reparación [ 3 - 5 ].
Se considera que la autofagia juega un
Papel de la autofagia en la
diferenciación de megacariocitos y la
formación de plaquetas
Abstracto
La autofagia es un proceso biológico conservado para la
digestión y el reciclado de constituyentes citoplasmáticos en
células eucarióticas. La autofagia puede desencadenar la
muerte celular o promover la supervivencia celular después
de varias formas de estrés. Los papeles emergentes de la
autofagia en la megacariopoyesis, la trombopoyesis y la
función plaquetaria se han descubierto utilizando no solo
modelos genéticos in vitro e in vivo, sino también en
observaciones clínicas de la estructura autofágica en
pacientes con trastornos trombocitopénicos. La inhibición de
la autofagia en etapas tempranas de diferenciación de
megacariocitos parece impedir la maduración de
megacariocitos, reducir la formación de plaquetas y afectar la
función plaquetaria, mientras que la deficiencia autofágica en
megacariocitos maduros da lugar a una activación y función
plaquetaria anormal sin cambiar el tamaño y número de
plaquetas. Por otra parte, la inducción de autofagia por
rapamicina en megacariocitos exhibió beneficios terapéuticos
sustanciales en pacientes con púrpura trombocitopénica
inmune (PTI). Esta mini-revisión es para resaltar los avances
recientes en la comprensión de la regulación de la autofagia
en la megacariopoyesis, la trombopoyesis y la función
plaquetaria para cerrar la brecha entre la autofagia y la
fisiopatología de los megacariocitos / plaquetas.
Palabras clave: Autofagia, megacariopoyesis,
trombopoyesis, plaquetas
Introducción
La autofagia es un proceso catabólico conservado en células
eucariotas. Durante la autofagia, los componentes
citoplasmáticos dirigidos se secuestran mediante vesículas
de doble membrana llamadas autofagosomas, que luego
entregan su contenido a los lisosomas para su degradación o
reciclaje [ 1 ]. Desde su descubrimiento en la década de
1960, la autofagia se ha investigado de manera floreciente y
se ha vinculado ampliamente a diversos procesos biológicos
y condiciones patológicas. De acuerdo con los diferentes
medios de transporte y sustratos, la autofagia se puede
dividir en tres formas distintas llamadas macroautofagia,
microautophagia y autofagia mediada por chaperonas, de las
cuales la macroautophagia consiste en pexofagia, mitofagia y
autofagia no selectiva [ 2 ].
El papel crucial de la autofagia se han visto implicados en la
inanición de nutrientes, la infección, la muerte celular y la
papel principalmente protector en la respuesta al estrés
celular mediante la eliminación de proteínas agregadas y el
reciclaje de productos degradados [ 6 ]. En la otra cara de la
moneda, la autofagia puede desencadenar la muerte celular
programada bajo ciertas condiciones [ 7 ]. El proceso
completo de autofagia, que incluye activación, identificación
de carga, formación de autofagosomas, fusión y degradación
de lisosomas, está mediado por una serie de genes
relacionados con la autofagia (ATG) [ 8].] En las últimas
décadas, las funciones pleiotrópicas de la autofagia en el
desarrollo de los hemocitos se han caracterizado en la
eritropoyesis, así como en los cánceres de la sangre
[ 9 , 10 ]. Recientemente, se ha demostrado que la autofagia
es indispensable para la megacariopoyesis y la función
plaquetaria normales utilizando modelos animales con
deleción específica de linaje de ATG [ 11 , 12 ]. Además, la
acumulación de evidencia de autofagia se ha observado
hasta ahora en ITP, síndromes mielodisplásicos y leucemia
mielógena crónica desde el descubrimiento inicial de
vacuolas autofágicas putativas de megacariocitos en la
década de 1970 [ 13 - 15] En la presente revisión, primero
discutiremos brevemente las bases moleculares de la
maquinaria autofágica y luego pasaremos a una regulación
más específica de la megacariopoyesis y la trombopoyesis
mediante moduladores autofágicos, seguidos por la
relevancia clínica de la regulación autofágica y los trastornos
trombocitopénicos.
Señalización Autophagic
El proceso de autofagia fue descubierto inicialmente por
Porter et al en 1962 a partir de células hepáticas tratadas con
glucagón, en las que se observaron lisosomas que contienen
otros orgánulos [ 16 ]. Otros descubrimientos en la respuesta
a lesiones y el reciclaje / degradación de los constituyentes
celulares condujeron a la invención del término "autofagia"
por parte de de Duve [ 17 ]. Entre todos los tres tipos de
autofagia identificados, macroautophagy es la vía canónica
que ha sido más ampliamente estudiada [ 18 ]. Los orgánulos
dañados se someten a secuestro por autophagosomes de
doble capa que posteriormente entregan su contenido para la
hidrólisis ácida y la degradación mediante la fusión con
lisosomas [ 2] Microautophagy, hasta cierto punto, se
asemeja a macroautophagy a pesar de engullir directo de
constituyentes intracelulares por lysosomes [ 19 ]. Por otro
lado, la autofagia mediada por chaperonas opera de una
manera bastante diferente que implica el complejo que
contiene hsc70 con alta selectividad para los sustratos [ 20 ].
Los genes relacionados con la autofagia (ATG) son los
reguladores clave de la señalización
autofágica. Originalmente clonado de la levadura
Saccharomyces cerevisiae, se han identificado los
homólogos de ATG en células de mamíferos, y se revelaron
sus funciones [ 21 , 22 ]. En los mamíferos, la privación
nutricional, los factores de crecimiento y el estrés oxidativo
pueden regular la autofagia a través de la proteína quinasa
activada por AMP (AMPK) y el objetivo mamífero de la
rapamicina (mTOR) [ 23 , 24 ]. En el contexto de la inanición,
la mayor proporción de AMP / ATP activa AMPK, que luego
induce la autofagia de protección celular a través de la
inhibición de mTORC1 [ 25]] UNC-51 como quinasa 1
(ULK1), proteína de interacción de la familia quinasa de
adhesión focal de 200 kD (FIP200), ATG101 y ATG13 forman
un complejo proteico con mTORC1 que es un inhibidor de la
autofagia [ 26 ]. El aumento de la formación de este complejo
después de la desfosforilación de ATG13 inducida por el
estrés metabólico o la rapamicina promueve la autofagia
[ 27 ]. De manera similar, el UKL1 activado fosforila Beclin-1,
que forma un complejo con ATG14L, P150 y fosfatidilinositol
3-quinasa VPS34 (Vsp34), para iniciar la formación de
autophagosomes [ 28 ]. Una vez que se activa Vsp34, la
generación de fosfatidilinositol 3-fosfato (PtdInS (3) P)
reclutará la proteína 2 interactiva con fosfoinosítido de WD
(WIPI2) en la superficie de la fagophore mediante unión con
ATG16L [ 29] Al mismo tiempo, ATG12 y ATG5 se unen a
ATG16L formando así un complejo de tipo E3, que luego se
une a ATG3 y promueve la nucleación de
autophagosome. Por otro lado, ATG3 activado se une
covalentemente a LC3, que está lipidada por ATG16L y
conjuga con PE en la membrana de los autophagosomes
[ 30 ]. Durante este paso, p62 identifica organelos específicos
como un receptor de atraque de carga, así como guía LC3 en
autophagosomes [ 31 ]. Eventualmente, los autofagosomas
se fusionan con los lisosomas ácidos para formar
autolisosomas, a partir de los cuales las moléculas LC3
externas se conversan a la forma escindida por ATG4,
mientras que la LC3 interna y los cargamentos sufren
degradación [ 32 ].
Recientemente, se han reconocido los roles de la autofagia
en la hematopoyesis. Varios estudios demuestran que la
autofagia está implicada tanto en la megacariopoyesis como
en la eritropoyesis, por ejemplo, en la diferenciación de
reticulocitos a glóbulos rojos, así como en la trombopoyesis
[ 11 , 33 , 34]. La inducción de la autofagia se asocia con la
muerte celular y la diferenciación en la línea celular de
leucemia mieloide crónica, cuando se ha probado la eficacia
de la inducción de la autofagia en los trastornos
trombocitopénicos [ 35 , 36 ].
Megacariopoyesis y trombopoyesis
La megacariopoyesis es un proceso complicado mediado por
diferentes células hematopoyéticas y factores
extracelulares. Las células madre hematopoyéticas están
comprometidas con el linaje de megacariocitos, incluida la
colonia progenitora mixta (CFU-Mix) o el progenitor mieloide
común (CMP), unidad formadora de colonias-granulocitos-
eritrocitos-monocitos-megacariocitos (CFU-GEMM),
progenitor MK / eritroide mixto célula (MEP), megacariocitos
unitarios formadores de colonias (CFU-MK), megacariocitos
unitarios formadores de estallidos (BFU-MK) y, finalmente,
megacariocitos maduros diferenciados [ 37]] La maduración
de los MK se caracteriza por la endomitosis, la maduración
citoplásmica y el ensamblaje de todos los componentes
necesarios para la producción de plaquetas funcionales. Los
megacariocitos maduros se pueden identificar por
marcadores de superficie celular específicos, incluidos CD41,
CD61 (integrina αIIbβ3), CD42 (glucoproteína Ib) y
glicoproteína V [ 38 ]. El compromiso de los factores de
transcripción, las citoquinas y el estrés extracelular promueve
sinergicamente la maduración de los megacariocitos
[ 39 ]. Los factores de transcripción, como SCL, GATA1,
GATA2, NF-E2, permiten el desarrollo de células
progenitoras megacariocíticas / eritroides [ 40]] FOG1
(ZFPM1) regula la actividad transcripcional de GATA-1 y
contribuye a la diferenciación temprana de megacariocitos,
cuando NFE2 y SCL-1 regulan la diferenciación posterior de
megacariocitos y la producción de plaquetas
[ 41 , 42 ]. Además, PU.1 y Fli-1 también guían la
diferenciación de los megacariocitos de las células
progenitoras [ 43 ]. Por el contrario, C-myb (MYB) se
equilibra con GATA1 jugando un papel inhibidor en la
megacariopoyesis [ 44 ]. Además de los factores de
transcripción, la diferenciación de los megacariocitos también
está ajustada por las hormonas, especialmente la
trombopoyetina. Por interacción con su receptor c-MPL, la
trombopoyetina actúa como potenciador canónico de la
diferenciación de megacariocitos y trombopoyesis [ 45].] La
activación de señales aguas abajo consistentes en MAPK,
PI3K y STAT, trabaja en conjunto para promover la
megacariopoyesis [ 46 ]. Los nichos de médula ósea
proporcionan plataformas para el desarrollo de
megacariocitos y plaquetas mediante el suministro de
gradientes de oxígeno, quimiocinas e infraestructuras para la
migración de megacariocitos [ 47 ]. Además, la migración de
megacariocitos está regulada por factor-1α (SDF-1) derivado
de células estromales, angiopoyetina 1 (Ang-1) y TPO, etc.
SDF-1α navega megacariocitos terminales hacia el endotelio
vascular, cuando la activación de VEGFR1 promueve SDF -1
migración mediada de megacariocitos a los nichos
vasculares y aumenta la producción de plaquetas
[ 48 ]. Recientemente, los gradientes de especies reactivas
de oxígeno también están implicados en la maduración de
megacariocitos [ 49]
Al madurar, los megacariocitos adquieren todos los
componentes celulares necesarios para la trombopoyesis,
que se demarcan en partículas micro anucleadas antes del
desprendimiento [ 50 ]. Mientras tanto, la membrana celular y
el esqueleto celular, que incluyen tubulina y actina, se
someten a una reorganización extensa, lo que permite la
protrusión de proyecciones pseudopodiales masivas
denominadas proplaquetas [ 51 , 52 ]. Eventualmente, estos
proplatletes se despachan de megacariocitos con sus
constituyentes, dando lugar a plaquetas circulantes. El envío
de plaquetas desde megacariocitos maduros se denomina
trombopoyesis. Es de destacar que se ha demostrado que la
apoptosis está implicada en la etapa final de la liberación de
plaquetas [ 53 ].
Roles de la autofagia en la maduración de los megacariocitos
y la función plaquetaria
Existe evidencia sustancial que respalda los roles de la
autofagia en la megacariopoyesis. En la década de 1970, los
estudios TEM (microscopio electrónico de transmisión) de
pacientes con síndrome carcinoide identificaron estructuras
parecidas al autofagosoma dentro de las plaquetas pero no a
los megacariocitos, lo que indica la posible implicación del
aumento de la autofagia [ 13 ]. Un estudio posterior en perros
con quemaduras reveló la presencia de autofagocitosis en
megacariocitos, que se consideró como un posible proceso
de reciclaje de células [ 54 ]. La evidencia de autofagia
activada también se nota en la PTI, que exhibe amplias
vacuolas citoplásmicas que representan la muerte celular
programada. Sin embargo, estas vacuolas observadas
parecen ser de membrana única en lugar de membranas
dobles que se asemejan a autofagosomas [ 15 ].
Se ha informado que el inhibidor de la autofagia, mTORC1,
regula tanto los pasos iniciales como los tardíos del
desarrollo de megacariocitos [ 55 ]. Además, la inhibición de
mTORC1 con rapamicina induce la autofagia, disminuye el
tamaño y la ploidía de los megacariocitos e impide la
maduración de los megacariocitos a través de una vía
dependiente de p21 y ciclina D3 [ 56 ]. Estos hallazgos
sugieren un papel importante de la autofagia en la regulación
del desarrollo de megacariocitos. Es de destacar que tanto
mTORC1 que contiene la proteína TOR asociada a la
rapamicina (Raptor) como mTORC2 que contienen un
compañero insensible a la rapamicina de Raptor (Rictor)
están implicados en la regulación del ciclo celular [ 57].] Sin
embargo, puede ser difícil concluir que la autofagia regula
directamente la megacariopoyesis debido a la no
especificidad del enfoque farmacológico, como la
rapamicina. En ese caso, se desarrollaron enfoques
genéticos usando ratones knock-out para enfatizar el papel
de la autofagia. En consecuencia, un estudio reciente
demostró que la abrogación de la autofagia de la etapa de
células madre por knockout hematopoyético de ATG7
conduce a megacariopoyesis, trombopoyesis y hemostasia
deterioradas, produciendo plaquetas disfuncionales más
grandes pero menos [ 11 ]. Sin embargo, la eliminación de
ATG7 en megacariocitos maduros y plaquetas utilizando el
método de la tripulación impulsada por PF4 solo da como
resultado una hemostasia anormal, mientras que el número y
el tamaño de las plaquetas permanecen sin cambios. La
investigación adicional demostró la agregación anormal y el
embalaje del gránulo de carga en estas plaquetas [12 ]. A la
luz de estos hallazgos, es probable que la autofagia sea
indispensable para la etapa temprana del desarrollo de
megacariocitos, y también es necesaria para la función
plaquetaria normal ( Figura 1 ).
Siendo una línea celular de leucemia mielógena crónica
(CML), K562 conserva la capacidad de diferenciación
megacariocítica, proporcionando así una herramienta
favorable para estudiar la megacariopoyesis. Un grupo
informó que la inhibición de la autofagia en las células K562
por la caída de los genes autofágicos impide sustancialmente
la megacariopoyesis [ 58 ]. Consistentemente, el tratamiento
con lapatinib induce la muerte celular autofágica y la
diferenciación megacariocítica en las células K562, que
pueden inhibirse mediante la caída de ATG7 o la aplicación
de 3-MA [ 35 ]. Por el contrario, otro grupo mostró que
aunque la autofagia se observó fácilmente durante la
inducción de la diferenciación megacariocítica por 12-O-
tetradecanoil-forbol-13-acetato (TPA), no parece ser
necesaria para la diferenciación celular [ 59] Estudios
posteriores en células MO7e mostraron que la progresión del
ciclo y la división nuclear están reguladas por mTORC1,
mientras que el tamaño celular y la muerte celular estaban
controlados por mTORC2 [ 57 ]. La relación entre la autofagia
y la megacariopoyesis debe interpretarse con cautela, ya que
la rapamicina utilizada en este estudio también puede
suprimir las vías P70S6K y 4E-BP. Además de los
megacariocitos, otros estudios en plaquetas confirmaron la
presencia de proteínas autofágicas y mostraron que se
requería la autofagia dependiente de clase III PtdIns3K para
la función plaquetaria normal [ 60 ].
Ir:
Observaciones finales
La autofagia, como proceso biológico conservado, ha sido
bien estudiada y se ha asociado con cáncer, trastornos
metabólicos, enfermedades autoinmunes y daño por
radiación. La autofagia alterada está implicada en células
hematopoyéticas y sanguíneas indicadas por estudios
morfológicos. Dado que la mayoría de las pruebas de
autofagia hasta ahora provienen de células cancerígenas, la
función explícita de la autofagia en megacariocitos y
plaquetas aún no se ha dilucidado. Afortunadamente,
estudios genéticos recientes descubrieron el papel
indispensable de la autofagia tanto en la megacariopoyesis
como en la función plaquetaria. Además, los resultados de un
ensayo clínico sobre ITP sugieren que la rapamicina es
efectiva para tratar la trombocitopenia inmune inducida. Por prometedor para la enfermedad trombocitopénica, por
lo tanto, la autofagia dirigida puede producir un enfoque ejemplo, en MDS o secundaria a quimioterapia / radioterapia.

CELULA MADRE MEGACARIOCITO

HEMATPOYETICA PLAQUETA

Megacariopoyesis disfunción
deteriorada plaquetaria

Figura 1
La inhibición de la autofagia en células madre hematopoyéticas afecta la megacariopoyesis
y la función plaquetaria. La inhibición de la autofagia mediante la deleción genética
de Atg7 en ratones en diferentes etapas del desarrollo del linaje afecta la diferenciación de
megacariocitos, así como la función plaquetaria. MK-PPF, megacariocito formador de
plaquetas. Atg7 KO, Atg7 nocaut.