada uno de los Componentes de una
mezcla establecerá interacciones diferentes con la
fase estacionaria y la móvil, serán transportados a
diferentes velocidades y se conseguirá su
separación. Así, de manera similar a otros tipos de
cromatografía, las diferencias en las velocidades de
desplazamiento a través del medio sólido se
corresponden con diferencias en los tiempos de
elución por la parte inferior de la columna para cada
uno de los componentes de la muestra original, que
se recogerán en fracciones diferentes. (Abbott, D
1973).
La espectroscopia de absorción es la medida de la
cantidad de luz absorbida por un compuesto en
función de la longitud de onda de la luz. En general,
e irradia una muestra con una fuente de luz y se
mide la cantidad de luz transmitida a varias
longitudes de onda, utilizando un detector y
registrando el fenómeno en un gráfico. Al contrario
que en los ensayos químicos, la mayoría de las
técnicas espectroscópicas no son destructivas, es
decir, no destruyen las muestras durante el análisis;
se pueden realizar diferentes tipos de espectros sin
pérdida o perdiendo muy poco de muestra.
. Luego se realizó la cromatografía en capa fina,
donde se preparó 90 ml de los eluyentes Hexano:
acetato de etilo 1:1 y NH4OH: etanol 7:3, se
disolvieron las muestras de fármaco: Ibuprofeno,
Aspirina y ácido salicílico; y los aminoácidos:
fenilalanina, triptófano y cisteína en acetona, luego;
se colocó en las cámaras cromatografías la mezcla
de los eluyentes y una tira de papel filtro para
saturarla de los vapores de los eluyentes, se aplicó
con el capilar sobre la placa de capa fina 3
aplicaciones de cada muestra y al terminar se
colocó dentro de la cámara, teniendo cuidado que el
borde inferior hiciera contacto con el eluyente,
seguido; se esperó unos 10 a 30 min, se sacó la
placa del eluyente cuando estuvo por encima de la
línea cercana del borde superior, se llevó al horno
por 2 minutos, se revelaron con la lámpara UV y
los aminoácidos con la ninhidrina, se marcaron las
manchas obtenidas en el cromatograma
La muestra a analizar se deposita cerca de un
extremo de una lámina de plástico o aluminio que
previamente ha sido recubierta de una fina capa de
adsorbente (fase estacionaria). Entonces, la lámina
se coloca en una cubeta cerrada que contiene uno o
varios disolventes mezclados (eluyente o fase
móvil). A medida que la mezcla de disolventes
asciende por capilaridad a través del adsorbente, se
produce un reparto diferencial de los productos
presentes en la muestra entre el disolvente y el
adsorbente (Gary, C. 1981).
Referencias:
 Abbott, D. (1973). Introducción a la
cromatografía. Madrid, España: Alhambra.
 Harvey, D., & Rodríguez, L. C.
(2002). Química analítica moderna.
México: McGraw-Hill.
 Cases, M. V., & Hens, A. G.
(1988). Técnicas analíticas de separación.
Madrid, España: Reverté.
 Christian, G. D. (1981). Química analítica.
México: Limusa.
 UNAM (2007). Técnicas Cromatografías.
Recuperado de:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/
M.Cromatogrficos_6700.pdf