Вы находитесь на странице: 1из 7

Studi tentang proses infeksi dapat mengungkapkan bagaimana mikroba mengeksploitasi tuan

rumah, dan dapat menerangi fungsi seluler host yang tidak dikenal. Patogen invasif telah berevolusi
strategi yang efisien untuk mempromosikan internalisasi mereka dalam sel inang normal non-
fagotitik. Bakteri yang disebut '' ritsleting 'hadir untuk menjamu molekul reseptor sel yang meniru
ligan endogen, sehingga menginduksi kaskade sinyal intraseluler tertentu yang pada akhirnya
menghasilkan polimerisasi aktin dan serapan. Di sini kami meninjau bagaimana patogen bakteri
Listeria monocytogenes masuk ke dalam sel, dan menyajikan serangkaian penelitian yang
mengungkapkan bahwa selain pengaturan ulang aktin bakteri ini mengeksploitasi mesin endocytosis
yang dimediasi clathrin bersama dengan septins, sebuah elemen sitoskeleton baru. Tantangannya
sekarang adalah untuk menguraikan bagaimana semua komponen ini mengatur sendiri untuk
memungkinkan masuk ke dalam sel-sel non-fagikotik yang normal. Motil Sel. Sitoskeleton 66: 816–
823, 2009

PENGANTAR

Bakteri invasif menginduksi sendiri oleh sel inang nonfagositik menggunakan dua mekanisme yang
berbeda yang disebut sebagai '' ritsleting '' dan 'pemicu' '[Cossart dan Sansonetti, 2004; Pizarro-
Cerda dan Cossart, 2006] (Gbr. 1A). Bakteri ritsleting menyajikan molekul yang meniru ligan endogen
untuk menjadi tuan reseptor sel, dan hasil internalisasi selanjutnya dari pembentukan membran
plasma di sekitar mikroba yang masuk. Bagaimana Listeria monocytogenes masuk ke sel-sel non-
fagositik telah diteliti dengan sangat rinci, dan sekarang dianggap sebagai paradigma dari model
ritsleting [Cossart dan Sansonetti, 2004]. Mekanisme ritsleting secara mekanis dan morfologis
berbeda dari mekanisme pemicu. Bakteri pemicu seperti Salmo- nella typhimurium atau Shigella
flexneri langsung menyuntikkan efektor ke sitosol sel inang melalui sistem sekresi tipe III yang
membajak protein seluler yang terlibat dalam

penataan ulang atau pengurutan sitoskeleton [Galan dan Wolf-Watz, 2006; Ogawa et al., 2008].
Akibatnya, bakteri ini pada dasarnya masuk sel inang dalam proses yang mirip dengan
macropinocytosis. Dari catatan, perbedaan antara ritsleting dan jalur pemicu menjadi kurang jelas, di
mana tergantung pada jenis sel, bakteri ritsleting telah diamati untuk mempromosikan rooting aktin
dan membran yang dramatis; sebaliknya, bakteri yang memicu dapat mematuhi sel, menyarankan
mereka juga memiliki strategi yang ditetapkan untuk menghubungi reseptor sel host sebagai awal
untuk masuk. Dalam tinjauan ini, kami berfokus pada model Listeria dan pelajaran yang dipetik dari
studinya.

Model Listeria: Gambaran Umum


L. monocytogenes adalah patogen oportunistik karena biasanya menghasilkan penyakit pada
individu immunocompromised [Vazquez-Boland et al., 2001; Khelef et al.,
2006; Hamon et al., 2006]. Penyakit ini disebabkan oleh kemampuan Listeria untuk melintasi tiga
hambatan penghalang: penghalang usus, penghalang darah, dan penghalang maternal-janin. Hal ini
juga karena kapasitas Listeria untuk menahan pembunuhan intraseluler ketika fagositosis oleh
makrofag, dan untuk menyerang berbagai jenis sel non-fagositik. Internalisasi Listeria mengarah
pada pembentukan vakuotipe fagkotis yang cepat melisis, melepaskan Listeria di sitosol sel yang
terinfeksi. Di sini replikasi bakteri dan juga dapat bergerak, intra dan inter-seluler, melalui
polimerisasi aktin sel inang. Dengan demikian, masuknya bakteri ke dalam sel dan replikasi
intracytosolic mereka menunjukkan kejadian awal untuk penyebaran jaringan, dan strategi untuk
meniru di lingkungan yang dilindungi, oleh karena itu mungkin menghindari berbagai pertahanan
host antibakteri.
L. monocytogenes menggunakan berbagai protein, dan khususnya anggota keluarga protein yang
dikenal sebagai internal, untuk menempel dan menyerang sel pejamu. Interalins adalah anggota
superfamili Leucine Rich Repeat (LRR), kelompok beragam protein yang dicirikan oleh tandem array
LRR [Bierne and Cossart, 2007]. Dua protein invasi utama adalah internalin (InlA) dan InlB. Reseptor
untuk InlA adalah E-cadherin [Mengaud et al., 1996], dan reseptor untuk InlB adalah gC1qR / p32
(reseptor untuk bagian globular dari komponen komplemen C1q), receptor faktor Met / hepatosit
(HGF) recep - tor, dan glikosaminoglikan [Braun et al., 2000; Shen et al., 2000; Jonquie`res et al.,
2001].

Jalur InlB / Met Path of Listeria Entry


Dalam sel di mana E-cadherin tidak hadir, Listeria masuk melalui interaksi dengan Met, kinase tirosin
dan reseptor untuk faktor pertumbuhan hepatosit (HGF) [Shen et al.,
2000]. Met milik reseptor tirosin kinase
(RTK) keluarga, dan terlibat dalam berbagai fungsi seluler termasuk hamburan, invasi, proliferasi,
morfogenesis, dan angiogenesis [Birchmeier et al., 2003; Benvenuti dan Comoglio, 2007]. Met juga
terlibat dalam tumorigenesis ketika Met selesai diekspresikan atau diaktifkan secara konstitusional.
Setelah mengikat ligan (yaitu HGF), sel biasanya berhenti memberi sinyal ke hilir Met melalui
endositosis yang bergantung pada ligan dan selanjutnya degradasi reseptor yang diaktifkan [Bache
et al., 2004].

Serangkaian penelitian telah menunjukkan bahwa InlB berperilaku baik sebagai faktor pertumbuhan
dan invasin karena efisien menginduksi pengaturan ulang aktin [Bierne dan Cossart, 2002]

(Gbr. 1B). Stimulasi oleh InlB memicu jalur klasik 3 phosphoinositide (PI) 3-kinase [Ireton et al.,
1996], melalui perekrutan Gab1, Cbl, dan Shc pada residu fotosintesis dari bagian intrasitoplasmik
Met. Bagaimana jalur ini kemudian mengaktifkan protein G kecil Rac dan Cdc42 saat ini tidak
diketahui, meskipun

organisasi membran dalam mikro-domain sangat penting untuk aktivasi Rac mungkin dengan
mengendalikan distribusi 30 -PI yang dihasilkan oleh PI 3-kinase [Seveau et al., 2007]. Rac dan Cdc42
kemudian aktifkan WAVE dan / atau N-WASP, yang kemudian aktifkan kompleks Arp2 / 3 untuk
menggerakkan polimerisasi aktin.

Detail struktural dari interaksi antara InlB dan Met baru-baru ini telah dijelaskan oleh studi ko-
kristalisasi [Niemann et al., 2007] (Gambar 1A). Antar-

Yang menarik, interaksi antara InlB dan Met tidak secara ketat meniru HGF / Met. InlB berinteraksi
dengan Met melalui wilayah LRR-nya yang tidak ada di HGF, dan ini merupakan mimikri fungsional
yang digunakan Listeria untuk mengeksploitasi properti dari reseptor sel inangnya [Cossart et al.,
2003].

Keterlibatan Endositosis Clathrin-Mediated


Mesin di Entry Bakteri

Endositosis ditandai dengan internalisasi molekul dari permukaan sel menjadi kompartemen
membran intraseluler. Beberapa jalur internalisasi telah dideskripsikan, termasuk jalur endocytic
klasik, clatasin mediated dan rute non-klasik, clathrin-independent yang sering bergantung pada
lipid-raft [Conner and Schmid, 2003]. Vesikula yang dilapisi clathrin muncul dari polimerisasi diri
clathrin ke dalam kisi-kisi di sekitar tunas vesikula [Sorkin, 2004]. Clathrin dalam vesikula dilapisi
sebagai triskelion dengan tiga rantai berat (192 kDa) dan tiga cahaya (25-29 kDa) yang mengikat satu
sama lain dalam kisi polyhedral [Fotin et al., 2004]. Temuan penting mengenai mekanisme yang
mendasari invasi bakteri telah menjadi penemuan baru-baru ini bahwa clathrin, sebuah molekul
yang hanya berpikir untuk terlibat dalam internalisasi makromolekul, terlibat dalam masuknya
Listeria [Veiga dan Cossart, 2005, 2006; Veiga et al., 2007].

Peran untuk Clathrin Selama Masuknya Listeria

dan Patogen Ritsleting lainnya

Mengingat peran ubiquitination selama endositosis clathrin-dimediasi [Haglund et al., 2003], dan
fakta bahwa reseptor tirosin kinase lainnya yang ubiquitinated pada endositosis, laboratorium kami
bertanya apakah Met adalah ubiquitinated setelah inkubasi sel dengan InLB dimurnikan, atau pada
infeksi sel dengan Listeria [Veiga dan Cossart, 2005]. Memang, Met adalah monoubiquitinated atas
stimulasi InlB dalam mode Cbl-dependent, dan dimurnikan InlB menginduksi endositosis Met. Hasil
ini menunjukkan bahwa masuknya InemB-dimediasi oleh Listeria dapat membajak jalur endocytic
yang dimediasi clathrin.

Knockdown fungsional oleh siRNA dari beberapa protein yang terlibat dalam endositosis
mengungkapkan bahwa protein ciri endositosis, termasuk clathrin dan dynamin, sangat penting
untuk entri partikel yang dimediasi InB. Dari sini disimpulkan bahwa setelah interaksi InlB dengan
Met, Listeria-terikat Met akhirnya diinternalisasi dalam sel oleh endositosis clathrin-mediated
mengungkapkan bahwa cla- thrin dapat menginternalisasi objek jauh lebih besar dari yang
diantisipasi sebelumnya (Gbr. 2). Apakah endositosis yang dimediasi clathrin terbatas pada entri
InlB-dependent, atau apakah ini merupakan mekanisme yang tersebar luas dari masuknya bacial?
Pertanyaan ini diatasi menggunakan bakteri ritsleting dan pemicu yang berbeda [Veiga et al., 2007].
Semua bakteri zipper diuji (yaitu Yersinia pseudotuberkulosis, Staphyloccocus aureus, dan Listeria
innocua mengekspresikan InlA) merekrut clathrin dan dynamin di tempat masuk, dan siRNA
melawan beberapa protein dari mesin endocytic mencegah internalisasi. Sebaliknya, clathrin tidak
colocalize dengan salah satu bakteri pemicu yang diuji (yaitu Salmonella dan Shigella), dan
percobaan siRNA tidak memiliki pengaruh yang signifikan pada entri mereka. Dengan demikian,
eksploitasi jalur endometrium yang dimediasi clathrin dapat dianggap sebagai mekanisme yang luas
dari masuknya bakteri, tetapi terbatas pada bakteri ritsleting.

Jalur kedua masuknya Listeria ke dalam sel, jalur InlA / E-cadherin, juga mengeksploitasi mekanisme
endositosis [Bonazzi et al., 2008, 2009].
The InlA / E-Cadherin Pathway of Listeria Entry

Sambungan sel-sel epitel dijaga oleh protein adhesi dan aktin sitoskeleton yang mendasarinya. E-
cadherin adalah 120 kDa transmembran glikoprotein yang termasuk keluarga kadherin klasik dan
menengahi pembentukan persimpangan persimpangan [Halbleib dan Nelson, 2006]. Ketika InlA
berinteraksi dengan E-cadherin, ia memulai serangkaian peristiwa untuk menstimulasi polimerisasi
actin dan entri bakteri (Gambar 1B). b- dan a-catenins direkrut ke situs entri bakteri oleh ekor
cytoplasmic E-cadherin [Lecuit et al., 2000]. ARHGAP10, protein pengaktif GTPase yang baru-baru ini
diidentifikasi, berinteraksi dengan a-catenin untuk memungkinkan rekrutmennya [Sousa et al.,
2005]. Myosin VIIa dan ligan vezatinnya [Sousa dkk., 2004] juga diperlukan untuk internalisasi InlA
yang dimediasi Listeria. The non-RTK Src juga diaktifkan, sehingga perekrutan Src substrat, cortactin,
yang pada gilirannya mengaktifkan Arp2 / 3 untuk mendorong polimerisasi aktin. Karya terbaru telah
menunjukkan bahwa Src juga memulai modifikasi pasca-translasi e-cadherin berturut-turut yang
diperlukan untuk perekrutan ligase ubiquitin Hakai dan ubiquitination E-cadherin [Bonazzi et al.,
2008]. Entri InlA-dimediasi menggunakan caveolin, protein yang biasanya terlibat dalam endositosis
independen reseptor, untuk mengelompokkan E-cadherin pada tahap awal proses entri, sedangkan
ubiquitination dari E-cadherin sangat penting untuk internalisasi yang dimediasi clathrin dari Listeria.
. Sebagai alternatif, entri Listeria melalui jalur InlA dapat dimediasi oleh caveolin saja [Bonazzi et al.,
2008].

Detail molekular dari interaksi antara

InlA dan manusia E-cadherin telah disediakan oleh studi kristalografi X-ray [Schubert et al., 2002;
Wollert et al., 2007] (Gambar 1A) dan telah menunjukkan bahwa InlA berinteraksi dengan E-cadherin
melalui LRRs yang berbeda dari interaksi E-cadherin / E-cadherin homotypic. Meskipun perbedaan
pengakuan ini, sekarang diterima bahwa internalisasi InlA-dimediasi mengeksploitasi molekul hilir
yang sama digunakan oleh sel mamalia dalam remodelling aktin-tergantung dari membran plasma
selama pembentukan persimpangan adherens [Bonazzi et al., 2009]. Sama seperti interaksi antara
InlB dan Met tidak secara struktural meniru bahwa HGF / Met, InlA dan E-cad-herin tidak secara
struktural meniru bahwa dari E-cadherin / E-cadherin.

Peran Cytoskeleton di Clathrin-Mediated

Endocytosis

Sudah lama berpikir bahwa endositosis yang dimediasi clathrin adalah aktin-independen, tetapi
penelitian yang dilakukan dalam ragi telah menunjukkan bahwa aktin juga terlibat dalam endositosis
[Engqvist-Goldstein dan Drubin, 2003]. Menariknya, dalam kasus Listeria, polimerisasi aktin yang
diperlukan untuk entri yang dimediasi oleh Listeria InlB mengikuti rekrutmen klathrin [Veiga et al.,
2007]. Bagaimana clathrin direkrut saat ini tidak diketahui, tetapi adaptor clathrin AP-1 juga penting
untuk entri Listeria [Pizarro-Cerda et al., 2007]. Ada kemungkinan bahwa clathrin menengahi entri
dengan merekrut dynamin yang pada gilirannya berinteraksi dengan cortactin untuk menginduksi
polimerisasi aktin melalui Arp2 / 3. Hubungan molekuler antara endositosis clathrin-mediated dan
sitoskeleton masih harus ditentukan.
Studi tentang masuknya bakteri ke dalam sel nonfagositik telah menyebabkan penemuan yang
bertentangan dengan dogma yang mapan, clathrin mungkin memiliki peran selain internalisasi
makromolekul atau partikel kecil. Dengan demikian, clathrin berpotensi menjadi protein yang jauh
lebih fleksibel daripada yang sebelumnya dipertimbangkan [Pauly dan Drubin,2007]. Pekerjaan di
masa depan harus fokus pada pemahaman yang lebih baik tentang dinamika perakitan mantel
clathrin, dan untuk mengidentifikasi protein yang menghubungkan lapisan clathrin ke aktin
sitoskeleton pada antarmuka patogen-tuan.

Septins: Komponen Novel dari Cytoskeleton

Septins semakin diakui sebagai komponen baru dari sitoskeleton [Spiliotis dan Nelson,2006]. Septins
adalah protein pengikat GTP dari 30–65 kDa diperlukan dalam banyak organisme untuk penyelesaian
penglihatan sel [Kinoshita, 2003a, 2003b; Spiliotis dan Nelson,2006; Weirich et al., 2008]. Dalam sel
mamalia, penelitian menunjukkan bahwa septins memiliki fungsi seluler lain termasuk peran dalam
dinamika membran, fusi vesikel peristiwa, dan perekrutan sinyal kompleks pada membran plasma
[Beites et al., 1999; Hsu et al., 1998; Joo et al., 2005; Kinoshita, 2006; Huang et al., 2008]. Meskipun
terlibat dalam beberapa penyakit manusia [Hall dan Russell, 2004], fungsi molekuler septins kurang
dipahami, sebagian karena mereka adalah protein yang sangat sulit untuk dipelajari.

Empat belas septins telah diidentifikasi pada manusia, dan diklasifikasikan ke dalam empat kelompok
yang berbeda atas dasar identitas urutan [Kinoshita, 2003a; Weirich dkk.,2008]. Septins dari
kelompok yang berbeda mempolimerisasi menjadi kompleks protein hetero-oligomer, membentuk
filamen, dan dianggap sebagai sistem sitoskeletal yang tidak konvensional. tem karena mereka
berhubungan dengan membran seluler, filamen aktin, dan mikrotubulus [Kinoshita, 2006; Spi- liotis
dan Nelson, 2006]. In vitro, kumpulan kompleks septin memiliki kapasitas intrinsik untuk
berorganisasi menjadi cincin sekitar 0,6 lm dalam diameter luar [Kinoshita et al., 2002]. Struktur
kristal kompleks SEPT2-SEPT6-SEPT7 baru-baru ini dipecahkan dan mengungkapkan bahwa septins
membentuk filamen non-polar tidak seperti aktin dan mikro-tubulus [Sirajuddin et al., 2007].
Meskipun signifikansi dari wawasan struktural ini [Barral dan Kinoshita, 2008; Weirich et al.,2008],
masih harus ditentukan bagaimana septins berfungsi sebagai komponen yang berbeda dari
sitoskeleton.

Septins Memodifikasi Masuk Bakteri Menjadi Sel Inang

Berbeda dengan peran aktin yang sudah cukup lama selama proses infeksi, fungsi septin selama
invasi mikroba belum pernah diteliti sebelumnya. Kami awalnya mengidentifikasi SEPT9 yang terkait
dengan fagosoma InlB-bead dalam sel mamalia [Pizarro-Cerda et al.,2002], dan menyelidiki peran
septins yang berbeda di Infeksi Listeria [Mostowy et al., 2009b]. Dengan menginfeksi jalur sel
manusia, kami menemukan perekrutan filamen septin selama masuk Listeria. Secara mencolok,
septins muncul sebagai 0,6 lm kerah yang menyerupai geometri struktur cincin yang diamati pada
kuncup induk ragi [Kinoshita,2006; Weirich et al., 2008]. Cincin Septin sama dideteksi di tempat
masuk untuk rangsangan lain dan memicu bakteri yang diuji, menunjukkan bahwa perekrutan septik
adalah kejadian umum di mana pun ada polimerisasi aktin (Gambar 3A dan 3B). Kami kemudian
menggunakan siRNA untuk menetapkan bahwa SEPT2, mitra pengikat SEPT9 pusat untuk
pembentukan kompleks dan filamen septin, secara signifikan berkontribusi pada proses masuk
bakteri. Secara khusus, kita dapat mengungkapkan bahwa SEPT2 memodulasi entri InlB / Dimediasi
dari L. monocytogenes, dan dapat menunjukkan efek deplesi SEPT2 pada interaksi InlB dengan
reseptor hostnya [Mostowy et al., 2009b]. Sebagai alternatif, SEPT11, suatu septin yang dianggap
dapat diganti oleh anggota kelompok SEPT6 lainnya [Ono et al., 2005], terungkap sebagai
dispensable untuk masuknya InLB / Met-dimediasi dari Listeria dan sinyal kaskade sebagai respons
terhadap stimulasi Met oleh InlB [Mostowy et al., 2009a]. Selain itu, percobaan siRNA bahkan telah
menunjukkan bahwa SEPT11 membatasi proses internalisasi. Diambil bersama, temuan ini
membedakan peran septin yang unik dalam mengatur efisiensi invasi bakteri reseptor-mediated
[Mostowy et al., 2009a].

Mekanisme dimana septins memodulasi properti dari reseptor Met belum jelas. Immunopre-

eksperimen pengendapan pada sel HeLa dirangsang atau tidak dengan InLB yang dimurnikan
menggunakan antibodi untuk SEPT9 atau Met tidak menunjukkan interaksi langsung antara Met dan
SEPT9 (pengamatan kami yang tidak dipublikasikan). Namun, sangat sedikit mitra interaksi langsung
telah diidentifikasi untuk septins [Drees et al., 2001], mungkin karena mitra yang mengikat septin
berinteraksi dengan konformasi spesifik dari rakitan septum tingkat tinggi dan tidak dengan septins
individu atau kompleks septik [Barral dan Kinoshita , 2008].

Dengan Protein Mana melakukan Septin Berinteraksi

Selama Masuk Bakteri?

Mekanisme yang mendasari perekrutan septik di tempat masuk partikel, dan lebih umum bagaimana
septins berinteraksi dengan membran, sitin rangka aktin, dan berpotensi mantel clathrin,
memerlukan penyelidikan lebih lanjut. Pretreatment sel-sel dengan cytochalasin D, inhibitor
farmakologis dari polimerisasi aktin, menghasilkan pencegahan perekrutan aktin dan septik di lokasi
invasi Listeria [Mostowy et al., 2009b]. Dengan demikian, akumulasi septins pada cangkir fagositik
terkait erat dengan akumulasi aktin, meskipun secara tidak diketahui [Huang et al., 2008; Mostowy
dkk., 2009b] (Gbr.1B). Sekarang penting untuk menentukan bagaimana septin memainkan peran
dalam jalur polimerisasi actin, atau jika aktivasi jalur ini mengatur perekrutan septik. Bagaimana
mantel clathrin dan peristiwa pensinyalan lainnya dapat mempengaruhi perakitan septik untuk
mengatur efisiensi masuk bakteri adalah arah penelitian yang menarik. Pada akhirnya, itu akan
informatif untuk menganalisis perekrutan spatio-temporal baik dari protein endositik dan
sitoskeleton. molekul di lokasi masuk patogen secara definitif menetapkan peran unik dari
komponen sitoskeleton yang berbeda dalam endositosis yang dimediasi clathrin.

Perspektif

Karena koeksistensi yang panjang dengan tuan rumah mereka, patogen telah berevolusi untuk
secara maksimal memanfaatkan mesin seluler tuan rumah untuk menyerang dan bereplikasi. Studi
kami pada entri bakteri telah mengungkapkan fungsi protein seluler host yang tidak terduga. Seperti
yang ditunjukkan dalam ulasan ini, Listeria baru-baru ini membantu menemukan fungsi baru untuk
clathrin dan septins dalam sel mamalia. Sekarang penting untuk menyelidiki bagaimana clathrin
direkrut, dan protein apa yang menghubungkan lapisan clathrin dengan aktin sitoskeleton pada
antarmuka patogen-host. Adakah peran yang berbeda untuk aktin dan septin, dan septins yang
berbeda, pada entri bakteri, dan lebih khusus lagi pada endocyinosis yang dimediasi clathrin? Jelas
bahwa pendekatan pencitraan resolusi tinggi akan memainkan peran kunci dalam penyelidikan ini.

UCAPAN TERIMA KASIH

Para penulis mengucapkan terima kasih kepada Dr. Matteo Bonazzi untuk membaca kritis naskah ini.
S.M. didukung oleh fellowship jangka panjang dari Canadian Institutes of Health Research dan
Canadian Foundation Louis Pasteur. P.C. adalah peneliti penelitian internasional dari Howard Hughes
Medical Institute.