Universidad Católica

Nuestra Señora de la Asunción

Sede Guaira

Trabajo Grupal de Microbiología

Integrantes:
 Marlene Ruiz Díaz
 Belén Smith
 Tania Galeano
 Shirley Sánchez

2018
 Ureasa

Los microorganismos que tienen la enzima ureasa hidrolizan la urea, liberan amoniaco y

producen un cambio de color rojo-rasado en el medio.

Diferencias entre el caldo urea de Stuart y el agar urea de Christensen, el caldo de Stuart tiene

muchos buffers de sales de fosfato a, pH 6,8. el microorganismo de prueba debe formar cantidades

bastante grandes de amoniaco antes de que el sistema buffer se vea superado y el pH del medio se

eleve por encima de 8,0 para producir un cambio de color en el indicador. Por lo tanto, es un caldo

casi selectivo para especies Proteus.

Agar Urea
• Sembrar con asa recta, solamente en superficie

• En agar urea se determina la capacidad de un organismo de producir Ureasa y desdoblar la urea,

formando dos moléculas de amoniaco.

• La lectura se efectúa después de 18 a 24 horas de incubación a 37°.

 Fundamento

• El sustrato urea es una diamina del ácido carbónico, denominada carbamida.

• La hidrolisis de la urea está es catalizada por la ureasa, la cual está relacionada con la

descomposición de los compuestos orgánicos.

• La ureasa es una enzima constitutiva ya que la sintetizan ciertas bacterias sin tener en cuenta

si hay o no el sustrato urea.

• El indicador de pH es rojo de fenol, el cual en alcalinidad vira a un color violeta indicando una

prueba POSITIVA.

• Si el color es amarillo indica una prueba NEGATIVA.

El agar urea de Christensen tiene menos buffers que el caldo urea de Stuart y contiene

peptonas y glucosa. Este medio enriquecido favorece el crecimiento de muchas especies de bacterias

que no pueden desarrollarse en el caldo de Stuart, y la menor capacidad de amortiguación permite la

detección de cantidades menores de amoniaco.

Los microorganismos que producen menos ureasa, como ciertas especies de Klebsiella,

Enterobacter, Brucella y Bordetella bronchiseptica, pueden ser evaluados con agar urea de

Christensen. Para muchas de estas especies, una reacción de ureasa positiva se detecta primero como

un cambio de color rosa a rojo en la porción inclinada del agar. El pico de flauta vira al principio al rojo

porque la reacción alcalina, que resulta del desdoblamiento de pequeñas cantidades de urea, aumenta

por las aminas formadas de la descarboxilacion oxidativa de los aminoácidos en la porción expuesta

al aire del medio.

 Fenilalanina Desaminasa

La determinacion de fenilalanina desaminasa es útil para la diferenciación inicial de especies

de Proteus, Morganella y Providencia de otros bacilos gramnegativo. Solo miembros de estos géneros

y algunos aislados relativamente del grupo Enterobacter tienen la enzima responsable de la

desaminacion oxidativa de fenilalanina. Se puede detectar ácido fenilpiruvico tan solo en 4 horas si se

utiliza un inoculo importante; sin embargo, en general se recomiendan 18 a 24 horas de incubación.

El medio de prueba de fenilalanina utiliza extracto de levadura como fuente de carbono y

nitrógeno. Los extractos de carne o los hidrolizados proteicos contienen cantidades variadas de

fenilalanina de producción natural que pueden conducir a resultados incongruentes. La aparición de

un color verde luego del agregado de un reactivo de cloruro férrico es inmediata y fácil de visualizar.
 Caldo Fenil Alanina – Malonato

Se determina la capacidad que tiene una bacteria de desaminar la fenilalanina y de utilizar el

malonato como única fuente de carbono.

La lectura se efectúa después de 18 a 24 horas de incubación a 37°. Primero se lee la prueba de

Malonato, si cambia a color azul indica que la prueba es POSITIVA, si continua de color verde la prueba
es NEGATIVA.

Para leer la prueba de la FENIL ALANINA agregar 10 gotas de CLORURO FÉRRICO al 10%.
MEZCLAR FUERTE. La aparición de un color verde oscuro indica que la prueba es FENIL ALANINA
POSITIVA. Si el color es amarillo castaño la prueba es NEGATIVA.

Fundamento

La bacteria puede utilizar el MALONATO DE SODIO como única fuente de carbono con la
consiguiente alcalinidad del medio. El indicador de pH es AZUL DE BROMOTIMOL que en alcalinidad
vira al color azul. Algunas bacterias tienen la capacidad de desaminar la Fenil Alanina produciendo
ACIDO FENIL PIRÚVICO por su actividad enzimática con la consiguiente acidez resultante. Este ácido
se visualiza al agregar el Cloruro Férrico.
 Producción de H2S
La capacidad de ciertas especies bacterianas para liberar azufre de los aminoácidos que
contienen azufre u otros compuestos en forma de H2S es una característica importante para su
identificación.

Las diferencias para detectar la producción de H2S en los diferentes medios son el resultado de
una alteración en una o más de estas condiciones. El H2S detectado en un medio puede no ser
detectado en otro, y es necesario conocer el sistema de prueba utilizado cuando se interpretan
protocolos de identificación.

El medio SIM es más sensible que KIA para la detección de H2S, debido tal vez a la consistencia
semisólida de KIA, la ausencia de hidratos de carbono para suprimir la formación de H2S y el uso de
hierro peptonizado como indicador.

Por otro lado, el KIA es más sensible que el agar triple azúcar-hierro porque se cree que la
sacarosa suprime los mecanismos enzimáticos responsables de la producción de H2S. El acetato de
plomo es el indicador más sensible y debe emplearse siempre que se evalúen bacterias que producen
solo pequeñas cantidades de H2S.

Lamentablemente, cuando se incorpora acetato de plomo en medios de cultivo, también inhibe

el crecimiento de muchas bacterias con requerimientos nutricionales especiales, sobre todo las que
pueden requerir un sistema de detección sensible.

Estos microorganismos pueden ser evaluados para La producción de H2S colocando una tira de
papel de filtro impregnada en acetato de plomo debajo de la tapa de un tubo de cultivo con medio
KIA. Así, es posible utilizar la extrema sensibilidad del indicador de acetato de plomo sin incorporarlo
en forma directa en el medio.

Con todos los sistemas de detección de H2S, el parámetro es un sulfuro insoluble de un metal
pesado, que produce un precipitado negro en el medio o en la tira de papel de filtro. Como debe haber
iones hidrógenos disponibles para la formación de H2S, el emblanquecimiento se observa primero en
los medios de prueba en los cuales la formación de ácido es máxima, es decir, a lo largo de la línea de
inoculación, dentro de las profundidades de los medios de agar inclinado o en los centros de las
colonias que crecen sobre las superficies de agar.