Introducción:

Existen variados tipos de medios de acuerdo a las necesidades nutricionales particulares. Al

preparar un medio de cultivo para el crecimiento de microorganismos debe tenerse en
consideración el proveer las fuentes de energía carbono, nitrógeno, fósforo, azufre y de los
factores de crecimiento que sean necesarios. En la formulación de los medios de cultivo
podemos distinguir entre medios definidos y complejos.

El medio definido provee los nutrientes requeridos para el crecimiento en la forma de

compuestos químicos de concentración conocida. Por ejemplo un medio definido para un
heterótrofo como Escherichia coli puede ser compuesto de NH4CL, MgSO4, KH2PO4 y glucosa.
Otros elementos como hierro, manganeso, y cobre están generalmente presentes como
contaminantes de los compuestos químicos en cantidades adecuadas para e crecimiento

El medio complejo contiene todos los nutrientes necesarios para el crecimiento de

microorganismos pero ellos están contenidos en ingredientes crudos, es decir, que no todos
los componentes del medio ni sus concentraciones exactas son conocidas. Ingredientes de este
tipo son los extractos de levadura, de carne, los hidrolizados de proteínas (peptona, triptona),
que constituyen fuentes de polipeptidos aminoácidos, vitaminas, algunos carbohidratos, etc.

De acuerdo al tipo de microorganismo que se quiera cultivar, los medios pueden clasificarse
como:

 Comunes: Permiten el crecimiento indiscriminado de todo tipo de microorganismos.

Ejemplo: Agar nutritivo, Caldo nutritivo, Agar gelatina, etc.
 Especiales: Son formulados teniendo en cuenta exigencias nutricionales diversas o
características bioquímicas determinadas. Pueden considerarse medios enriquecidos o
mejorados, selectivos y diferenciales.
o Medios mejorados o enriquecidos; Son aquellos a los que les agrega
determinadas sustancias nutritivas (sangre, yema de huevo, suero, etc.)y con
ello estimulan las exigencias nutritivas de ciertos microorganismos. Ejemplo:
Agar sangre, Caldo selenito, etc.
o Medios selectivos: se caracterizan porque se incluyen sustancias que
favorecen el crecimiento de determinadas especies y sustancias que inhiben el
crecimiento de otras no deseadas. Ej: Agar Salmonella Shigella, Agar Bismuto
sulfito, etc
o Medios de diferenciación: Ponen de manifiesto algunas propiedades
bioquímicas del microorganismo, como formación de gas, cambios de pH, etc.
Los cambios de pH se evalúan incorporando indicadores en el medio y se
determinan de acuerdo al rango en estudio. Medios azucarados como: caldo
glucosado, caldo lactosado, kligler, etc.

Frecuentemente los medios selectivos y diferenciales se deben usar juntos

para aislar e identificar especies a la vez. Algunos medios tienen incorporados
 los ingredientes convenientes para este doble propósito y resultan de gran
utilidad, y economía, Ej. Agar Manitol salado, Agar Mc Conkey.

Dependiendo de la técnica de cultivo elegida los medios mencionados anteriormente pueden

ser preparados como líquidos o solidos. Los medios liquidos contienen los nutrientes y otros
elementos en una solución acuosa que generalmente recibe el nombre de caldo, los medios
sólidos en una solución acuosa que generalmente recibe el nombre de caldo; los medios
sólidos contienen además un agente solidificante llamado agar que se utiliza para dar parte del
nombre del medio e identificarlo como sólido, El agar es un polisacárido complejo derivado de
una alga marina y posee características muy útiles para microbiología. Muy pocos organismos
degradan el agar de tal manera que aun después de un periodo se funde a 90°C o al punto de
ebullición del agua y permanece en estado liquido hasta que la temperatura desciende hasta
aproximadamente 40°C.

Una vez preparado el medio de cultivo liquido o solido debe ajustarse al pH adecuado,
disponerse en un recipiente de vidrio resistente al calor, (tubo o matraz) y protegerlo con un
tampón de algodón o material plástico que permita el intercambiod de gases yq que impida el
ingreso de otros microorganismos. eEl medio de cultivo así dispuesto debe ser esterilizado en
autoclave a 121°C bajo 15 lb de presión de vapor por 15 minutos. En caso de contener
ingredientes termolábiles, pueden emplearse otros métodos de esterilización como la
filtración.

Materiales

 Medios de cultivo o ingredientes deshidratados

 Agua destilada o desionizada
 Algodón, gasa
 Balanza
 Erlenmeyers de 250 y 500 ml
 Espátulas
 Lápiz marcador de vidrio
 Papel indicador de pH
 Papel aluminio y papel corriente no absorbente
 Pipetas graduadas
 Probetas de 100 ml
 Tubos de ensayo

Procedimiento

a) Caldo nutritivo (extracto de carne, 0.3% y peptona, 0.5%)medio complejo y común

1. Utilizando un trozo de papel aluminio pese cuidadosamente la cantidad de medio

deshidratado suficiente para preparar 100 ml de caldo nutritivo
2. Coloque el polvo en un Erlenmeyer de 250 ml limpio y secoy agregue
cuidadosamente el agua destilada medida en la probeta.
 3. Mezcle la preparación con movimientos giratorios hasta la completa disolución.
4. Elabore tapones de algodos para 15 tubos
5. Distribuya el medio líquido con una pipeta graduada a razón de 5ml en cada tuo
6. Coloque en los tubos los tapones de algodón evitando que queden flojos o muy
compactos
7. Disponga los tubos en un contenedor resistente al calor, envuélvalos con papel,
indentifiquelos con el nombre del medio, la fecha de preparación y el nombre de
la persona responsable en la elaboración
8. Esterilice los tubos con medio en autoclave a 121°C(15lb de presión) durante 15
minutos

b) Agar Nutritivo (extracto de carne 0.3%, peptona 0.5%, agar 1.5%) medio complejo y
común

1. Prepare 200 ml de caldo nutritivo. (repita los pasos 1,2,3 del procedimiento
anterior con la corrección en el peso para la nueva cantidad solicitada y en el
Erlenmeyer a usar, debe tener unas tres veces el volumen que tendrá el medio).
2. Agregue 3g de agar (1.5%) y lleve a licuar en baño de agua en ebullición hasta que
el medio luzca transparente a la luz
3. Elabore tapones de algodón para 16 tubos
4. Una vez licuado el medio, déjenlo enfriar ligeramente y distribúyanlo en los tubos
con una pipeta graduada. Prepare 6 tubos con 12 ml y 10 tubos con 7ml.
5. Repita los pasos 6, 7 y 8 del procedimiento anterior.
6. El medio restante debe ser acondicionado para su esterilización junto a lo anterior.

c) Agar Mc Conkey (Peptona 1.7%, Proteosa-peptona 0.3%, lactosa 1%permite

reconocer si lay Escherichi coli estos tres le dan la selectividad, sales biliares 0.15%
permite emulsificar la membrana, NaCl 0.5% osmosidad, agar 1.5%, rojo neutro
0.003%medio diferencial, cristal violeta 0,0001%inhibidor gram(+)). medio selectivo y
diferencial

d) Agar Manitol Salado híper selectivo para Stafilococus aureus (Extracto de carne 0.1%,
proteosa-peptona1%, NaCl 7.5%mata gram(-), manitol 1%, agar 1.5%, rojo fenol
0.0025%) medio selectivo y diferencial

1. Pese cuidadosamente la cantidad de medio deshidratado necesario para preparar

100 ml de cada uno. Observando la formulación de cada medio comprobará que
los pesos a realizar son distintos.
2. Coloque el polvo de cada medio en erlenmeyers de250 ml y llévenlos a licuar en
baño de agua caliente hasta la completa disolución del agar
3. Elabore tapones de algodón para cada erlenmeyeer. Luego de colocarlos cubra en
baño de agua caliente hasta la completa disolución del agar
4. Esterilice en autoclave a 121°C por 15 minutos
e) Agar Almidón (Peptona 1%, K2HPO4 0.5%buffer y fuente de fosforo, almidón 0.3%,
agar 1.5%)medio común, mixtra

1. Pese cuidadosamente el almidón necesario para preparar 100 ml de medio.

2. Coloque el polvo en un Erlenmeyer de 250 ml con un volumen pequeño del agua
destilada que ha mecido en la probeta
3. Caliente el recipiente con el almidón agitando constantemente hasta su disolución
4. Pese el resto de los ingredientes y agréguelos con la cantidad de agua destilada
restante
5. Licúe el medio al baño de agua caliente hasta la completa disolución del agar. Deje
enfriar ligeramente y ajuste el pH

f) Agar Gelatina (peptona 1.5%, extracto de levadura 0.3%, gelatina 0.4%, agar 1.5%)

1. Pese cuidadosamente la cantidad necesaria de cada ingrediente para preparar 100

ml de medio.
2. Coloque los ingredientes en un Erlenmeyer de 250 ml y agregue agua destilada
medida en probeta.
3. Lleve el recipiente a licuar en baño de agua en ebullición hasta la completa
disolución del agar. Deje enfriar ligeramente y ajuste el pH a 7
4. Acondicione su medio para esterilización como en los procedimientos anteriores.
Esterilice en autoclave a 121°C por 15 minutos.