Instituto Tecnológico Superior de

Acatlán de Osorio
SEP SEIT TNM
DIVISIÓN DE LA CARRERA DE INGENIERÍA EN INDUSTRIAS
ALIMENTARIAS

“Tesis Profesional”

Proyecto
“PRODUCCIÓN DE XILITOL A PARTIR DE UNA MEZCLA DE HIDROLIZADO DE BAGAZO
DE SORGO DULCE Y DE CAÑA DE AZÚCAR CON Candida tropicalis IEC5-ITV”

Que para obtener el título de:

Ingeniero en Industrias Alimentarias
Presenta
Wilibaldo Martínez Pichardo
10120015

Acatlán de Osorio, Pue., Abril de 2015

 CONTENIDO

I. INTRODUCCIÓN.......................................................................................... 1

II. OBJETIVOS…............................................................................................ 3
2.1 Objetivo General.……………………………………………………... 3
2.2 Objetivo Específico.…………………………………………………... 3
2.3 Hipótesis.………………………………………………...................... 3

III. REVISIÓN DE LITERATURA..................................................................... 4

3.1 Xilitol.………………………………………………............................ 4
3.2 Propiedades fisicoquímicas.………………………………………… 5
3.3 Propiedades terapéuticas.…………………………………………… 7
3.3.1 Prevención de caries.……………………………………… 8
3.3.2 Metabolismo independiente de la insulina.……………… 8
3.3.3 Fijación de calcio.………………………………………….. 9
3.3.4 Acción antimicrobiana.……………………………………. 10
3.4 Aplicaciones del xilitol.……………………………………………….. 11
3.5 Método de producción de xilitol.……………………………………... 13
3.5.1 Proceso físico-químico.…………………………………… 13
3.5.2 Proceso biotecnológico…………………………………… 15
3.6 Factores que afectan e influyen en la producción de xilitol.………. 18
3.7 Microrganismos empleados.………………………………………… 18
3.7.1 Levaduras.………………………………………………..... 19
3.7.1.1 Requerimientos nutricionales de levaduras.…. 20
3.7.1.2 Metabolismo de la xilosa en levaduras.………. 22
3.8 Propiedades del medio de cultivo.…………………………………... 23
3.9 Desechos agroindustriales…………………………………………... 25
3.9.1 Bagazo de caña…………...……………………………….. 26
3.9.1.1 Composición del bagazo de caña.……………. 26
3.9.2 Bagazo de sorgo dulce……………………………………. 28
3.10 Hidrólisis.……………………………………………….................... 30

iii
IV. MATERIALES Y MÉTODOS…………………………………………………. 33
4.1 Localización del lugar experimental.………………………………... 33
4.2 Características del material biológico………………………………. 33
4.3 Medios de cultivo……………………………………………………… 34
4.3.1 Medio de conservación.…………………………………… 34
4.3.2 Medio de activación.………………………………………. 34
4.3.3 Medio de adaptación y fermentación.……………………. 35
4.4 Tratamientos para la caracterización de las cinéticas.……………. 35
4.5 Diseño y unidad experimental.………………………………………. 38
4.6 Variables de estudio y muestreo.……………………………………. 38
4.7 Análisis estadístico.………………………………………………...... 38
4.8 Manejo experimental del proceso de hidrólisis.……………………. 39
4.9 Condiciones de fermentación.……………………………………….. 41
4.9.1 Precultivo.………………………………………………...... 41
4.9.2 Cultivo por lote.…………………………………………….. 41
4.10 Métodos de análisis.………………………………………………..... 42
4.10.1 Cuenta celular.…………………………………………… 42
4.10.2 Viabilidad celular.………………………………………… 43
4.10.3 Análisis de sustratos y productos.………………………. 44
4.10.4 Monitorización del pH.…………………………………… 45
4.11 Análisis de datos experimentales.………………………………….. 46
4.11.1 Cálculos de rendimientos y productividades del xilitol... 46

V. RESULTADOS Y DISCUSIÓN………………………………………………... 47
5.1 Optimización de la hidrólisis ácida.………………………………….. 47
5.2 Caracterización de las cinéticas fermentativas.……………………. 50
5.2.1 Cálculos de los rendimientos y productividades.……….. 60
5.3 Análisis de varianza para la producción de xilitol.…………………. 62

VI. CONCLUSIONES……………………………………………………………… 64
VII. RECOMENDACIONES………………………………………………………. 65
VIII. BIBLIOGRAFÍA………………………………………………………………. 66
IX. ANEXOS………………………………………………………………………... 71

iv
 RESUMEN

El xilitol es un polialcohol utilizado como edulcorante de cinco átomos de carbono

con amplia aplicación en diferentes tipos de industrias, principalmente en la
alimentaria y farmacéutica, debido a sus importantes propiedades terapéuticas
tales como anticariogénico, metabolismo independiente de la insulina,
favorecimiento de la fijación de calcio y acción antimicrobiana.

A partir de los años 70´s, su producción se lleva a cabo a través de un proceso

químico, sin embargo debido a su alto costo de producción se han realizado
estudios sobre una nueva alternativa mediante la vía biotecnológica. Entre los
principales factores que intervienen en la producción de éste proceso son el tipo de
microorganismos empleado, las propiedades y composición del medio de cultivo y
las condiciones de fermentación, así como el material lignocelulósico empleado; a
la fecha los estudios realizados sobre la producción biológica del xilitol se refieren
a sistemas de cultivo intermedio también llamados por lote.

El objetivo de este trabajo es producir xilitol utilizando como medio de cultivo un

hidrolizado obtenido a partir de una mezcla de bagazo de sorgo dulce y de caña de
azúcar con la levadura Candida tropicalis IEC5-ITV, procedente de los ingenios
azucareros del estado de Veracruz y aislada en el Instituto Tecnológico de
Veracruz.

En la literatura consultada no se tiene conocimiento del efecto y los resultados que

brinda utilizar como medio de cultivo el hidrolizado obtenido a partir de la mezcla
de bagazo de sorgo dulce y de caña de azúcar, dándole, a éstos desechos
agroindustriales un valor agregado, al producto final obtenido.

v
Se procedió de manera experimental a realizar la optimización de las condiciones
de hidrólisis ácida para obtener un licor con una alta concentración de xilosa,
resultando como mejor condición para el tratamiento la siguiente: 40 min en la
autoclave, una concentración de 2.0% v/v H2SO4 y una relación de bagazo de sorgo
dulce/bagazo de caña de azúcar de 1:1.5 (1 g de BSD/1.5 g de BCA) manejando
constantes la temperatura a 125 °C con una presión de 15 psi y la relación
sólido/líquido de 1:4 (1 g de bagazo/4 mL de solución H2SO4).

Los resultados de la optimización se utilizaron para caracterizar el lote del medio

de cultivo que se empleó para las cinéticas fermentativas, las cuales fueron
enriquecidas con sales que les proporcionaría nutrientes a la levadura, entre estos
compuestos se encuentran la CO(NH2)2, KH2PO4, MgSO4.7H2O y el extracto de
levadura, con la finalidad de obtener mejores rendimientos y productividades en la
producción de xilitol.

Los resultados muestran que el mejor rendimiento y productividad se encontraron

en el medio de cultivo que contenía la mezcla de CO(NH2)2 y extracto de levadura,
obteniendo una concentración de xilitol de 19.063 g/L, así como un rendimiento
(YP/S)= 0.520 g/g y una productividad (QP)= 0.227 g/L.h, mientras que el medios de
cultivo sólo (testigo) que no contenían ninguno de los nutrientes mostró bajos
resultados, por lo que se deduce que el empleo de sales en el medio de cultivo
ayuda a la levadura en su metabolismo para obtener mejores rendimientos y
productividades de xilitol, de igual manera se estandarizó el tiempo en el que se
comenzó a producir el xilitol oscilando alrededor de las 24 horas, mientras que el
consumó aproximado del sustrato se llevó dentro de las 84 horas después de iniciar
cada una de las cinéticas fermentativas.

Palabras claves: xilitol, bagazo, levadura, hidrolisis acida, nutrientes, producción.

vi
 ABSTRAC

The xylitol is a polyol used as a sweetener of five carbon atoms with a wide
application in different industries, mainly in the food and pharmaceutical industries,
due to their important therapeutic properties such as anticariogenic independent
insulin metabolism, favoring the settle of calcium and antimicrobial action.

From the 70´s, it´s production went through a chemical process however due to its
high cost of production studies were accomplished on a new alternative way through
biotechnology. Among the main factors involved in the production of this process
are the type of microorganisms used, the properties and composition of the mid
cultivation and fermentation conditions and the lignocellulosic material used up; to
date studies made on the biological production of xylitol are refered to intermediate
cultivation systems also called batch.

The aim of this work is to produce xylitol using as a way of cultivation a hydrolyzate
obtained from a mixture of sweet sorghum bagasse and sugarcane with yeast
Candida tropicalis IEC5-ITV, from sugar mills in the state of Veracruz and isolated
in the Technological Institute of Veracruz.

In the literature there is no knowledge of the effect and the results offered use as a
way of cultivation hydrolyzate obtained from the mixture of bagasse sweet sorghum
and sugarcane, giving, them an agro-industrial waste added value in xylitol
production.

vii
The process past trough an experimental way to perform the optimization of the
conditions of acid hydrolysis to obtain a liquor with high concentrations of xylose,
resulting as best condition to treat the following: 40 min in the autoclave, a
concentration of 2.0% v/v H2SO4 and a relation of sweet sorghum bagasse /
sugarcane bagasse 1:1.5 (1 g SSB - 1.5 g SB) handling constant temperature
125 °C, with a pressure of 15 psi and the solid-liquid relation of 1:4.

The optimization results were used to characterize the batch way of cultivation that
was used for fermentative kinetics, which were enriched with salts providing
nutrients to the yeast, among these compound are CO(NH2)2, KH2PO4,
MgSO4.7H2O and yeast extract, in order to get better yields and productivity in the
production of xylitol.

The results show that the best performance and productivity were found in the
middle of the mixture containing CO(NH2)2 and yeast extract, obtaining a
concentration of xylitol 19.063 g/L, just like performance (YP/S)= 0.520 g/g and a
productivity (QP)= 0.227 g/Lh, while the way of cultivation only (witness) that did not
contain any of the nutrients showed low results, it´s considered that the use of salt
in the mid cultivation helps the yeast in it´s metabolism to get better yields and
productivity of xylitol, standardized the time in which began to produce the xylitol
ranging around 24 hours, while consumption approximated of the substrate was
within the 84 hours after start each a of the kinetic fermentative.

Keywords: xylitol, bagasse, yeast, acid hydrolysis, nutrients, production.

viii
 I. INTRODUCCIÓN

El xilitol es un edulcorante de gran importancia industrial debido a que posee un

poder edulcorante equivalente a la sacarosa, por lo que a partir de los años 70´s se
ha tratado de proporcionar una vía alternativa al proceso industrial químico que se
utiliza para la producción del edulcorante. Esto debido a que es un producto de alto
valor comercial con una gran variedad de aplicaciones en la industria alimentaria,
terapéutica y farmacéutica. Al ser obtenido mediante la reducción de la xilosa, su
proceso de producción utiliza como materia prima los residuos lignocelulósicos
agroindustriales, tales como el bagazo de sorgo dulce, el bagazo de caña de azúcar
y los desechos de la industria del maíz, entre otros.

A nivel industrial el xilitol se produce por vía físico-química, mediante un proceso

que comprende diversas etapas de purificación, el empleo de catalizadores de alto
costo, así como de presiones y temperaturas elevadas, hacen que todo esto tenga
un impacto en el precio del producto final, encareciéndolo. Debido a esto recientes
estudios proponen como alternativa a la producción de xilitol por medio de la
conversión biológica.

El metabolismo de levaduras es la alternativa más viable que se ha estudiado por

diferentes autores desde 1988 hasta en la actualidad; ellos han establecido las
condiciones de operación para el establecimiento del proceso biotecnológico para
la producción de xilitol, sin embargo la producción de xilitol por la conversión
biológica se encuentra limitada por diferentes factores como son el tipo de
microorganismo empleado, metodología de hidrolisis de los materiales
lignocelulósicos, productos y cantidad de los mismos generados durante la
hidrolisis, modo de operación del equipo, entre otros.

1
El presente trabajo aborda el estudio de la producción de xilitol a partir de una
mezcla de hidrolizado de bagazo de sorgo dulce y bagazo de caña de azúcar por
medio de una fermentación (cinética) en un sistema de lote utilizando como
levadura a Candida tropicalis IEC5-ITV, así como la obtención de las mejores
condiciones para generar un hidrolizado con una alta concentración de xilosa
empleando un diseño Box-Behnken; el cual se empleó para la caracterización de
las cinéticas fermentativas en la producción del xilitol.

La primera parte del trabajo incluye una revisión bibliográfica sobre las
características y propiedades del xilitol, métodos de producción, factores que limitan
a la conversión y los microorganismos capaces de llevar a cabo el proceso, con el
objetivo de brindar una perspectiva amplia de los conocimientos que se han
generado en torno al tema. Posteriormente se muestran los materiales y métodos
empleados en el desarrollo del proyecto. Finalmente, los resultados obtenidos de
acuerdo a lo determinado en los objetivos del trabajo, así como la discusión de los
mismos; seguido de las conclusiones del trabajo y recomendaciones para
posteriores investigaciones.

2
 VI. CONCLUSIONES

Las mejores condiciones para obtener una alta concentración de xilosa durante la
hidrólisis ácida es a 40 min en autoclave, con una concentración de 2.0% v/v H2SO4
y una relación de bagazo de sorgo dulce/bagazo de caña de azúcar de 1:1.5
manteniendo constantes la temperatura a 125 °C, con una presión de 15 psi y la
relación sólido - líquido de 1:4.

El tratamiento T9 que contenía hidrolizado suplementado con urea (CO(NH2)2) y

extracto de levadura, resulto superior al resto de los tratamientos evaluados de
acuerdo a los resultados obtenidos en la variable de estudio de la producción de
xilitol obteniendo un concentración de xilitol de 19.063 g/L, así como un rendimiento
de 0.520 g/g y una productividad de 0.227 g/L.h de xilitol, deduciendo que la
levadura es capaz de producir xilitol en el medio hidrolizado generado a partir de la
mezcla de bagazo de sorgo dulce y bagazo de caña de azúcar, estableciendo las
mejores condiciones de producción de xilitol empleando ambos bagazos.

El tratamiento T13 sería la mezcla ideal para producir xilitol de manera industrial y
comercial, debido a que este tratamiento no contiene extracto de levadura, el cual
disminuye el precio de la producción del xilitol principalmente por que el costo de
este compuesto es elevado.

3
 VII. RECOMENDACIONES

Con el objeto de darle continuidad al proceso de producción de xilitol a partir de

hidrolizado obtenido de la mezcla de bagazo de sorgo dulce y de caña de azúcar
se recomienda:

Continuar con el estudio de la producción de xilitol, ya que es un producto de gran

potencial por sus múltiples aplicaciones, además de que el empleo del bagazo de
sorgo dulce y caña de azúcar le da un valor agregado por tratarse de desechos
agroindustriales.

Evaluar el efecto del oxígeno en un biorreactor empleando el hidrolizado obtenido

a partir de la mezcla de bagazo de sorgo dulce y caña de azúcar para observar el
efecto de la reducción del oxígeno en la producción del xilitol.

Realizar fermentaciones lote-alimentado y continuo en un reactor utilizando el

medio de cultivo para mejorar la producción de xilitol, así como los rendimientos
productividades de la levadura sean superiores.

Plantear estrategias para elevar la productividad del sistema, por ejemplo

estudiando la recirculación de células, o también utilizar un sistema multietapas con
el fin de agotar al máximo la concentración del sustrato.

4
 VIII. BIBLIOGRAFÍA

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